HPLC法測定固經丸中芍藥苷的含量

魏莉本,黃 瑋

固經丸是經批準的醫院中藥制劑,由白芍等 15味中藥制成的丸劑,其中白芍具有清熱涼血活血,散瘀止痛等功效。為有效控制該品種的質量,對白芍的含量測定方法進行了試驗研究。結果表明,該法重現性好,操作簡便,可作為該品種的質量控制標準,現報告如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Waters 2695高效液相色譜儀,Waters 2996PDA檢測器,Empower系統工作站,AE-240S電子天平, TL-360型超聲波器。

1.2 試藥 芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供,供含量測定用,批號為 110736-200732),乙腈為色譜純,水為重蒸餾水,其它試劑均為分析純。固經丸：徐州市中醫院生產(批號 070421、070423、070424)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 ZORBAXSBC18色譜柱(4.6mm×150mm,5 m),乙腈-水(14：86)為流動相,流速1.0ml/m in,柱溫 32℃,檢測波長 230 nm,進樣量 10μl。理論板數按芍藥苷峰計算,小于 3000。

2.2 溶液的制備 (1)對照品溶液的制備：精密稱取芍藥苷對照品約 10mg置 100ml量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。(2)供試品溶液的制備：取本品研碎,取細粉 1.0 g,精密稱定,精密加甲醇 25ml,稱定重量,超聲處理30m in(功率250W,頻率 33 Hz),放冷,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液,即得[1]。(3)陰性對照溶液的制備：取不含白芍藥材的陰性對照制劑。取 1.0 g,精密稱定,按“2.2.2”項下方法操作,制得陰性對照溶液。

2.3 標準曲線的制備 精密稱定以五氧化二磷為干燥劑并減壓干燥15 h的芍藥苷適量,加甲醇制成每1m l含 0.0950 mg的溶液,作為貯備液。分別精密吸取貯備液 1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml置10ml量瓶中,加甲醇稀釋至刻度。再精密吸取上述溶液各 10μl,分別注入液相色譜儀,測定,測得峰面積。用峰面積(Y)與進樣濃度(X)進行線性回歸處理,得回歸方程Y=2.28×104+6.51×106X;相關系數r=0.9998。表明芍藥苷濃度在0.00950～0.07600mg/ml之間與峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 精密稱定芍藥苷對照品9.47mg,置100 m l量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取 5ml,置 10 m l量瓶中,用甲醇稀釋至刻度作為對照品溶液。精密吸取對照品溶液 10μl,連續進樣 6次,測定峰面積,結果 RSD為0.58%,表明精密度較好。結果見表 1。

表1 精密度試驗結果(n=6)

2.5 穩定性試驗 取同一批供試品(產品批號：070424),按供試品溶液制備方法制得供試品溶液。精密吸取 10μl,分別在 0、2、4、6、8、10、12 h進樣測定峰面積,結果RSD為 0.94%,表明供試品溶液在 12h內穩定。結果見表 2。

表2 穩定性試驗結果

2.6 重復性試驗 精密稱取同一批號樣品(070423)1.0 g共6份,按供試品溶液制備方法制備,進樣,測定,計算含量,RSD為0.60%(n=6),表明該方法的重現性良好。結果見表3。

表3 重復性試驗結果(n=6)

2.7 加樣回收試驗 精密稱取已知含量的同批號樣品(批號為 070424)6份,分別置具塞錐形瓶中,分別精密量取芍藥苷貯備液(濃度為0.0950mg/ml)5m l,精密加甲醇20ml,按供試品溶液制備方法制備,依法測定,計算回收率。結果見表4。

表4 加樣回收率試驗結果(n=6)

2.8 樣品測定 分別按“2.2”供試品溶液的制備項目項下操作制備不同批號(070421、070423、070424)的供試品溶液,在“2.1”項下色譜條件下進行測定。測定結果見表 5和圖 1。

表5 供試品含量測定結果

圖1 HPLC色譜圖

3 討論

提取溶劑的用量分別以 20、25、30ml的甲醇超聲提取,結果表明25ml即可提取完全。

提取時間的選擇分別考察超聲 30、40min不同時間芍藥苷的提取率,結果30min提取率與40min相同,因此確定提取時間為 30min。本文建立的方法簡便、快捷、準確率好、靈敏度高,可用于該制劑的質量控制。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社,2005：428.