慢性蕁麻疹患者血清二胺氧化酶活性和總IgE檢測及意義

張 敏 李桂珍 宋蒙蒙 張理濤

慢性蕁麻疹（chronic urticaria，CU）是皮膚科的常見病，患者幾乎每天均出現風團和瘙癢，病程超過6周。CU病因復雜，發病機制尚不明確，通常認為IgE介導的Ⅰ型變態反應和組胺的釋放是其發生的重要原因。血清IgE是一種親細胞性反應素型抗體，正常人血清中含量比較少且穩定，但在Ⅰ型變態反應中其血清IgE含量明顯增高。二胺氧化酶（di?amine oxidase，DAO）是一種催化組胺、腐胺等二胺類氧化生成醛的細胞內酶，是組胺等多胺物質的分解代謝酶，在哺乳動物組胺代謝中起著重要作用。本文通過研究慢性蕁麻疹患者血清中二胺氧化酶活性的變化及其與病情程度和評分的關系，探討二胺氧化酶活性改變及血清總IgE水平在慢性蕁麻疹中的意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選取2010年4月—11月于我院皮膚變態反應科的CU患者68例，男36例，女32例，年齡18～60歲，平均（36.82±11.94）歲，病程2個月～10年。納入標準：（1）病程超過6周。（2）反復起風團，持續時間≤24 h。（3）非異位性體質者。（4）年齡18～60歲。排除標準：（1）有食物、藥物等明確過敏原者。（2）有肝、腎等重要器官疾患，有精神神經病史及精神病家族史者。（3）物理性蕁麻疹和人工蕁麻疹者。（4）干預3 d內使用抗組織胺類、類固醇激素及免疫抑制藥物者。另選同期于我院健康體檢者54例為健康對照組，男30例，女24例，年齡23～67歲，平均（39.45±9.83）歲，均無慢性過敏性疾病史、精神神經疾病及精神病家族史。2組性別（χ2=0.602）、年齡（t=0.741）差異均無統計學意義（均P＞0.05）。

1.2 二胺氧化酶的測定 參照參考文獻[3]，2組受試者均常規取外周靜脈血3 mL，離心收集血清500 μL，-70℃保存。血清DAO活性應用分光光度法測定，波長436 nm處分別測定在1、1.5、3 h的DAO活性。DAO標準品、辣根過氧化物酶、鄰聯茴香胺及戊二胺均購自美國Sigma公司。

1.3 血清總IgE測定 采用酶聯免疫吸附法，取所需用量的反應微孔條標記后，加入25 μL的IgE標準品、質控血清和待測標本，加入100 μL磷酸鹽緩沖液，充分混勻，室溫孵育15 min，用蒸餾水1∶10稀釋洗液后，流水沖洗，加入100 μL含抗人IgE單克隆抗體與辣根過氧化酶的結合物，混勻，室溫孵育20 min，沖洗，干燥，加入含過氧化氫和色素基質的顯色液，避光放置15 min，終止反應30 min內，在450 nm波長讀取吸光度（OD）值。

1.4 蕁麻疹分級及其活動評分 根據Tedeschi等[1]報道方法，依據其風團大小對慢性蕁麻疹進行分級。同時依據2009年EAACI等組織制定的蕁麻疹治療指南，對慢性蕁麻疹患者的風團和瘙癢2個主要癥狀進行蕁麻疹活動評分（urticaria activity score，UAS），總分值為0～6分[2]。0分為無團，無瘙癢；一級（1分）1～10個小風團（輕度，直徑＜3 cm），瘙癢輕度，不煩躁；二級（2分）10～50個小風團或1～10個大風團（中度，直徑≥3 cm），瘙癢中度，尚能忍受；三級（3分）＞50個小風團或＞10個大風團，重度，瘙癢重度，不能忍受。

1.5 統計學方法 采用SPSS 17.0統計軟件進行分析。計量資料以±s表示，組間比較采用重復測量資料方差分析或t檢驗，計數資料組間比較用卡方檢驗，采用Spearman和Pear?son相關性分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.12 組不同時點血清DAO活性的比較 慢性蕁麻疹組血清DAO的活性在3個不同的時點均低于健康對照組，且其活性在1、1.5及3 h逐漸升高。2組患者血清DAO活性時間與組間效應差異均有統計學意義（P＜0.01），且分組與時間有交互作用（均P＜0.01），見表1。

2.2 DAO活性與蕁麻疹分級及其活動評分的相關性 DAO活性與慢性蕁麻疹的輕、中、重度呈正相關（rs=0.254，P＜0.05），與UAS評分無相關性（rs= 0.196，P＞0.05），見表2。

2.3 血清總IgE的測定結果 血清總IgE＜175 IU/mL水平上，慢性蕁麻疹組32例（47.06%）和健康對照組的45例（83.33%）差異有統計學意義（χ2=14.933，P＜0.01）。

表1 2組不同時間點血清二胺氧化酶活性的比較（U/mL，±s）

表1 2組不同時間點血清二胺氧化酶活性的比較（U/mL，±s）

F時間=69.715，F組間=30.679，F交互=43.547，均P＜0.01

組別慢性蕁麻疹組健康對照組n 68 54 1 h 3.02±2.17 3.14±1.96 1.5 h 3.36±1.94 6.30±2.34 3 h 3.37±1.70 5.54±1.82

表2 68例慢性蕁麻疹分級、活動評分與DAO范圍

2.4 血清總IgE與蕁麻疹分級 血清總IgE＜175 IU/mL時，其與慢性蕁麻疹的輕、中、重度分級無相關性（rs=0.125，P＞0.05），血清總IgE≥175 mIU/L時，其與病情分級呈正相關（rs=0.539，P＜0.05），見表3。

表3 68例慢性蕁麻疹分級與血清總IgE水平（IU/mL，±s）

表3 68例慢性蕁麻疹分級與血清總IgE水平（IU/mL，±s）

蕁麻疹分級輕度中度重度n 15 36 17總IgE＜175 IU/mL 159.32±34.87 155.61±27.30 160.12±18.21總IgE≥175 IU/mL 199.23±23.03 230.47±30.39 302.15±29.86

2.5 血清總IgE與DAO的相關性 血清總IgE（201.63±35.09）IU/mL與DAO活性（3.46±1.84）U/ mL無相關性（r=0.183，P＞0.05）。

3 討論

有研究認為，慢性蕁麻疹速發相反應與組胺釋放密切相關[4]。哺乳動物體內組胺的分解代謝主要有2種途徑，一是可以在DAO的作用下氧化脫氨基，二是被組胺-N-甲基轉氧酶（HNMT）甲基化，而組胺的定位則決定了其分解的方式[5]。DAO亦稱組胺酶，是組胺在體內分解代謝的主要酶，也是具有高度活性的細胞內酶。正常狀態下其存在于哺乳動物小腸黏膜絨毛上層，腎和胎盤組織高度表達，而在大多數組織中DAO的活性僅僅達到檢測極限[6]。近年來，有研究認為組胺不耐受，產生的原因是由于組胺累積和組胺降解能力的不平衡所引起，最終導致組胺在體內過量，引起腹瀉、哮喘、蕁麻疹等臨床癥狀[7]。

本研究表明患者的血清DAO活性在1、1.5及3 h均低于健康對照組，且2組在時間與組間比較均有統計學意義，表明在患者體內DAO活性與健康人存在差異，這與Lessof等[8]研究相近。考慮原因為其活性較低，導致體內的組胺不能有效地分解代謝，在體內蓄積，從而產生相應的臨床癥狀，導致了蕁麻疹的發生或遷延。進一步分析表明，DAO活性與其病情的輕、中、重度存在一定的相關性，表明DAO在病情的發展階段可能起到了一定的作用。新近研究亦表明，一些藥物和食物可以影響DAO活性，進而影響到組胺的代謝，起到加重或誘發蕁麻疹的作用[7]。本項研究未發現UAS與DAO有相關性，可能與筆者采用的是瞬間評分法有關。有研究認為，對于UAS的測定應該為期1周，其值相加為最后的結果[9]，而本研究由于受患者隨訪所限，沒有對其進行加權處理，尚有待進一步研究深化。

血清IgE作為介導Ⅰ型變態反應的主要抗體，在變態反應疾病中起關鍵作用，患者血清IgE含量的變化與患者體內發生蕁麻疹的嚴重程度和持續時間有關[10]。本研究結果顯示，當血清總IgE≥175 IU/ mL時，其與慢性蕁麻疹的輕、中、重度成正相關，但血清總IgE與DAO之間未發現存在相關性，表明兩者雖對蕁麻疹的發生、發展起到一定的作用，但彼此間并無必然的聯系。

[1]Tedeschi A,Asero R,Lorini M,et al.Plasma levels of matrix metal?loproteinase-9 in chronic urticaria patients correlate with disease severity and C-reactive protein but not with circulating hista?mine-releasing factors[J].Clin Exp Allergy,2010,40(6):875-881.

[2]Zuberbier T,Asero R,Bindslev-Jensen C,et al.EAACI/GA(2)LEN/ EDF/WAO guideline:definition,classification and diagnosis of urti?caria[J].Allergy,2009,64(10):1417-1426.

[3]黎君友，于燕，郝軍，等.分光光度計法測定血和小腸組織二胺氧化酶活性[J].氨基酸和生物資源，1996，18(4)：28-30.

[4]Kanny G,Moneret-Vautrin DA,Schohn H,et al.Abnormalities in histamine pharmacodynamics in chronic urticaria[J].Clin Exp Aller?gy,1993,23(12):1015-1020.

[5]Kuefner MA,Schwelberger HG,Weidenhiller M,et al.Both catabol?ic pathways of histamine via histamine-N-methyltransferase and di?amine oxidase are diminished in the colonic mucosa of patients with food allergy[J].Inflamm Res,2004,53(Suppl 1):S31-S32.

[6]Klocker J,M?tzler SA,Huetz GN,et al.Expression of histamine de?grading enzymes in porcine tissues[J].Inflamm Res,2005,54(Sup?pl 1):S54-S57.

[7]Maintz L,Novak N.Histamine and histamine intolerance[J].Am J Clin Nutr,2007,85(5):1185-1196.

[8]Lessof MH,Gant V,Hinuma K,et al.Recurrent urticaria and re?duced diamine oxidase activity[J].Clin Exp Allergy,1990,20: 373-376.

[9]M?ynek A,Zalewska-Janowska A,Martus P,et al.How to assess dis?ease activity in patients with chronic urticaria[J]?Allergy,2008,63 (6):777-780.

[10]Kessel A,Helou W,Bamberger E,et al.Elevated serum total IgE--a potential marker for severe chronic urticaria[J].Int Arch Allergy Im?munol,2010,153(3):288-293.