血清、精液抗精子抗體檢測方法評價

陳雪峰 朱衛中

1.浙江省麗水市碧湖醫院檢驗科(323006);2.浙江省麗水市人民醫院生殖中心

免疫性不育是男性不育的重要病因之一,而抗精子抗體(AsAb)檢測是診斷免疫性不育的主要方法。AsAb檢測方法可分間接法和直接法,間接法是檢測患者血清中抗體,目前普遍使用的是酶聯免疫吸附試驗(ELISA);直接法是檢測精液中精子膜表面結合的 AsAb,其方法有精子凝集的顯微鏡觀察法、混合抗球蛋白反應試驗(MAR)和免疫珠試驗(IBT),其中MAR和 IBT為世界衛生組織(WHO)推薦方法,是診斷 AsAb引起男性免疫性不育的金標準[1]。為評價ELISA法和精子凝集顯微鏡觀察法的診斷結果,本文對 524例男性不育癥患者進行了相關的檢測和分析。

1 對象與方法

1.1 對象

2008年 1月 ～2010年 6月接受人工授精治療的524例男性病例,年齡 22～39歲,術前進行精液常規分析、血清 AsAb等常規檢測。對精液中存在精子凝集或血清 AsAb陽性患者,用 MAR確認。

1.2 方法

1.2.1 顯微鏡觀察 參照 WHO精液分析手冊方法[1]進行。取液化精液 1滴于載玻上并覆以蓋玻片,高倍鏡鏡下觀察 10個視野,發現有活動精子以頭對頭、尾對尾或混合型粘附為精子凝集。1.2.2血清 ELLSA 使用深圳安群生物工程有限公司產品,聯合檢測血清中 IgM-AsAb、IgAAsAb和 IgG-AsAb,單項、兩項或三項陽性者均為 AsAb陽性。參照試劑說明書操作。

1.2.3 MAR 使用安徽安科生物工程有限公司產品。取液化精液 20μl于載玻上 ,加 20μl人IgG致敏的綿羊 RBC混勻 15s,加 20μl抗人 IgG混勻,覆以蓋玻片,3m in后高倍鏡計數 200個活動精子。若粘附有致敏紅細胞的活動精子 ＞10%,為 MAR陽性 。

1.2.4 統計學方法 采用 SPSS12.0統計軟件進行相關分析。

2 結果

2.1 3種方法陽性檢出率比較

MAR陽性檢出率為 5.2%(27例),與血清AsAb檢測、顯微鏡觀察法(16.6%,12.2%)比較差異均有統計學意義(P＜0.01)。

2.2 3種方法檢測結果比較

見表 1。

表 1 3種檢測方法結果比較

血清 ELISA法檢測 AsAb的靈敏度、特異度、假陽性率和假陰性率分別為 66.7%、86.1%、13.9%和 33.3%,而顯微鏡觀察法分別為 88.9%、91.8%、8.0%和 11.1%,后者優于前者(P＜0.05)。

3 討論

AsAb是由精子或精子膜抗原誘發機體產生的特異性抗體,其主要成分為 IgM、IgA和 IgG,分循環精子抗體和局部精子抗體兩類,前者存在于血液,主要是 IgM和 IgG;后者存在于生殖道,新鮮精子表面附著的 AsAb主要是 IgA和 IgG[2,3]。精漿的 AsAb檢測比單純血清中的 AsAb檢測更有臨床價值：血清中出現 AsAb并不意味著在精液中也出現 AsAb,一般來說血清中抗體效價越高,精液中越可能出現抗體,大部分研究者認為只有當抗體出現在精子表面才有臨床意義[3]。本文血清 AsAb檢測陽性率為 16.6%,但精液 MAR陽性率僅 5.2%,表明多數血清 AsAb陽性患者的精子膜表面結合抗體檢測并無異常。目前,不少生殖中心不再將血清 AsAb作為評判男性免疫性不育的指標。

精液中的 AsAb通常以結合狀態存在于精子膜表面,檢測精子膜表面的 AsAb具有重要意義。WHO推薦用 MAR和 IBT法檢測精子膜表面結合的 AsAb,其理由：①檢測標本為活精子,更有臨床意義;②可以對精子表面結合抗體進行定位;③檢測過程保持被測精子膜的完整性,檢測更具特異性[4]。但 MAR和IBT法檢測成本較高,需要有一定的技術和經驗,較難在非專科的實驗室常規開展。

精子凝集是指活動精子以不同方式彼此粘在一起的現象,提示精子表面可能存在結合抗體,但是精液不液化、高黏度、黏液絲等也可以造成非特異性凝集。本文結果表明：顯微鏡觀察法的靈敏度、特異度、假陽性率和假陰性率均優于 ELISA,精子凝集是 As-Ab較理想的篩選指標。

精子凝集是精液分析的一項常規內容,不需要附加其它操作和耗材。在精液常規分析的過程中,應規范技術操作,盡量排除非特異性凝集的干擾,同時需要有認真細致的工作作風,及時發現精子凝集現象,提供有價值的免疫性不育的診斷線索。開展 MAR或 IBT的實驗室,可以將精子凝集作為篩查項目,若有精子凝集,再行 MAR或 IBT確診試驗。

1 世界衛生組織.WHO人類精液及精子 -宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊[M].第 4版.北京：人民衛生出版社,2001：12-52.

2 施云飛,茅擁軍.不育癥患者抗精子抗體檢測及其臨床評價[J].中國男科學雜志,1995,9(2)：117-119.

3 楚稚玲,岳林.精子表面抗精子抗體與不育男性精液參數的臨床分析[J].中國計劃生育學雜志,2004,12：162-164.

4 劉瑜,何林.男性不育癥幾種實驗診斷項目的評價與選擇[J].中國男科學雜志,2004,18(2)：70-72.