T細胞亞群在再生障礙性貧血外周血的表達及臨床意義

王良妥，張湘蘭，譚日標

(陽江市人民醫院，廣東 陽江 529500)

T細胞亞群在再生障礙性貧血外周血的表達及臨床意義

王良妥，張湘蘭，譚日標

(陽江市人民醫院，廣東 陽江 529500)

目的探討再生障礙性貧血治療前后外周血T細胞亞群、腫瘤壞死因子(TNF-α)及HLA-DR抗原的變化。方法選取2008-2010年于我院住院治療的38例再生障礙性貧血患者為觀察組，以同期門診體檢30例健康者做為對照組。采用流式細胞儀檢測兩組T淋巴細胞亞群及HLA-DR抗原，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測TNF-α。結果與對照組相比，觀察組治療前、顯著降低，差異有統計學意義(P＜0.01)；、HLA-DR及TNF-α水平顯著高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)。治療后觀察組、顯著上升、HLA-DR及TNF-α水平顯著下降，與治療前相比差異有統計學意義(P＜0.05)。結論再障患者發病與免疫功能異常密切相關，存在T淋巴細胞亞群的失調及T淋巴細胞異常活化。

再生障礙性貧血；T細胞亞群；腫瘤壞死因子；HLA-DR

再生障礙性貧血(AA)是較為常見且嚴重的血液病之一，其發病機制復雜、病因未明。目前認為：由免疫介導的造血功能抑制在再生障礙性貧血的發病過程中起重要作用，而T淋巴細胞是細胞免疫反應中的主要效應細胞[1-2]。為探討再生障礙性貧血外周血T細胞亞群、腫瘤壞死因子(TNF-α)及HLA-DR抗原的變化，我們對2008-2010年于我院住院治療的38例再生障礙性貧血患者分析如下：

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2008年8月至2010年8月于我院住院治療的38例再生障礙性貧血患者為觀察組，年齡15～68歲，平均32歲。其中男23例，女15例；重型再生障礙性貧血(SAA)25例，慢性再生障礙性貧血(CAA)13例。患者自發病至住院時間為18 d～25個月，所有患者均符合全國再障診斷標準。選取同期門診體檢的30例健康者為對照組，年齡16～70歲，平均33歲，男18例，女12例。兩組在年齡、性別差異無統計學意義(P＞0.05)。

1.2 檢測方法

1.2.1 T淋巴細胞亞群及HLA-DR檢測 取外周靜脈血4 ml，乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝，取4個FACS試管，分別向其中加入組合的熒光CD3、CD4、CD8和HLA-DR抗體，再加入抗凝全血100 μL，孵育15 min后加溶血劑，等完全溶血后立即上流式細胞儀檢測。

1.2.2 外周血TNF-α檢測 抽取外周靜脈血8 ml，EDTA抗凝后將血液離心，取上清，放置-20℃冰箱待用。按說明書采用ELISA法進行檢測。

1.3 治療方法 普通型再障給予丙酸睪丸酮或康力龍加環胞菌素治療；重型再障給予環胞素(CSA)、抗胸腺淋巴細胞球蛋白(ATG)加康力龍治療。按血液病診斷及療效標準評估治療效果。基本治愈、明顯緩解加明顯進步為治療有效。

1.4 統計學處理 處理數據采用SPSS13.0統計軟件，計數資料用均數±標準差(±s)表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 觀察組治療前與對照組在T細胞亞群、HLA-DR及TNF-α平比較 與對照組相比，觀察組治療前顯著降低，差異有統計學意義(P＜0.01)；、HLA-DR及TNF-α水平顯著高于對照組，差異有統計學意義(P＜0.01)，見表1。

2.2 治療前觀察組SAA與CAAT細胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較 較CAA患者，SAA患者顯著降低，、HLA-DR及TNF-α水平顯著升高，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 觀察組臨床療效及治療前、后T細胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較 38例治療組患者經治療臨床基本治愈5例，明顯緩解13例，明顯進步8例，無效12例，總有效率為68.4%。和治療前相比，治療后觀察組、顯著上升，CD8+、HLA-DR及TNF-α水平顯著下降，與治療前相比差異有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表1 兩組T細胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較()

表2 SAA與CAAT細胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較(±s)

表2 SAA與CAAT細胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較(±s)

注：與CAA相比，*P＜0.01。

組別CAA SAA例數13 25 CD3+(%) 63.16±8.32 64.42±7.18 CD4+(%) 35.68±6.82 28.35±7.21* CD8+(%) 29.98±5.76 37.20±5.97* CD4+/CD8+ 1.35±0.72 1.09±0.36* HLA-DR(%) 12.10±3.78 18.26±4.15* TNG-α(μg/L) 0.82±0.28 1.19±0.32*

表3 觀察組治療前后T細胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較（±s）

表3 觀察組治療前后T細胞亞群、HLA-DR及TNF-α水平比較（±s）

注：與治療前相比，*P＜0.01。

時間治療前治療后例數38 38 CD3+(%) 64.24±7.67 63.87±7.18 CD4+(%) 31.78±7.80 38.19±8.12* CD8+(%) 31.67±6.96 24.25±5.27* CD4+/CD8+ 1.21±0.37 1.64±0.47* HLA-DR(%) 16.72±3.15 10.26±3.17* TNF-α(μg/L) 0.91±0.38 0.71±0.18*

3 討論

再生障礙性貧血的發病機制目前不是很清楚，最近的研究表明再障患者的發病與T淋巴細胞亞群數量、比例失調、功能和表型明顯改變有關[3]。表1可見，觀察組治療前顯著降低，差異有統計學意義(P＜0.01)。T細胞是機體免疫系統中的主要效應細胞與對于維持機體免疫狀態平衡起重要作用，二者作用相反[4-5]。輔助造血抑制造血顯著降低說明機體造血功能抑制增強。抑制造血的作用主要是通過細胞毒作用直接抑制骨髓造血干細胞增殖，同時它也可以通過大量分泌細胞因子間接抑制造血功能。HLA-DR存在于巨噬細胞、B淋巴細胞、T淋巴細胞表面，除具參與抗原提呈外，還具有激活同種異型免疫反應作用，是T淋巴細胞活化的標志之一[6]。TNF-α主要存在于和細胞的胞漿中，再障患者骨髓中高水平的TNF-α主要由活化的T淋巴細胞產生[7]。觀察組、HLA-DR及TNF-α水平顯著高于對照組，說明T細胞亞群及活化T細胞的變化，引起淋巴因子的分泌失衡，產生過量的造血抑制性淋巴因子，參與再生障礙性貧血的發病過程。再障患者骨髓造血衰竭與活化細胞毒性T淋巴細胞有關，活化的T淋巴細胞釋放出TNF-α、IFNγ等造血負調控因子，使機體造血抑制活性明顯增強，導致骨髓造血功能衰竭。由表2可見，重型再障患者與慢性再障患者相比，CD8+顯著降低、HLA-DR及TNF-α水平顯著升高，差異有統計學意義(P＜0.05)，這更有力地證實了T淋巴細胞介導的免疫反應在再障發病機制中發揮重要作用。經免疫治療后，表3結果顯示，再障患者和治療前相比，治療后觀察組、顯著上升、HLA-DR及TNF-α水平顯著下降，與治療前相比差異有統計學意義(P＜0.05)。經免疫治療后，患者輔助T細胞功能增強，細胞免疫功能得到調節。免疫治療能夠顯著抑制T淋巴細胞活化，減少異常增多的、調節比例。同時通過減少TNF-α等造血負調控因子，使造血抑制作用減弱，從而使造血功能恢復。有研究證實，免疫治療對于治療重型再障有效率可達60%左右，很大程度上改善了藥物療效，特別是遠期療效，提高了患者的長期生存率及生存質量[8]。

綜上所述，再障患者發病與免疫功能異常密切相關，T淋巴細胞亞群的失調及T淋巴細胞異常活化在發病機制中發揮重要作用。

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Expression of T-lymphocyte subsets and its clinical significance in aplastic anemia.

WANG Liang-tuo,ZHANG Xiang-lan,TAN Ri-biao.People's Hospital of Yangjiang City,Yangjiang 529500,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the changes of T-lymphocyte subsets,tumor necrosis factor(TNF-α) and HLA-DR before and after the treatment of aplastic anemia.Methods38 cases with aplastic anemia from 2008 to 2010 in our hospital were selected as the study group,while 30 healthy subjects were chosen as the control group. T-lymphocyte subsets and HLA-DR,TNF-α in the two groups were detected by Flow Cytometry(FCM)and ELISA, respectively.ResultsBefore the treatment,the serumandlevel in the study group were significantly lower than that in the control group(P＜0.01),and theHLA-DR and TNF-α level were significantly higher(P＜0.01).After the treatment,theandlevel in the study group increased and the,HLA-DR and TNF-α level decreased,with statistically significant difference compared with that before the treatment(P＜0.05). Conclusion The maladjustment of immune system is closely related to the incidence of aplastic anemia,exibiting disbalance of T-lymphocyte subsets and abnormal activation of T cells.

Aplastic anemia;T-lymphocyte subsets;Tumor necrosis factor;HLA-DR

R556.5

A

1003—6350（2011）14—093—03

王良妥（1977—），男，廣東省陽江市人，主治醫師，本科。

2011-04-12)

·檢驗與臨床·