和腎絡顆粒芍藥苷含量測定研究

張偉 于爽 孫晶 張云麗 于俊生

(山東省青島市海慈醫療集團 山東青島 266033)

和腎絡顆粒是我院中藥自制制劑,由赤芍、白術、制大黃等八味中藥組成,具有和絡泄濁功效;用于早、中期慢性腎功能衰竭等病癥,療效確切。本文對該制劑主要功效成分芍藥苷含量進行含量測定方法研究,為制備工藝和質量標準制定提供依據。

1 主要儀器、試劑與藥材

Agilent 1100型高效液相色譜儀,芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所)(批號:110736-200320),色譜純乙腈(美國天地試劑公司),乙醇為藥用,水為重蒸餾水,其余試劑均為分析純。和腎絡顆粒由本院制劑室提供,陰性對照品實驗時先制,藥材購自本院中藥房。

2 方法與結果

(1)色譜條件:色譜柱:DiamonsilC18柱(150mm×4.6mm,5μm),流動相:乙腈-水(16∶84)為流動相,流速:1mL·min-1,柱溫:25℃,檢測波長:230nm。

(2)對照品溶液的制備:精密稱取芍藥苷對照品5.2mg,加甲醇定溶于10mL容量瓶中,配成0.52mg·mL-1的對照品溶液。

(3)供試品溶液的制備:取和腎絡顆粒10g,研細,精密稱重,置具塞錐形瓶中,精密加入50%甲醇溶液25mL,稱重,浸泡1hr,超聲處理30min,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,取續濾液10mL,揮干,殘渣用1mL50%甲醇溶解,即為供試品溶液。

(4)陰性對照溶液的制備:取不含赤芍的處方比例量的其他藥材,按制備工藝制備成陰性對照品顆粒,照“2.3”項方法制成陰性對照溶液。

(5)系統適應性試驗:按“2.1”項下條件,將對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液分別進樣10μl進行測定,結果對照品溶液和供試品溶液色譜圖在相應的保留時間處均有最大吸收峰,供試品溶液相鄰峰無干擾;陰性樣品色譜圖中,在與對照品色譜相應的保留時間處無色譜峰出現,表明該制劑中其他組分對芍藥苷的測定無干擾。

(6)方法學考察:①線性關系考察:精密吸取濃度為0.52mg·mL-1的對照品溶液0.5、1、2、4、6、8、10μL進樣,測得峰面積,以對照品含量為橫坐標,峰面積為縱坐標,計算回歸方程為(Y=1189X+35,r=0.9998),表明芍藥苷進樣量在0.26～4.68μg范圍內呈良好的線性關系。②精密度試驗:精密吸取對照品溶液(0.52mg·mL-1)2μL,連續進樣5次,測定芍藥苷峰面積RSD為1.60%(n=5)。精密度良好。③重復性試驗:精密稱定研細的同一批(070901)樣品粉末10.0g共5份,按“2.3”項方法制備5份樣品溶液,各吸取20μL進樣測定,阿魏酸含量RSD值為0.99%(n=5)。表明方法重復性較好。④穩定性考察:精密吸取對照品溶液(0.52mg·mL-1)2μL,分別于配制后0、2、4、8、16、24h進樣,結果峰面積RSD為1.81%,表明供試品溶液在24h內穩定。

3 結語

高效液相色譜法含量測定研究,成功的關鍵是流動相的選擇,它要求在某一檢測波長下,樣品液和腎絡顆粒有8味中藥組成,化學成分復雜,檢測易受干擾,參照有關文獻,我們先后對比試驗了乙腈∶水=16∶84[1～3],甲醇-水(32∶68)[4],甲醇-水(25∶75)[5]等流動相,結果流動相為乙腈∶水=16∶84的樣品液色譜圖有較好的峰型和分離度,同等條件下陰性對照液無吸收峰。所以確定乙腈∶水=16∶84為芍藥苷含量測定的流動相。

本實驗建立的高效液相色譜法測定和腎絡顆粒中芍藥苷的含量,方法簡便、準確,分離效果好,無干擾,為制備工藝研究和成品質量標準評價提供一種有效可行的方法。

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