實驗用猴腦脊液采集技術方法的創新

陳 霆，叢 喆，魏 強

(中國醫學科學院醫學實驗動物研究所，衛生部人類疾病比較醫學重點實驗室，國家中醫藥管理局人類疾病動物模型三級實驗室，北京 100021)

實驗用猴腦脊液采集技術方法的創新

陳 霆，叢 喆，魏 強

(中國醫學科學院醫學實驗動物研究所，衛生部人類疾病比較醫學重點實驗室，國家中醫藥管理局人類疾病動物模型三級實驗室，北京 100021)

腦脊液在艾滋病的研究中有著重要的意義。近年來腦脊液的檢測逐步成為SIV/SHIV感染猴模型研究和應用中的重要指標。傳統的采集方法不易學習和掌握。針對上述情況我們優化了腦脊液的采集方法，優化后的方法明顯縮短穿刺時間，顯著提高成功率。

腦脊液;腦脊液采集;方法改進

腦脊液(cerebrospinal fluid，CSF)為無色透明的液體，充滿在各腦室、蛛網膜下腔和脊髓中央管內［1］。由腦室中的脈絡叢產生，與血漿和淋巴液的性質相似。它供應腦細胞一定的營養，運走腦組織的代謝產物，調節著中樞神經系統的酸堿平衡。并緩沖腦和脊髓的壓力，對腦和脊髓具有保護和支持作用。在艾滋病研究中發現，HIV-1具有嗜神經的特點，可依靠突變而獲得親神經的特異性變種，HIV可在中樞神經系統內長期存活，并直接感染而造成許多損害，同時，神經組織還可以作為病毒儲存的地方［2］。因此，腦脊液的檢查，包括細胞涂片染色，病毒分離和培養，載量的測定，蛋白水平的評價等，在艾滋病研究中有著重要的意義，是 SIV/SHIV感染猴模型研究和應用中的重要指標。

恒河猴腦脊液的采集主要集中在腰椎穿刺采集，特殊情況下可由小腦延髓池或側腦室穿刺獲取［3］。操作過程中要保證穿刺進針的方向和力度，否則很容易損傷脊髓，抽出渾濁的腦脊液或者帶血的腦脊液，影響樣品的質量。

傳統方法中，動物麻醉后取側臥位固定(圖1)，使頭部及尾部向腰部盡量彎曲，使腰部拱起。在動物背部第七腰椎間隙垂直刺入，當有落空感及動物的后肢跳動時，表明針已達椎管內(蛛網膜下腔［4］)。此時，觀察是否有腦脊液流出。如果穿刺時有創傷，CSF可能稍帶血色。收集CSF時，CSF應清澈無血，除非存在蛛網膜下腔出血。如果腦脊液流出不暢，可將針頭旋轉90度，因為針頭開口處可能被神經根堵塞或者是沒有刺破蛛網膜。

采用傳統的穿刺方法采集腦脊液對于新人來說不易學習和掌握。因為沒有專用的動物固定裝置，猴子側臥位不易固定，需要有實驗人員輔助，由此也導致實驗人員在穿刺時不易發力，穿刺針經常出現左右晃動的情況難以刺穿動物皮膚。即使成功刺穿皮膚，在穿透皮下組織和韌帶時也極易發生滑動，造成穿刺不成功。

針對上述情況我們做了兩點針對性改進：首先，我們嘗試使用復方氯胺酮代替鹽酸氯胺酮進行麻醉(主要成分是：鹽酸氯胺酮、鹽酸二甲苯噻嗪、鹽酸苯乙哌酯)。鹽酸二甲苯噻嗪為鎮痛性化學保定藥，比氯胺酮有明顯的鎮痛、鎮靜及中樞性肌松作用。兩者配伍制成復方制劑麻醉效果好于鹽酸氯胺酮麻醉效果，麻醉的時間延長，且實驗猴的肌肉能夠更好地放松，有利于穿刺針的進入。其次，我們調整了實驗猴的固定姿勢，不再采用傳統的側臥位固定，而是讓實驗猴雙腿盤坐(圖2)，上身順勢趴下，用其雙腿固定上身不會左右晃動，脊椎自然突起，動物背部髂骨連線中點稍向下方第七腰椎間隙(第七腰椎與第一薦骨之間)正好處于最高處(圖3)。實驗猴的這種臥姿最大限度地保證了固定的效果，而且實驗人員在實驗猴正上方操作，能更好地發力。猴子固定好以后，第七腰椎與第一薦骨非常明顯，剪去背毛用3%碘酊和75%酒精嚴格消毒后，用左手拇指、食指固定號穿刺部位的皮膚，右手持腰穿刺針垂直刺入(圖4)，可以更加明顯的體會到落空感及動物的后肢跳動。當有落空感時，表明針已達椎管內(蛛網膜下腔)。此時慢慢將猴上身直立，然后抽出穿刺針芯，可見透明的腦脊髓液慢慢滴出(圖1～4見文后彩插3)。

脊髓穿刺技術經過改進后，非常利于新手的學習和掌握，更加重要的是穿刺時間明顯縮短，成功率明顯提高。

［1］ Jay A.Levy，著，邵一鳴，譯.艾滋病病毒與艾滋病的發病機制［M］.北京：科學出版社.2010：38-40.

［2］ 王佑春，主編.艾滋病實驗室檢測技術與質量保證［M］.北京：科學出版社.2009：66.

［3］ 楊之蘭，肖明英，趙祥，等.側入法和直入法腰椎穿刺285例臨床觀察［J］.大理學院學報，2006，12(5)：28-29.

［4］ 田野，黎蘭芝，陳強，等.提高腰椎穿刺成功率的體會［J］.現代醫藥衛生，2004，14(20)：1393-1394.

Improvement of the Collection Technique of Cerebrospinal Fluid in Monkeys

CHEN Ting，CONG Zhe，WEI Qiang
(Key Laboratory of Human Diseases Comparative Medicine，Ministry of Health;Institute of Medical Laboratory Animal Science，Chinese Academy of Medical Sciences;Key Laboratory of Human Diseases Animal Models，State Administration of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100021，China)

Cerebrospinal fluid，plasma and lymph have a similar nature，and have important significance in AIDS research.In recent years the detection of cerebrospinal fluid has gradually become an important indicator in research and application of SIV/SHIV infection models in monkeys.The traditional puncture method of cerebrospinal fluid collection is not easy to learn and master.In this paper we report the results of our technical optimization for the collection of cerebrospinal fluid in monkeys.This method has significantly improved the successful rate and much shortened the time spent in collection of cerebrospinal fluid in monkeys.

Cerebrospinal fluid;Fluid collection;Improvement，technique

R33

A

1671-7856(2011)02-0049-02

2010-10-09

10.3969/j.issn.1671.7856.2011.02.11

科技重大專項(項目號2009ZX10004-402)，NIH項目(3 R01 DA020419-02S1)。

陳霆(1985-)，男，從事實驗動物病毒分子生物學研究工作。

魏強，教授，博士生導師，研究方向：實驗動物病毒學。E-mail：weiqiang0430@sohu.com.