濁度法測定氯霉素注射液的效價

陸 娟 錢 梅

（湖北省襄陽市食品藥品檢驗所，湖北 襄陽 441021）

氯霉素是由委內瑞拉鏈絲菌產生的抗生素，屬廣譜抑菌劑。在執行標準[1]中，試驗人員常采用管碟法測定其效價，管碟法的特點是結果比較穩定，適用于各種抗生素效價的測定，但操作繁瑣、影響因素多、耗時長；采用濁度法可克服上述不足。筆者參考其它文獻[2]，對濁度法測定氯霉素注射液效價的方法與管碟法進行了比較，結果基本一致，表明濁度法用于本品的效價測定快速準確，切實可行。

1 儀器與試藥

WBS - 100微生物比濁法測定儀（北京先驅威鋒技術開發公司） ;ZY - 300Ⅳ多功能微生物自動測量分析儀（北京先驅威鋒技術開司）；MettlerAL-204電子天平；金黃色葡萄球菌 [CMCC（B） 26003]、大腸埃希菌[CMCC（B）44103]；藤黃微球菌[CMCC（B）28001]和氯霉素標準品（批號：0303-9613，每毫克相當于994單位）均由中國藥品生物制品檢定所提供。營養瓊脂培養基（批號: 101105，北京三藥）與抗生素檢定培養基Ⅲ（批號: 1008232，北京三藥）。0.9%滅菌氯化鈉溶液和磷酸鹽緩沖溶液（pH7.0）均按文獻[3,4]的方法配制。氯霉素注射液（規格: 2mL：0.25g ；批號：101101，濮陽市匯元藥業有限公司；批號：100911，安徽城市藥業有限責任公司；批號：11042812，上海現代哈森（商丘）藥業有限公司）。

2 方法與結果

2.1 標準品溶液的制備

精密稱取氯霉素標準品適量，少量乙醇溶解后，用滅菌水制成1000U/mL的溶液，備用。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取氯霉素注射液5mL，用滅菌水制成1000U/mL的溶液，備用。

2.3 培養基的制備

取金黃色葡萄球菌，接種于營養瓊脂斜面上，置35℃培養約20h，用0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下并稀釋，使其在580nm波長處的吸光度約為1.0。取菌液 0.6mL，加至100mL抗生素培養基中，搖勻，為含菌培養基。

2.4 方法學考察

2.4.1 線性試驗

精密量取標準品溶液適量，用磷酸鹽緩沖液（ pH7.0）按劑距比1∶1.25進一步稀釋成5.0、6.2、7.8、9.8、12.2、15.3U/mL的溶液，分別量取1.0mL置石英杯中，再加入含菌培養基9.0mL，石英杯按拉丁方陣排列，置微生物比濁法測定儀內，于37℃培養4h。另取兩支石英杯，一支加入1.0mL緩沖液和9.0mL含菌培養基，作為陽性對照；另一支加入1.0mL緩沖液和9.0mL空白培養基，作為空白對照。儀器在線于530nm處測定不同培養時間下的吸光度（A）。培養4h時，以A對濃度（C）的對數進行回歸計算，線性方程：A= -0.1979lgC +0.4448，r=0.9980，表明濃度在5.0～15.3U/mL范圍內，A與IgC呈良好的線性關系，故選定濃度8.0、12.0U/mL為試驗濃度。

2.4.2 回收率試驗

以等比例量取氯霉素標準品和氯霉素注射液適量，用滅菌水配置成80%、100%、120% 濃度的溶液，每個濃度各用3批樣品平行制備3份溶液，測定效價平均加樣回收率為99.2%，RSD=1.8%，表明該方法回收率良好。

2.4.3 精密度試驗

取供試品（批號: 101101）6份，按樣品效價測定項下的方法測定，可信限率為1.8%～2.2%，效價平均測定值為96.3%，RSD=1.5%，結果表明，該方法精密度良好。

2.4.4 穩定性試驗

取已知含量（批號: 101101）（ 96.3% ）的供試品溶液，室溫放置24h 后測定。結果：效價為95.6%，可信限率為2.1%，結果顯示，供試品溶液在24h內穩定性良好。

2.5 樣品效價測定

取氯霉素注射液3批，分別用濁度法和管碟法測定效價，比濁法測得結果分別為96.7%，95.5% ，96.4%；管碟法測得結果分別為96.3%，95.9%，96.0%。經顯著性檢驗，3組數據無顯著性差異（P＞0.05） 。

3 討 論

3.1 金黃色葡萄球菌對不同濃度的氯霉素，培養后菌液吸光度值差值較合適，吸收度在0.3～0.7之間，符合濁度法測定要求，故選擇金黃色葡萄球菌為試驗菌。

3.2 往石英杯中加入溶液時，應在某一記號處沿管壁加入，分裝培養基時，在該標記稍上方沿管壁流入，保證試驗平行操作。

3.3 采用管碟法測定本品時，實驗結果容易出現抑菌圈邊緣模糊、雙圈等現象，從而影響測定，使結果準確度下降；濁度法具有操作方便、快速，結果準確、精密度好等優點，值得推廣應用。

[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中華人民共和國衛生部藥品標準.抗生素藥品(第一冊)[S].1989:60.

[2] 張文婷,劉緒平,王慶全.濁度法測定硫酸小諾霉素片的效價[J].藥物分析雜志,2010,30 (2): 346-348.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:附錄Ⅺ A 93-98.

[4] 中國藥品生物制品檢定所,中國藥品檢驗總所.中國藥品檢驗標準操作規范[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010:295-299.