HPLC法測定強(qiáng)筋壯骨丸中阿魏酸的含量

郭 瓊 曲婷麗 趙正保 劉銳玲*

（山西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，山西 太原 030001）

強(qiáng)筋壯骨丸是由人參、當(dāng)歸、杜仲、鹿銜草等10味藥材經(jīng)精細(xì)加工而成的純中藥制劑，具有補(bǔ)益肝腎，強(qiáng)筋壯骨，活絡(luò)止痛等功效，當(dāng)歸為方中主要藥味，其主要活性成分為阿魏酸。阿魏酸具有明顯的抗血小板釋放5-羥色胺的作用，是活血止痛的主要有效成分之一；其含量測定方法主要有薄層洗脫比色法、雙波長薄層掃描法、直接掃描法、高效液相色譜法等。前三種測定方法具有靈敏度低、專屬性差、耗時等缺點(diǎn)，目前阿魏酸含量測定方法應(yīng)用較多的是高效液相色譜法[1,2]。為了更好地控制該制劑的質(zhì)量，本試驗(yàn)采用HPLC法對強(qiáng)筋壯骨丸中的阿魏酸含量檢測方法進(jìn)行研究。

1 儀器與試藥

Agilent-1200高效液相色譜儀；TU-1901紫外分光光度計；電子天平；甲醇；純水；磷酸（分析純）；乙腈；阿魏酸對照品（購于中國藥品生物制品檢定所，批號：110773-200611）；強(qiáng)筋壯骨丸供試品和去當(dāng)歸的強(qiáng)筋壯骨丸陰性對照品（山西臨汾黎光中醫(yī)骨傷科醫(yī)院制備）。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測波長的選擇

通過190～400nm波長紫外掃描，阿魏酸在320nm波長處有特征吸收，故選擇為檢測波長。

2.2 色譜條件

色譜柱：Venusil ASB C18（5μm：4.6mm×250mm）；乙腈-0.085%磷酸（12∶88）為流動相；流速1.0mL/min；檢測波長320nm；柱溫25℃；理論塔板數(shù)按阿魏酸計算應(yīng)不低于3000。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品適量，加70%甲醇制成每1mL含阿魏酸為50μg的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備

取強(qiáng)筋壯骨丸供試品約10g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入70%甲醇20mL，密塞，稱定重量，加熱回流40min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.5 陰性對照品溶液的制備

處方中除去當(dāng)歸，按強(qiáng)筋壯骨丸制法，制得去當(dāng)歸的強(qiáng)筋壯骨丸陰性對照品。將上述陰性對照品，按供試品溶液的制備項下的方法制得去當(dāng)歸陰性對照品溶液。取阿魏酸對照品和強(qiáng)筋壯骨丸供試品溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣20μL，結(jié)果阿魏酸在約28min出峰，樣品中阿魏酸峰與雜質(zhì)峰分離良好，而陰性對照無干擾。

2.6 線性關(guān)系的考察

取濃度為50mg/mL的阿魏酸對照品儲備液，分別精密吸取0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.5mL置于10mL的容量瓶中，用70%甲醇溶液稀釋至刻度，得阿魏酸對照品溶液。精密吸取上述溶液各20μL，依上述色譜條件測得峰面積為縱坐標(biāo)（y），濃度為橫坐標(biāo)（x），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程為：阿魏酸y=97.42x-20.487（r=0.9999），結(jié)果表明阿魏酸在濃度為0.5～12.5mg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取阿魏酸對照品溶液（5μg/mL）20μL，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積值，計算得其RSD為2.82%（n=6）。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已測定的強(qiáng)筋壯骨丸供試品5g共6份，分別精密加入50μg/mL阿魏酸對照品溶液0.8mL，按供試品溶液的制備方法制備供試液。分別進(jìn)行測定，計算含量，平均回收率：99.63%，RSD：2.53%。

3 討 論

有文獻(xiàn)報道，阿魏酸性質(zhì)不穩(wěn)定，遇光和熱易分解，置于棕色瓶中的阿魏酸對照品溶液在4℃下2周后開始分解。因此在試驗(yàn)中阿魏酸對照品溶液與供試品溶液均為現(xiàn)用現(xiàn)配，于棕色瓶中避光保存。阿魏酸為有機(jī)酸類成分，易溶于熱水、醇和乙醚，而乙醚的毒性較大；熱水和乙醇的沸點(diǎn)較高，參考中華人民共和國藥典2010版，本試驗(yàn)采用毒性較小、沸點(diǎn)較低的甲醇作為提取溶劑。在提取溶劑劑量考察試驗(yàn)中，本試驗(yàn)先后采用15mL、20mL、25mL、30mL70%甲醇溶劑進(jìn)行回流提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取溶劑超過20mL后阿魏酸的提取量無顯著差異，因此本試驗(yàn)選用20mL甲醇溶液進(jìn)行回流提取。

本文建立的強(qiáng)筋壯骨丸中阿魏酸的含量檢測方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于強(qiáng)筋壯骨丸的質(zhì)量控制。

[1]胡益勇,徐曉玉.阿魏酸的化學(xué)和藥理研究進(jìn)展[J].中成藥,2006,28(2)：253-255.

[2]鐘露苗,彭艷梅.醒腦通絡(luò)片中阿魏酸含量測定方法學(xué)研究[J].中南藥學(xué),2010,8(2)：135-135.