受體介導的肝靶向載藥系統研究進展

李全斌，何開勇

(1.湖北中醫藥高等專科學校，湖北 荊州 434020;2.湖北省食品藥品監督檢驗研究院，湖北 武漢 430071)

肝癌、肝炎等肝臟疾病在我國是常見病和多發病，長期以來影響著人們的生活質量，其治療藥物較大的毒副反應在臨床上也潛在地危害著人們的健康。如何有效提高藥物治療肝臟疾病的療效，降低藥物的毒副作用，已成為科研人員多年來研究和探索的熱點之一，并取得了一些可喜進展。尤其是肝臟特異性受體的不斷發掘，豐富了肝主動靶向的理論體系，展示了肝臟疾病治療的美好未來。在此就受體介導的肝靶向載藥系統研究進展作一介紹。

1 去唾液酸糖蛋白受體介導的靶向系統

去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein receptor，ASGPR)亦稱半乳糖受體，是哺乳動物肝實質細胞特有的一種高效內吞受體，可專一性識別、結合并內吞循環血液中一些末端帶有半乳糖殘基或乙酰半乳糖胺殘基的寡糖或寡糖蛋白，并與之結合，主動轉運至肝細胞內部，使其在肝細胞內進行代謝。ASGPR廣泛地應用于肝靶向藥物的研究中。乳糖化衍生物或合成大分子與抗癌(病毒)藥物結合后，能將藥物靶向轉運至肝臟，既增強了藥物的療效，又減少了藥物對其他非靶組織的毒副反應。

孔令斌等[1]以拉米夫定為模型藥物，用化學方法將藥物與載體共價偶聯得乳糖化多聚賴氨酸拉米夫定，偶聯物在慢性乙型病毒性肝炎小鼠肝組織中特異性聚集，對肝臟組織的親和力提高，肝靶向性效果滿意，增強了藥物的抗乙型肝炎病毒作用。張立堅等[2]合成的抗腫瘤前藥半乳糖化人血清白蛋白(HSA)與維甲酸偶聯物，具有良好的肝靶向作用。王銀松等[3]將甲氨蝶呤(MTX)與殼聚糖(CH)以酰胺鍵偶聯制備MTX－CH，再與乳糖酸反應生成目標產物MTX－LCH，當乳糖酰基取代度為15.5% ～38.9%時，LCH對肝實質細胞膜表面ASGPR有特異親和性。

若在納米粒或脂質體表面結合能被肝細胞特異識別的半乳糖苷，形成ASGPR介導的載藥系統，則有望成為兼有主動與被動雙重靶向性的理想載藥系統。李錦娟等[4]用薄膜超聲分散法制備了半乳糖苷修飾的氟尿苷二丁酸酯固體脂質納米粒，其在小鼠體內有良好的肝靶向性，且有緩釋作用。姜華等[5]用逆相蒸發法制備了半乳糖衍生物修飾的去甲斑蝥酸鈉脂質體，其肝靶向效率是去甲斑蝥酸鈉脂質體的1.8倍，是去甲斑蝥酸鈉注射液的2.9倍。王莉等[6]用薄膜超聲分散法制得白藜蘆醇脂質體并用半乳糖苷修飾，該藥物在體內有良好的肝靶向性，可明顯提高藥效、減少藥量、降低毒副作用。吳紅兵等[7]合成了[(2－乳糖酰胺基)乙胺基]甲酸膽固醇酯，并用該酯制備的齊多夫定棕櫚酸酯半乳糖化脂質體，形成表面攜帶 D－半乳糖端基配體的“肝自導向”載體，可顯著改善齊多夫定棕櫚酸酯的肝靶向性，實現主動肝靶向，可望成為一種有用的靶向肝的藥物傳遞載體。張方宇等[8]合成的乳糖脂苦參堿脂質體有較好的體內肝靶向性。梁曉暉等[9]用逆相蒸發法制得帶負電荷的牛血清白蛋白(BSA)脂質體，再用O－羧甲基－N－乳糖酰化殼聚糖修飾，制得的肝靶向牛血清白蛋白脂質體有良好的穩定性和較高的藥物包封率，可作為蛋白質藥物肝靶向給藥的一種新模型。

肝臟及肝細胞是基因治療的研究重點之一。但基因治療目前還存在著許多困難，其中之一就是如何將治療基因導入特異靶部位，并限定在靶細胞內表達。納米粒可攜載各種基因片段，通過被動或主動尋靶，對肝細胞有很好的靶向性，并能保護基因不被核酸酶降解。魚軍等[10]大量提取含報告基因的質粒pEGFP－N1及pBIND，并與半乳糖基化殼聚糖混和制成納米微囊復合物，證明利用該微囊載體基因轉導系統進行肝靶向性基因治療是可行的。路姣等[11]合成了膽甾五半乳糖苷(Gal－cho1)，并用薄膜超聲分散法制備空白陽離子脂質體，再與魚精蛋白－DNA結合成復合物;其在HepG2細胞中有較高的轉基因效率，有體外的肝靶向性。

ASGPR的內源性配體與其親和力較高，但來源少、純化復雜和產量低，故作為肝靶向配體的應用受到限制。為此，王煒煜等[12]以相對豐富的多肽作為骨架，化學合成半乳糖基化的人工配體(Lac－PLL)，通過靜電引力與攜帶自殺基因、紅色熒光蛋白融合基因的真核表達質粒r－pAsl6Dr相連，組成肝靶向基因轉移系統lacPLL－rpAsl6Dr;該復合物適于作為自殺基因單純皰疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase，HSV－TK)肝靶向運送的導向配體。王學東等[13]用還原胺化法將乳糖共價連接于羧甲基殼聚糖，用真核細胞表達載體β－半乳糖苷酶報道基因;體內試驗證實，DNA與Lac－CMCS形成復合物后能在肝細胞富集并有效表達，顯示該復合物是一種有效的肝靶向載體。王學東等[14]還利用DNA的負電性質及與陽離子聚合物的作用機制，合成了小分子乳糖化賴氨酸作為DNA的載體;該載體具備了肝靶向運載DNA的條件，初步體外細胞轉染試驗證明，乳糖化賴氨酸－DNA復合物能把DNA轉運入HepG 2.2.15內，有效發揮所攜帶DNA藥物的抑制乙型肝炎病毒復制的作用，但在體內環境中的運送、靶向、濃度、降解等情況有待于進一步探討。

2 甘草次酸特異性結合受體介導的靶向系統

甘草是重要的傳統中藥，主要成分是甘草次酸和甘草酸。甘草次酸是甘草酸的水解產物，兩者均有較好的肝組織分布特征。20世紀90年代初，Negishi證實了大鼠肝細胞膜上含有甘草次酸及甘草酸結合位點，隨后的研究也證實甘草次酸/甘草酸修飾的載體有趨肝性。因此，甘草次酸/甘草酸可作為肝靶向載藥系統中的導向基團。黃羽等[15]通過體外細胞結合試驗，發現甘草酸表面修飾殼聚糖納米粒對肝實質細胞有靶向結合作用，與殼聚糖納米粒相比，細胞對前者的轉染率顯著高于后者，顯示甘草酸表面修飾殼聚糖納米粒兼具主動和被動尋靶能力。田秦等[16]以丁二酸酯為間隔臂制得甘草次酸修飾殼聚糖的肝靶向藥物載體，以牛血清白蛋白為藥物模型，采用離子交聯法制得載藥粒子，制得了新型的肝靶向給藥系統。吳超等[17]研究了甘草次酸硬脂醇酯－3－O－半乳糖苷修飾去甲斑蝥素脂質體在小鼠體內的分布，其脂質體具良好的肝靶向性。

3 甘露糖受體介導的靶向系統

近年的研究發現，肝非實質細胞膜上有甘露糖受體，它能與含糖基的復合物結合。在肝纖維化時，肝星狀細胞膜上的甘露糖球蛋白Ⅱ受體(M6P/IGFⅡ)將會高度表達。利用甘露糖與6－磷酸人血清白蛋白(M6P－HSA)為載體修飾藥物，因M6P/IGFⅡ受體介導可特異地作用于肝星狀細胞，結合物經溶酶體降解后釋放藥物，可起到肝靶向作用。因此，通過合成含有抗病毒(癌)等藥物及基因、酶、寡核苷酸等的含糖基復合物，并與甘露糖受體結合，可達到肝靶向的目的。有學者用α－D－甘露糖苷修飾脂質體包裹含125I的β－球蛋白并研究其肝內分布情況，發現普通脂質體同時被肝實質細胞和非實質細胞攝取，后者的放射性略高于前者;修飾脂質體在非實質細胞的放射性是實質細胞的7倍;若將超氧化物歧化酶(SOD)甘露糖化，則主要靶向肝非實質細胞，顯示其對肝非實質細胞有較好的靶向性[18]。將甘露糖糖基化脂質體與櫟精結合，所得修飾物的肝靶向作用優于原藥;胞壁酰二肽為一種免疫調節藥，將其與甘露糖糖基化脂質體結合后，能靶向到肝非實質細胞[19]。Greupink R等[20]將抗纖維化、抗腫瘤藥麥考酚酸用甘露糖和人血清白蛋白修飾，修飾物與麥考酚酸原藥體內分布相比，二者在肝星狀細胞中的濃度有顯著差異，說明原藥可通過甘露糖－6－磷酸人血清白蛋白(M6P－HSA)修飾實現肝靶向，從而減少藥量，降低毒副作用。此外，Adrian JE等[21]在脂質體上嫁接甘露糖與人血清白蛋白，修飾脂質體具有顯著的肝臟積聚率，在肝星狀細胞中修飾脂質體的標記物的濃度比普通脂質體高出1倍多，修飾物有更好的肝靶向性，故甘露糖受體介導的肝靶向有相當的可行性。

4 脂蛋白受體介導的靶向系統

脂蛋白是膽固醇和其他類脂成分傳輸內源性載體微粒。脂蛋白的內源性決定其不存在免疫原性，能避開網狀內皮系統(RES)的識別。脂蛋白如乳糜微粒(CM)、極低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)等，從循環系統清除需借助特殊受體，這些受體可識別其表面脫輔基蛋白乳糜粒殘基和β－極低密度脂蛋白(β－VLDL)，可很快為肝實質細胞上的受體殘基接受。LDL主要經肝內特定的LDL受體清除，而某些類型的癌細胞顯示較強的LDL攝取能力，細胞表面LDL受體的活性及數量在某些癌細胞高出正常細胞20倍以上，故用LDL荷載抗肝癌的藥物，可大大提高對某些肝癌細胞的靶向性。LDL和HDL乳糖酰化后借助肝內Kupffer細胞和肝實質細胞上特異的半乳糖基快速吸收。Theo等[22]模擬乳糜粒結構，將醫用類脂與重組去輔基蛋白E混合，加入親水性抗病毒藥物制成類脂乳，可使藥物肝攝入提高40倍，使肝實質細胞內藥物濃度達700 nmol/L，顯著降低游離藥物肝外分布，從而有效治療肝病。

5 清除受體介導的靶向系統

人血清白蛋白經順烏頭酸(aconitic acid)衍生化后共價結合于脂質體(Aco－HSA脂質體)表面，大鼠靜脈注射后30 min后大部分從血中清除，并富集于肝臟，而普通脂質體仍約有80%滯留于血中;肝攝取的Aco－HSA脂質體2/3存在于上皮細胞，剩余的主要集中于肝巨噬細胞，而普通脂質體并不被上皮細胞攝取;Aco－HSA脂質體的肝攝取均被預先給予的聚次黃苷酸所抑制，證實此攝取過程與清除受體有關，且Aco－HSA脂質體的肝上皮細胞攝取與脂質體大小有關，上皮細胞攝取隨粒徑增加而減少而Kupffer細胞攝取則增加，提示靶向于肝內非巨噬細胞群的可能性[23]。

6 結語

近年來，隨著分子生物學、分子藥理學、病理學等對肝臟疾病本質及藥物作用機制的闡明，受體介導的肝靶向載藥系統研究在提高藥物肝靶向性、優化藥物傳輸、提高藥物療效、減少藥物劑量、降低藥物副反應等方面取得了較大進展。但受體密度和結合活性可隨個體生理、病理條件的變化而變化，受體介導的肝靶向藥物的臨床療效并不如人意。因此，研究受體介導的肝靶向藥物時，需考慮機體生理、病理狀況，考察藥物與載體間的相互作用，含藥載體在生物體內的變化及體內物質對藥物載體的影響等因素。相信在不久的將來，隨著肝臟特異性受體的不斷發掘，受體介導的新型肝靶向材料出現，肝臟疾病的生理、病理等的不斷深入，藥劑學、藥物化學等理論的不斷完善，受體介導的肝靶向載藥系統會為肝臟疾病的防治提供更為安全可靠的治療方案。

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