中藥止痛膠囊中芍藥苷的HPLC含量測定

肖霞 曹俊凱

中藥止痛膠囊中芍藥苷的HPLC含量測定

肖霞 曹俊凱

目的 建立止痛膠囊中芍藥苷的含量測定。方法 用HPLC法，CLC-ODS柱(15 cm×6 mm)，以甲醇-乙腈-醋酸-水 =(15∶7.5∶2∶75.5)為流動相;檢測波長:245 nm;超聲波提取，對中藥止痛膠囊中主藥白芍中芍藥苷含量進行測定。結果 其平均回收率為100.72%，相對標準偏差為1.23%。結論 用本法測定該止痛膠囊中芍藥苷含量，結果準確、靈敏、方法簡便，且有適用性。

HPLC;中藥止痛膠囊;芍藥苷

白芍系Paeonia lactiflora Pall.多年生草木植物，有平肝止痛、養血調經之功，可用于頭痛眩暈、脅痛、腹痛、四肢攣痛等，芍藥中芍藥苷顯示了較強的生理活性。新研制的中藥止痛膠囊是以白芍為主要藥味及其他中草藥經精制而成。芍藥苷在止痛膠囊中含量多少對藥效至關重要。中藥止痛膠囊中芍藥苷含量的測定方法尚未見報道。本文采用HPLC法，用超聲波萃取，對該止痛膠囊中芍藥苷含量進行測定［1，2］，其平均回收率為100.72%;相對標準偏差為 1.23%。表明本法測定該止痛膠囊中芍藥苷含量，結果準確、靈敏、方法簡便易行。實驗部分

1 儀器、試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀，超聲波發生器，電子分析天平。

1.2 試藥 甲醇、乙腈，醋酸，超純水;對照品:芍藥苷;中藥止痛膠囊樣品。

2 含量測定

2.1 色譜條件［3］色譜柱:島津 Shimpack CLC-ODS柱(15 cm × 6 mm)，流動相:甲醇-乙腈-醋酸-水 =(15∶7.5∶2∶75.5);檢測波長:245 nm;流速:1.4 ml/min;紙速:1 mm/min。

實驗表明，在上述選擇的色譜條件下，中藥止痛膠囊中，其他組分對芍藥苷組分的主峰無干擾，分離好，能夠滿足該止痛膠囊中芍藥苷含量測定的要求，結果見圖1(A，B，C)。

由色譜圖中可見，其他組分對芍藥苷主峰的保留時間與對照品(芍藥苷)的色譜峰保留時間一致(tR=8.4 min)。

2.2 對照品溶液的制備 精稱適量對照品(芍藥苷)，于10 ml量瓶中用70%甲醇溶解并稀至刻度，搖勻、備用。濃度為2 mg/m l。

2.3 樣品供試液的制備［4］取內容物，混合均勻，精稱適量(相當一粒止痛膠囊1/2的量，約0.25 g)于50ml量瓶中，加入適量70%甲醇水，在超聲波發生器中提取1 h，取出待室溫后，稀釋至刻度搖勻，待用。

取上述樣品液1 ml置量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量于1.5 ml小離心管中，在高速離心機1 2000 r/min中離心2～3 min，濾過，取續濾液為供試品溶液。

圖1 樣品色譜圖A-芍藥苷 B-空白 C-止痛膠囊

2.4 系統適用性試驗分別精密吸取對照品溶液，止痛膠囊試液，芍藥苷的陰性樣品供試液各10μl，注入HPLC儀，按上述色譜條件測定。

2.5 線性關系考察［5］精密移取上述標液(2 mg/m l)1，0.5，0.25，0.125 ml，分別置入 10 ml量瓶中，用 70% 甲醇水溶液稀釋至刻度搖勻。分別在上述色譜條件下進樣20μl，以芍藥苷的濃度(c)為橫坐標，峰高(h)為縱坐標繪圖得一直線，其回歸方程為c=0.001 h-0.03，r=0.9999。

由上述實驗表明:芍藥苷濃度在0.2～0.025 mg范圍內呈線性關系。

2.6 精密度試驗 精取上述溶液1 ml，于10 m l量瓶中，用70%甲醇水稀料至刻度，搖勻，取1.5 ml于小離心管中，在高速離心機中1 2000 r/min離心2～3min，取出，吸取上清液進樣20μl，測得5次記錄峰面積，結果峰面積的 RSD為1.22%，結果表明儀器精密度良好。

2.7 重復性試驗 精稱3份相同量的芍藥苷與適量的空白樣品，分別置入10 ml量瓶中，加入適量70%甲醇，超聲波提取1 h，取出放至室溫后，用70%甲醇水稀至刻度、搖勻，待用。分別精取上述液1 ml，于10 ml量瓶中用70%甲醇水稀至刻度、搖勻，取適量于1.5 ml小離心管中，在高速離心機1 2000 r/min下離心2～3 min，取出吸取上清液20μl進樣，測得重現性實驗結果RSD=0.89%。

試驗表明:芍藥苷含量測定重復性較好，能夠滿足止痛膠囊中芍藥苷含量測定要求。

2.8 穩定性試驗 按重復性試驗中的1號樣，分別在2、4、6、8、12、24h測定，RSD 為 0.63%，結果表明，本品在 24h 內穩定性良好。

2.9 回收率試驗 精稱對照品(芍藥苷)適量及空白樣品適量于10 ml量瓶中，加入適量70%甲醇水，在超聲波發生器中提取1 h后，取出放至室溫后，用70%甲醇水稀至刻度，搖勻、備用。

分別精取上述溶液1 ml，于10 m l量瓶中，用70%甲醇水稀至刻度，搖勻，取1.5 ml于小離心管中，在高速離心機中1 2000 r/min離心2～3 min，取出，吸取上清液進樣20μl，測得4次平均回收率為100.72%。

2.10 樣品測定 取內容物，混合均勻，精稱適量(相當一粒止痛膠囊1/2的量，約0.25 g)于50 ml量瓶中，加入適量70%甲醇水，在超聲波發生器中提取1 h，取出待室溫后，稀釋至刻度搖勻，待用。取上述樣品液1 m l置量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量于1.5ml小離心管中，在高速離心機1 2000 r/min中離心2～3 min，取出后，取上清液20μl進樣，測得三批樣品結果見表1。

表1 止痛膠囊中芍藥苷含量(%/粒)

3 結果與討論

3.1 樣品處理方法 本文樣品處理采用超聲波提取法，該法比文獻報道的普通提取處理法簡單且樣品不易丟失。

3.2 根據對流速的考察，發現當流速為1.4 ml/min的時候，芍藥苷分離效果更好，出峰時間更適中。

3.3 由試驗表明:本法測定中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量，其方法簡便易行、結果準確、靈敏，能夠滿足該止痛膠囊中含量測定的要求，批量生產時可用于控制質量。

3.4 本文考察了3批不同批次中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量。建立了一種更準確、簡單、快速的HPLC測定方法，對于有效評價止痛膠囊的質量提供了更為有效的方法。

［1］李俊.中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量測定.中國藥學雜志，2001，26(5):289.

［2］王杰民.HPLC法測定中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量.中成藥，2001，13(4):32.

［3］賈欣，高巖，杜斌，等.HPLC法測定中藥止痛膠囊中芍藥苷的含量.寧夏大學學報(醫學版)2006，41(1):156-157.

［4］何懷冰.芍藥中芍藥甙的高效液相色譜法測定.中成藥，2001，13(4):32-33.

［5］趙子劍，趙啟鵬.復方石淋通片的質量標準.中醫藥，2005，25(5):69-70.

463000 駐馬店市第一人民醫院藥劑科