早發(fā)冠心病與載脂蛋白B、載脂蛋白E基因多態(tài)性的關(guān)系

馬娟 陳吉麗

早發(fā)冠心病與載脂蛋白B、載脂蛋白E基因多態(tài)性的關(guān)系

馬娟 陳吉麗

目的 探討載脂蛋白B（ApoB）、E（ApoE）基因多態(tài)性與早發(fā)冠心病的相關(guān)性。方法 采用基因芯片技術(shù)分析24例早發(fā)冠心病和66例遲發(fā)冠心病的ApoB XbaI、ApoE112/158基因多態(tài)性及等位基因頻率分布，入選病例均行冠狀動(dòng)脈造影確診。結(jié)果 早發(fā)冠心病組ApoB XbaI;ApoE112/158基因型分布與晚發(fā)冠心病組相比無(wú)明顯差異(P＝0.757；P＝0.579)。兩組的ApoB XbaI的等位基因頻率分布無(wú)明顯差異（P＝0.757），而早發(fā)冠心病組的ApoE112/158的等位基因ε4頻率高于晚發(fā)冠心病組(P＜0.05)。結(jié)論 ApoB XbaI多態(tài)性可能不是中國(guó)人早發(fā)冠心病的危險(xiǎn)因素，而ApoE112/158的等位基因ε4可能是一個(gè)潛在危險(xiǎn)因素。

早發(fā)冠心病；載脂蛋白B；載脂蛋白E；基因多態(tài)性

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(coronary heart disease，CHD)是由遺傳和環(huán)境危險(xiǎn)因素共同作用而發(fā)病的多基因遺傳性疾病。在CHD的發(fā)生和發(fā)展中，遺傳因素可能更為重要。早發(fā)CHD是指冠心病發(fā)生時(shí)男性≤55歲，女性≤65歲[1]，是冠心病的一種特殊形式。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展及人類(lèi)基因組計(jì)劃的進(jìn)行，從基因水平闡明CHD尤其是早發(fā)CHD發(fā)病機(jī)制成為醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)[2]，但各地報(bào)道不一，未見(jiàn)基因芯片技術(shù)聯(lián)合分析載脂蛋白B(ApoB)、ApoE基因多態(tài)性與早發(fā)CHD相關(guān)性的報(bào)道，本研究應(yīng)用基因芯片技術(shù)聯(lián)合檢測(cè)ApoB、ApoE基因多態(tài)性及等位基因頻率，分析它們與早發(fā)CHD的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象

昆明市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科收住的CHD患者90例，符合關(guān)于缺血性心臟病（IHD）的命名和診斷標(biāo)準(zhǔn)，均為冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)冠狀動(dòng)脈病變患者，男63例，女27例。以男≤55歲及女≤65歲患冠心病為早發(fā)冠心病，男＞55歲及女＞65歲患冠心病為遲發(fā)冠心病。以24例早發(fā)冠心病為病例組，平均年齡(49.6±6.2)歲，男20例，女4例，以66例遲發(fā)冠心病為對(duì)照組，平均年齡(69.2±7.8)歲，男43例，女23例。研究人群之間無(wú)血緣關(guān)系。

1.2 方法

采用基因芯片檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合PCR體外擴(kuò)增方法，檢測(cè)人類(lèi)冠心病相關(guān)基因ApoB XbaI、ApoE112/158的多態(tài)性情況。

1.2.1 標(biāo)本采集 采集被檢者靜脈血0.5mL，用一次性無(wú)菌注射針頭抽取，收集于含50μL的2%EDTA溶液的無(wú)菌1.5mL離心管中，蓋上管蓋，上下顛倒數(shù)次使混勻。

1.2.2 存放 上述血樣在2～8℃保存，保存期不應(yīng)超過(guò)3周；在-20℃保存期半年，-80℃可長(zhǎng)期保存，但嚴(yán)禁反復(fù)凍融。

1.2.3 擴(kuò)增 采用適用0.2mL擴(kuò)增管并有熱蓋的PCR擴(kuò)增儀。

1.2.4 雜交 在芯片雜交過(guò)程中采用溫控精度為±0.5℃的恒溫設(shè)備（BaiO FLWS-526全自動(dòng)雜交儀）進(jìn)行雜交。

1.2.5 結(jié)果收集 在芯片雜交信號(hào)檢測(cè)時(shí)采用BaiO BE-2.0生物芯片識(shí)讀儀。圖像Array Docctor軟件分析可自動(dòng)輸出檢測(cè)結(jié)果，最后檢測(cè)出ApoB XbaI、ApoE112/158基因的多態(tài)性位點(diǎn)。

1.3 質(zhì)量控制

在每次檢測(cè)中都應(yīng)設(shè)置陰性、陽(yáng)性、對(duì)照品。產(chǎn)品檢測(cè)過(guò)程中，若軟件對(duì)“標(biāo)志列、陰性、陽(yáng)性對(duì)照”三者進(jìn)行判斷后，輸出其中之一為“不合格”，則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。

1.4 結(jié)果判斷（由軟件自動(dòng)判斷并輸出結(jié)果）

當(dāng)軟件判斷標(biāo)志列、陰性、陽(yáng)性對(duì)照均合格時(shí)，會(huì)自動(dòng)輸出檢測(cè)結(jié)果。見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)結(jié)果判斷

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS11.5軟件包作統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料比較用t檢驗(yàn)；ApoB XbaI、ApoE112/158基因型和等位基因頻率之間的比較用x2檢驗(yàn)，同時(shí)計(jì)算優(yōu)勢(shì)比(OR)及95%可信區(qū)間（95%CI），P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)入選患者進(jìn)行一般臨床資料分析

入選患者的一般臨床資料在早發(fā)CHD組及晚發(fā)CHD組之間除年齡比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義以外，總膽固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、左心室舒張末徑、左心室收縮末徑、左心室射血分?jǐn)?shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表2 兩組一般臨床資料比較

2.2 ApoB XbaI基因型和等位基因檢測(cè)結(jié)果

早發(fā)CHD組及晚發(fā)CHD組ApoB XbaI基因型均以X-X-型最常見(jiàn)，X+X-型次之，早發(fā)CHD組及晚發(fā)CHD組均無(wú)X+X+基因型出現(xiàn)，兩組基因型分布相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.751），早發(fā)CHD組等位基因X+頻率稍高于晚發(fā)CHD組，但兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（95.8%：94.7%，P＝0.757）。提示ApoB基因多態(tài)性與冠心病的早發(fā)可能無(wú)相關(guān)性。見(jiàn)表3。

表3 ApoB XbaI基因型分布及等位基因頻率（%）

2.3 ApoE112/158基因型和等位基因檢測(cè)結(jié)果

兩組ApoE112/158基因型均以ε3/3型最常見(jiàn)，ε2/3型次之；未見(jiàn)ε2/2基因型出現(xiàn)；兩組基因型分布相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.579）；早發(fā)CHD組ApoE112/158等位基因頻率：ε3＞ε4＞ε2；晚發(fā)CHD組ε3＞ε2＞ε4；早發(fā)CHD組ε4等位基因頻率明顯高于晚發(fā)CHD組（16.7%：9.5%；P＜0.05，OR＝2.301，95%CI＝1.203～4.398），提示ApoE112/158基因多態(tài)性與早發(fā)CHD發(fā)病存在密切關(guān)聯(lián)，ε4等位基因可能是CHD早發(fā)的潛在危險(xiǎn)因素。見(jiàn)表4。

表4 ApoE112/158基因型分布及等位基因頻率分布（%）

在兩組患者中未發(fā)現(xiàn)ApoE-ε4/4，ApoB-X+X+基因型聯(lián)合出現(xiàn)。

3 討論

載脂蛋白是脂代謝的主要載體。ApoE和ApoB在脂質(zhì)代謝中特別是致動(dòng)脈粥樣硬化的脂代謝中起重要作用[3]。ApoE的ε4 的等位基因頻率分布可能與世界各地冠心病發(fā)病率不同有密切關(guān)系。ApoB基因XbaI多態(tài)性與冠心病、動(dòng)脈硬化、心肌梗死的關(guān)系比較密切。

3.1 ApoB與早發(fā)冠心病的關(guān)系

盡管支持ApoB基因變異與冠心病有關(guān)的研究較多，但ApoB基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系仍存在爭(zhēng)論。Turner[4]在歐洲做了一個(gè)研究，682名學(xué)生來(lái)自于14所大學(xué)，他們的父輩均有早發(fā)冠心病史；對(duì)照組有1312名學(xué)生，也來(lái)自于同一人群。他做了ApoB基因的Xba／、信號(hào)肽插入／缺失和3’端串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性的分析，發(fā)現(xiàn)兩組間各種等位基因頻率無(wú)明顯差異；但是XbM和3’端串聯(lián)重復(fù)序列多態(tài)性有明顯的地區(qū)差別，脂蛋白濃度與不同的基因型有關(guān)。他認(rèn)為不同的基因型雖然與血脂有關(guān)，但是并不能預(yù)測(cè)心血管疾病。國(guó)內(nèi)外多數(shù)研究認(rèn)為ApoB和ApoB基因以某種機(jī)制參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成，進(jìn)而導(dǎo)致心腦血管病，但亦有反對(duì)意見(jiàn)，認(rèn)為需要排除種族差異性、生活習(xí)慣及環(huán)境因素的影響等，才能進(jìn)一步證實(shí)ApoB、ApoB基因與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系和機(jī)制。本研究顯示早發(fā)冠心病組與晚發(fā)冠心病組ApoB的基因型及等位基因頻率分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，不支持ApoB基因變異與冠心病有關(guān)。

3.2 ApoE與早發(fā)冠心病的關(guān)系

Kolovou等[5]曾推測(cè)如果ApoE基因多態(tài)性在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制中是一個(gè)重要的遺傳因素，它將影響CHD的發(fā)病年齡。一項(xiàng)對(duì)瑞典雙生子的研究中指出，年輕患者發(fā)生CHD主要是受遺傳因素影響，而到了老年，引起CHD的發(fā)生可能由環(huán)境因素占主要成分。Keavney等[6]研究提示ε4基因型不僅是CHD發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，而且是早發(fā)CHD的獨(dú)立危險(xiǎn)因子，純合子ε4／4更是導(dǎo)致CHD發(fā)病年齡提前的危險(xiǎn)因素。說(shuō)明ApoE可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化的遺傳過(guò)程，使CHD的發(fā)病年齡有提前的趨勢(shì)。本研究中早發(fā)CHD組ε4等位基因頻率明顯高于對(duì)照組（16.7%：9.5%；P＜0.05，OR＝2.301，95%CI＝1.203～4.398），提示ApoE112/158基因多態(tài)性與早發(fā)CHD發(fā)病存在密切關(guān)聯(lián)，ε4等位基因與CHD早發(fā)相關(guān)，與以上結(jié)論一致。

近年來(lái)有關(guān)載脂蛋白和它們的基因多態(tài)性與冠心病的關(guān)系的研究，雖然取得了一些進(jìn)展，但是因?yàn)橛绊懷x及冠心病的候選基因很多，載脂蛋白基因多態(tài)性是通過(guò)引起血脂代謝異常導(dǎo)致冠心病發(fā)生或發(fā)展，還是作為獨(dú)立的冠心病易患因素在遺傳水平上起作用，或是與其他基因協(xié)同起作用尚未完全明了，所以有關(guān)載脂蛋白基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)關(guān)系的研究有待更大樣本的獲取以及更加周密的科研設(shè)計(jì)。

[1] 中華心血管病雜志編委會(huì)血脂異常防治對(duì)策組.血脂異常防治建議[J].中華心血管病雜志，1997，25（3）：169-172.

[2] 肖剛生.絕經(jīng)后冠心病女性的性激素水平及血脂水平調(diào)查[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2009，15(22)：65-66.

[3] Hauser ER, Mooser V,Crossman DC，et a1.Design of the genetics of early onset cardiovascular disease(GENECARD)study[J].Am Heart J，2003，145(4)：602-613.

[4] Lundstam U，Herlitz J，Karlsson T，et a1.Serum lipids，lipoprotein(α) level，and apolipoprotein(α)isoforms as prognostic markers in patients with coronary heart dlsease.J Intern Med，2002，251（2）：111-118.

[5] Kolovou GD，Anagnostopoulou KK.Apolipoprotein E polymorphism，age and coronary heart disease[J].Ageing Res Rev，2007，6(2)：94-108.

[6] Keavney B，Parish S，Palmer A，et a1.Large-scale evidence that the cardiotoxicity of smoking is not ignificantly modified by the apolipoprotein E2／E3／E4 genotype[J].Lancet，2003，361(9355)：396-398.

Objective To assess the association of apolipoprotein B(ApoB), E(ApoE) gene polymorphism with premature coronary heart disease. Methods Twenty-four premature CHD patients diagnosed by CAG at/ before aged 55 for males and 65 for females were assigned to premature CHD case group with other 66 CHD patients as the control group.Gene chip technology was performed to analyze ApoB Xbal,ApoE 112/158 gene polymorphism. The allele frequency and gene type distribution were compared between two groups. Results There was no obviously difference in the distribution of Apo B,ApoE genetype between two groups (P=0.757;P=0.579) .The frequency of X+ allele of ApoB was no signif cantly in patients with premature CHD than control group (P=0.757);the frequency of ε4 allele of Apo E112/158 was higher in patients with premature CHD than control group(P＜0.05).Conclusion The Apo B XbaI gene polymorphism may not be the risk factors of premature CHD in the Chinese;while the allele gene ε4 of ApoE112/158 may be a potential dangerous factor.

Premature coronary heart disease; Apolipoprotein B.E; Gene; Polymorphism

10.3969/j.issn.1009-4393.2011.19.015

昆明市衛(wèi)生局資助項(xiàng)目（wsj0602）

650011 昆明市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科（馬娟 陳吉麗）