HPLC法測定復方逍遙合劑中黃芩苷的含量

張武標，沈 陽，劉兆康，王申東

上海市兒童醫院（上海交通大學附屬兒童醫院），上海 200040

HPLC法測定復方逍遙合劑中黃芩苷的含量

張武標，沈 陽，劉兆康，王申東

上海市兒童醫院（上海交通大學附屬兒童醫院），上海 200040

目的：建立復方逍遙合劑中黃芩苷的含量測定方法。方法：采用HPLC法，色譜柱Calesil-C18（4.6mm×250mm，5 μm），流動相：甲醇∶0.1%磷酸（47∶53），檢測波長：280 nm。 結果：黃芩苷進樣量在 0.08～0.80 μg范圍內呈良好的線性關系 (r=0.999 9)，低、中、高三種濃度的平均回收率為99.59%、100.22%、100.40%，RSD分別為0.75%、2.58%、0.86%。結論：本法簡便、準確，重復性好，可用于該產品的質量控制。

復方逍遙合劑；HPLC；黃芩苷

復方逍遙合劑為我院自制制劑（滬藥制字Z04090765），由黃芩、當歸、郁金、陳皮、香附、柴胡、白芍、柴胡、梔子、茯苓、生牡蠣 、黃柏、白術等十幾味中藥組成。具有舒肝理氣、清熱活血、軟堅化痰等功能，用于調理肝郁痰阻型女童早期性早熟，運用臨床多年來效果顯著。其中黃芩為處方主藥，黃芩苷是黃芩主要有效成分。為控制產品質量，確保臨床療效，參考文獻[1-3]，本文采用HPLC法對制劑中黃芩苷含量進行定量分析，方法簡便、準確、重復性好，可用于該產品的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀，包括Agilent G1311A四元泵（Quatpump），AgilentG1322A 真空在線脫氣機（Degrasser），Agilent G1313A 自動進樣器（ALS），Agilent G1315B DAD二級管陣列檢測器，Agilent chemstation system （安捷倫化學色譜工作站）；電子天平（Sartorius，d=0.01 mg）；超聲提取器（SB1000，寧波新芝生物科技股份有限公司）。

1.2 試藥

供試品復方逍遙合劑 （上海市兒童醫院）；黃芩苷對照品（中國藥品生物制品檢驗所，批號：110715-200815）；甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[4]

色譜柱 Calesil-C18（4.6 mm×250mm，5 μm）； 流動相：甲醇-0.1%磷酸（47∶53）；檢測波長：280 nm；柱溫：30℃；流速：1 ml/min；理論板數按黃芩苷峰計算不低于2 000。

2.2 溶液制備[5-6]

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取在五氧化二磷真空干燥24 h的黃芩苷對照品0.004 00 g，加甲醇8m l，超聲20min，放冷，用甲醇定容到10ml，再精密吸取1m l于10ml量瓶中，用甲醇定容，即得對照品濃度為0.04mg/m l。

2.2.2 供試品溶液制備 準確量取樣品合劑2ml于100m l量瓶中，加80ml甲醇，超聲20min，放冷，用甲醇定容至刻度。再精密吸取4ml于25ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，0.45μm微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續濾液，即得。

2.2.3 陰性對照溶液制備 按處方比例和制法，制成缺黃芩的陰性樣品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

按“2.1”項下色譜條件，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，注入液相色譜儀中測定。結果顯示，供試品色譜在與對照品色譜相應的位置上有一相同保留時間的色譜峰；陰性對照溶液在此保留時間處無色譜峰。表明在實驗條件下，其他藥材成分對測定結果無干擾，見圖1。

2.4 線性關系考察

取對照品溶液，分別進樣 2、4、8、12、20 μl，按“2.1”項下色譜條件測定，以黃芩苷對照濃度x為橫坐標，峰面積y為縱坐標，繪制標準曲線并進行回歸計算，得回歸方程為：y=3.32×10-7x+3.58×10-7（r=0.999 9，n=5）。 表明黃芩苷進樣量在0.08～0.80μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取對照品溶液，連續進6針，進樣量10μl，按“2.1”項下色譜條件測定，結果顯示，RSD=0.64%（n=6），說明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

精密吸取同一份供試品溶液，分別在 0、2、4、6、8、12 h進樣，每個時間段連續進樣2針，進樣量10μl。按“2.1”項下色譜條件測定，RSD=3.04%，表明供試品溶液在12 h內基本穩定。

2.7 重復性試驗

分別精密量取本品（批號：20100901）按“2.2.2”項下方法平行制得供試品溶液6份，每份進樣2針，進樣量10μl。按“2.1”項下色譜條件測定，結果樣品中黃芩苷的平均含量為 3.23mg/ml，RSD 為 1.87%（n=6）。

2.8 加樣回收試驗

取已知含量的樣品 （批號：20100901，3.23mg/ml）0.44ml于25ml量瓶中，精密加入0.4mg/ml的對照品溶液2.2、3.3、4.4ml后，加入一定量的甲醇，超聲20min，放冷，用甲醇定容至刻度。精密吸取1m l于10m l量瓶中，用甲醇定容，配制成低、中、高三種濃度的溶液，同時制備三份樣品。每份樣品重復進樣2針，每針10μl，按“2.1”項下色譜條件測定，計算黃芩苷的回收率。結果表明黃芩苷的回收率良好，結果見表1。

表 1 加樣回收率試驗（n=3）

2.9 樣品含量測定

取樣品，按“2.2.2”項下方法分別制成供試品溶液。吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，按“2.1”項下色譜條件測定，以外標法計算黃芩苷的含量，結果見表2。

表2 三批樣品黃芩苷含量測定結果

3 討論

黃芩為處方主藥，黃芩苷是黃芩的主要有效成分，以該成分的含量測定來控制產品質量，有助于保證臨床療效；本文所建立的含量測定方法，簡便、準確、重現性好，可用于合劑的質量控制。

黃芩苷能溶于甲醇、乙醇和水，試驗中分別采用了不同濃度的甲醇、乙醇溶液作為溶劑，結果以甲醇提取率較高，干擾成分少；提取方法選擇時，我們以甲醇作為供試品提取溶劑，分別考察了加熱回流提取以及不同時間的超聲提取率，結果表明超聲提取20min提取率最佳，方法簡便，結果重現性好，故確定為甲醇超聲提取20min。

中藥的療效是多種活性成分共同作用的結果，僅對其中的一個或幾個成分加以控制，難以全面把握中藥及制劑的質量、療效和穩定性，本實驗僅對合劑中黃芩苷含量進行測定，其他活性成分的控制還有待進一步研究。

[1]李卓,危當恒.咽喉炎合劑中黃芩苷的穩定性考察[J].中國藥房,2008,19(36):2845-2846.

[2]張先平,李桃榮.高效液相色譜法測定膚康合劑中黃芩苷的含量[J].中國醫院藥學雜志,2008,28(22):1967-1968.

[3]趙玉佳,孟祥麗,鞠寶玲.HPLC測定雙黃連口服液中黃芩苷的含量測定[J].中國實驗方劑學雜志,2009,15(4):90.

[4]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學工業出版社,2005:211.

[5]舒德忠,鄭小敏,盛明智.高效液相色譜法測定消炎止咳糖漿中黃芩苷的含量[J].中國藥師,2008,11(8):947-948.

[6]林冬杰,梁威.HPIC法測定感冒止咳糖漿中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的含量[J].中國藥師,2009,12(8):1044-1046.

Content determ ination of Baicalin for Com pound Xiaoyao Oral Solution by HPLC

ZHANGWubiao,SHENYang,LIUZhaokang,WANGShendong
Children′s Hospital of Shanghai,Shanghai Children′s Hospital Affiliated of Shanghai Jiaotong University,Shanghai 200040,China

Objective:To establish amethod for determination the content of Baicalin in Compound Xiaoyao Oral Solution．M ethods:Calesil-C18column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used，Mobile phase wasmethanol-0.1%phosphoric acid(47∶53)，Detection wavelength was 280 nm．Results:Baicalin sample size located 0．08-0.80 μg，and favourable linear correlation (r=0．999 9)was showed．The average recovery rates of low,moderate and high concentration were 99.59%,100.22%,100.40%with RSD of 0.75%,2.58%,0.86%,respectively.Conclusion:The method is convenient and accurate.Meanwhile,it also has good reproducibility,may be used to quality control of Baicalin．

Compound Xiaoyao Oral Solution;HPLC;Baicalin

R927.72

A

1673-7210（2011）03（b）-058-03

張武標（1973.10-），男，碩士學歷，副主任藥師，主要從事醫院藥學工作。

沈陽（1963.9-）,男，副主任藥師，主要從事醫院藥學工作。

2011-01-12）