離子色譜法測定奶粉中膽堿質(zhì)量分數(shù)

顧秀英，歐菊芳，楊琳，王東銘，姚春華，許榮年

（浙江公正檢驗中心有限公司，杭州 310009）

離子色譜法測定奶粉中膽堿質(zhì)量分數(shù)

顧秀英，歐菊芳，楊琳，王東銘，姚春華，許榮年

（浙江公正檢驗中心有限公司，杭州 310009）

采用離子色譜法對奶粉中的膽堿含量進行測定，該方法檢出限為0.2 mg/L，線性相關(guān)系數(shù)為r=0.99977，精密度為1.06%，回收率在97.5%～101.7%之間，該方法操作簡便，干擾少，適合奶粉中膽堿的日常檢測。

奶粉；離子色譜法；陽離子；膽堿

0 引 言

膽堿（choline）是動物生長過程中不可缺少的一種水溶性維生素[1]，它在腦發(fā)育和開發(fā)認知、記憶與學習能力方面有很重要的作用。最初測定膽堿的方法主要有高氯酸非水滴定法、雷氏鹽比色法和雷氏鹽重量法[2-4]，這些傳統(tǒng)方法操縱繁瑣，回收率低，選擇性差，干擾因素多，無法鑒別摻進的廉價無機氯化物和胺類等物質(zhì)[5]。近年來可見報道的有高效液相色譜—電化學檢測法、化學發(fā)光法、高效液相色譜—蒸發(fā)光散射檢測法及高效液相色譜一質(zhì)譜法等測定膽堿含量的方法，但這些方法對儀器要求比較高，不易廣泛推廣應(yīng)用。現(xiàn)行國標采用酶反應(yīng)分光光度法，該方法所需酶種類多[6]，不易購買，且實驗操作較難控制。本實驗通過優(yōu)化奶粉水解條件，采用離子色譜法對奶粉中膽堿含量進行定量分析，方法線性良好，定量準確，適合于奶粉中膽堿含量的日常檢測。

1 實 驗

1.1 材料和設(shè)備

本實驗中所用試劑除特殊指明外，均為分析純；所用水均為超純水。

丙酮（色譜純）；酒石酸（分析純）；濃鹽酸（優(yōu)級純）。

濃度為0.5 mol/L鹽酸溶液：取濃鹽酸45 mL用水定容至1 000 mL容量瓶。

氯化膽堿（C5H4NCLO，純度不低于99.0%）。

離子色譜淋洗儲備液：稱取酒石酸6.0 g（精確至0.1 g）于1 000 mL容量瓶中，加水溶解，加入丙酮200 mL，用水定容至刻度。該溶液于4℃可保存1個月。

離子色譜淋洗液 （0.004 mol/L酒石酸丙酮水溶液）：取100.0 mL離子色譜淋洗儲備液加入到1 000 mL的容量瓶中，用水定容至刻度。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后備用。

微孔濾膜（粒徑為0.45 μm，水相）。

離子色譜儀（配有電導檢測器）；恒溫水浴槽；分析天平（感量0.1 mg）。

2 標準溶液配制

2.1 膽堿標準溶液

將氯化膽堿在（105±1）℃下干燥恒重，精密稱取1.0137 g置于100 mL容量瓶中，加水溶解，定容至刻度，此時相當于膽堿陽離子的質(zhì)量濃度為7.560 g/L，該溶液現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.2 膽堿標準系列工作溶液

分別吸取膽堿標準溶液0.05，0.1，0.2，0.3，0.5，0.8，1.0，1.5 mL置于50 mL容量瓶中；加水定容至刻度，此時該標準系列膽堿陽離子質(zhì)量濃度分別為7.56，15.12，30.24，45.36，75.60，121.0，151.2，226.8 mg/L。

3 方 法

3.1 離子色譜條件

色譜柱：Metrosep C2-100，100mm×4.0mm陽離子交換柱，粒徑7 μm；淋洗液（4.0 mmol/L酒石酸+2%丙酮）；流速為1.0 mL/min；進樣量為20 μL；檢測器為電導檢測器。

3.2 樣品預(yù)處理

準確稱取10.0 g奶粉（精確至0.1 g）于50 mL容量瓶中，加入25 mL鹽酸溶液，搖勻，于80℃恒溫水浴槽中水解2 h（每隔0.5 h振搖1次，避免奶粉結(jié)塊粘壁），取出冷卻至室溫，加水定容至刻度，濾紙過濾后吸取濾液10.0 mL于50 mL容量瓶，加水稀釋定容，樣液用0.45 um濾膜過濾，待測。

3.3 測定

將標準工作溶液和樣液分別進樣，以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，利用標準曲線對樣品進行定量測定。

4 結(jié)果與討論

4.1 離子色譜條件

根據(jù)Metrosep C2-100，100 mm×4.0 mm陽離子交換柱使用推薦的幾種適用淋洗液，本實驗選用了0.004 mol/L酒石酸丙酮水溶液和0.002 mol/L硝酸水溶液做了比較，實驗發(fā)現(xiàn)0.002 mol/L硝酸水溶液做淋洗液時峰形拖尾嚴重，采用0.004 mol/L酒石酸丙酮水溶液做淋洗液峰形相對較好，因此選擇0.004 mol/L酒石酸丙酮水溶液作為淋洗液。為了進一步改善峰形，對加入的有機改進劑丙酮的用量做了比較，分別配制了丙酮質(zhì)量分數(shù)為1%，1.75%，2%的淋洗液對膽堿標準溶液進行測定。結(jié)果表明，隨著丙酮濃度的增加，膽堿的保留時間前移，2%丙酮作為有機改進劑是分離效果最佳，膽堿標準圖譜如圖1所示。因此，選用濃度為4.0 mmol/L酒石酸+質(zhì)量分數(shù)為2%丙酮作為淋洗液，樣品中膽堿與其干擾的鈣鎂等離子能較好的分離，樣品圖譜如圖2所示。

4.2 樣品預(yù)處理條件優(yōu)化

通過正交試驗設(shè)計法L9（35）（見表1），固定奶粉質(zhì)量10.00 g，鹽酸體積25 mL，設(shè)計反應(yīng)時間（2 h，3 h和4 h），反應(yīng)溫度（60℃，70℃和80℃），鹽酸濃度（0.5 mol/L，1.0 mol/L和1.5 mol/L），按4.2測定，尋找到奶粉前處理的最佳酸水解條件為稱取奶粉10.00 g，加入0.5 mol/L鹽酸25 mL，在80℃水浴里水解2 h，結(jié)果如表2所示。

表1 正交試驗因素水平

表2 正交試驗結(jié)果與極差

4.3 方法線性及檢測限

將標準系列工作溶液分別進樣，以峰面積為橫坐標，質(zhì)量濃度為縱坐標繪制標準曲線，得出的線性方程 為 ：Q=10.1344A， 相 關(guān) 系 數(shù)r=0.99977，RSD=2.018%，標準曲線如圖3所示。實驗表明，膽堿質(zhì)量濃度在7.56～226.8 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性良好。根據(jù)信噪比3倍計算方法的最低檢出限為0.2 mg/L，根據(jù)實際操作中稱取10.00 g奶粉水解后定容至50 mL，并稀釋5倍，得出膽堿的定量限為0.5 mg/100g。

4.4 方法的精密度（RSD值）

選取某奶粉按4.2處理平行測定6次，做精密度實驗，其結(jié)果奶粉中膽堿質(zhì)量分數(shù)為102.2，103.1，104.2，104.2，101.5，103.6 mg/100 g；平均值為103.1 mg/100 g；精密度（RSD）為1.06%。由此可以看出，方法的重現(xiàn)性良好，RSD值≤5%。

4.5 方法回收率實驗

選取一奶粉稱取10.00 g共6份，在其中3份中各加入膽堿標準溶液0.5 mL，另外3份各加入1.0 mL膽堿標準溶液，混勻后按4.2樣品處理測定，結(jié)果如表3所示。由表3可以看出，奶粉中膽堿的回收率在97.5%～101.7%之間。

表3 奶粉中膽堿回收率實驗

4.6 實際樣品的分析

選取了市售的幾種奶粉做了離子色譜分析測定其中的膽堿含量，并與其外包上的明示值做了比較，結(jié)果如表4所示。由表5可以看出，大部分奶粉能夠較為準確的添加膽堿質(zhì)量分數(shù)。

表4 奶粉樣品中膽堿的質(zhì)量分數(shù)mg/100g

5 結(jié) 論

通過對奶粉進行酸水解處理，用離子色譜法對奶粉中的膽堿進行定性定量測定，方法線性良好，定量準確，重復(fù)性RSD為1.06%，回收率在97.5%～101.7%之間，該方法操作簡便，干擾少，適合奶粉中膽堿的日常檢測。

[1]黃麗，劉京平，容曉文.在線滲析-離子色譜直接測定奶粉中膽堿[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2008，18（3）：444-445.

[2]胡京枝，魏紅，任紅.氯化膽堿含量常用測定方法[J].河北畜牧獸醫(yī)，2004，20（3）：46-47.

[3]馮振興，任愛農(nóng).柿葉中膽堿含量測定[J].天津中醫(yī)藥，2004，21（3）：248-249.

[4]丁永勝，牟世芬.離子色譜法測定飼料中氯化膽堿和三甲胺的含量[J].色譜，2004,22（2）：174-176.

[5]李寶春，王惠英.氯化膽堿幾種常用測定方法之比較[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2003（4）：23-23.

[6]人民共和國食品安全國家標準.GB/T5413.20-1997《嬰幼兒配方食品和乳品膽堿的測定》[S].國家技術(shù)監(jiān)督局，1997：85-87.

Determination of choline in fomula sample by ion chromatography

GU Xiu-ying,OU Ju-fang，YANG Lin，WANG Dong-ming,YAO Chun-hua,XU Rong-nian
（Zhejiang Gongzheng Testing Center Inc.,Hangzhou 310009,China）

Abstrct：A method was developed for determination of choline in fomula sample by ion chromatography.The detection limit,the accuracy and the regression coefficient for the determination of the method were 0.2 mg/L,1.06%and 0.99977.The recoveris were 97.5%～101.7%.It showed that this method was simple and easy to handle,and suit for the determination of choline in fomula sample.

fomula sample;ion chromatography;cation;choline

TS252.7

A

1001-2230（2011）07-0047-03

2011-02-23

顧秀英（1979-），女，工程師，從事食品研發(fā)與檢驗工作。