試劑盒法檢測低乳糖牛奶中乳糖質量分數的方法

劉美霞，張河霞，朱煒，王丹慧，李梅

（內蒙古蒙牛乳業集團股份有限公司，呼和浩特 011500）

試劑盒法檢測低乳糖牛奶中乳糖質量分數的方法

劉美霞，張河霞，朱煒，王丹慧，李梅

（內蒙古蒙牛乳業集團股份有限公司，呼和浩特 011500）

為了提高檢驗速度，降低檢驗成本，特對現有乳糖試劑盒法進行開發，以滿足生產、檢驗的需求。低乳糖牛奶由于乳糖質量分數比較低，用現有的國標滴定法無法進行檢測[1]，而色譜法需配備液相色譜儀，成本較高，且檢測速度比較慢，試驗對原有乳糖檢測試劑盒進行研究改進，在其基礎上針對個別細節進行了修訂，使原有方法更細化，從而快速檢測低乳糖牛乳中乳糖質量分數[2]。本研究檢出限為3 g/kg。結果表明，該方法靈敏度高，操作簡單，成本低廉，結果準確，能夠滿足在線生產及研發需求[3]。

試劑盒；低乳糖牛奶；乳糖質量分數；檢測

0 引 言

牛奶是一種富含人體所需的多種營養素的食物。但是有些人喝了牛奶后會出現腸胃不適如腹脹、胃痛等癥狀，甚至發生腹瀉，這種現象即乳糖不耐癥[4]。為了避免這種現象，目前，大部分乳品企業研發生產出低乳糖牛奶[5]。目前用于檢測低乳糖牛奶中乳糖質量分數的方法有限，現有國標中滴定法不適用于低乳糖牛奶，而液相色譜法由于儀器較昂貴，檢測速度慢，不能滿足生產及研發的實際需求。迫切需要一種能夠簡單、快速、成本低廉的檢測低乳糖牛奶中乳糖質量分數的檢測方法，而市面上的試劑盒檢出限及回收率等各項指標均未明確標示，所以需對其進行驗證并改進，以使乳品企業能夠廣泛應用，提高檢驗效率，降低檢驗成本[6]。

1 實 驗

1.1 器皿

容量瓶（50,100，500mL），一次性塑料比色皿（1 cm光路,3.0 mL），微量移液器（20 μL和200 μL），分析天平，分光光度計（設定在340 nm），定（計）時器；定量濾紙。

1.2 試劑

乳糖和半乳糖快速檢測試劑盒。

Carrez I溶液：取3.60 g亞鐵氰化鉀{K4[Fe（CN）6·]3H2O}溶于100 mL蒸餾水中，室溫保存。

Carrez II溶液：取7.20 g硫酸鋅（ZnSO4.7H2O）溶于100 mL蒸餾水中，室溫保存。

氫氧化鈉溶液：取4 g的NaOH溶于1 L蒸餾水中，室溫保存。

2 方 法

2.1 實驗原理

在pH值為5.0的條件下，由β-半乳糖苷酶催化乳糖水解為D-半乳糖和D-葡萄糖；由半乳糖變旋酶（GaIM）催化，使α-D-半乳糖轉化為β-D-半乳糖；在pH值為8.6的條件下，由β-半乳糖脫氫酶（β-GaIDH）催化，β-D-半乳糖被NAD+氧化為D-半乳糖酸：根據該反應生成的NADPH的量計算乳糖的量。通過測定340 nm處增加的吸光度值計算NADPH的量。

2.2 步驟

2.2.1 樣品處理

準確稱取1 g牛奶，至100 mL的容量瓶，再加50～60 mL的蒸餾水，混勻。加入2 mL Carrez I溶液，2 mL Carrez II溶液和4 mL NaOH溶液（100 mmol/L）。每一次加入后都要混勻，調節至室溫，用蒸餾水定容，混合，過濾。棄去最初幾毫升濾液，取清澈、可能略發乳白色的溶液用來檢測。

2.2.2 比色步驟

通過表1可以看出，樣品檢測時，每做一個樣品需使用4個比色皿進行檢測，按此表順序，依次加入樣品溶液及藥品溶液于比色皿中，進行兩次比色，記錄樣品吸光值。

2.2.3 比色條件

波長為340 nm，比色皿為1 cm光路（玻璃或塑料），溫度≤25℃，終體積為2.72 mL。

2.2.4 計算

式中：0.3889和0.7389為取0.2 mL樣品溶液比色時的換算系數；V為取用來比色的樣品溶液體積；100為樣品定容體積（mL）；m為稱樣量（g）。

2.3 結果判定

結果出具時，如檢測結果小于檢出限，則按小于檢出限出具，如檢測結果大于檢出限，為了確保檢測結果的準確性，則需使用液相方法驗證后，以液相法檢測結果出具。

3 結果與討論

（1）檢出限[7]：乳糖為3 g/L；半乳糖為2 g/L。

（2）回收率實驗。選取8個點做回收率實驗，檢測結果如表2所示。

表1 比色步驟

表2 回收率實驗

表3 重復性實驗

（3）重復性實驗。分別取一個加標樣品及一個低乳糖樣品做重復性實驗，結果如表3所示。通過上述檢測結果，乳糖及低乳糖樣品重復性實驗效果比較好，符合要求。

（4）方法間比對。結果對比。取同一樣品同時使用國標法（液相色譜法）與試劑盒法進行檢測，檢測結果如表4所示。

通過試劑盒法與現有液相色譜法對同一樣品進行對比檢測，液相法檢測結果均為＜0.3%（即未檢出），而試劑盒法檢測結果也均＜0.3%，所以兩種方法結果一致。

方法間特性對比。分別對兩種方法特性進行對比，對比結果如表5所示。

4 結 論

（1）樣品中乳糖質量濃度在3～60 g/L的情況下，回收率較好，當大于60 g/L時，需對樣品進行稀釋后檢測，使稀釋后的結果落在3～60 g/L范圍內，計算時乘以稀釋倍數[8]。

（2）該方法檢出限：乳糖為3 g/L，半乳糖為2 g/L。

（3）用于低乳糖樣品檢測時，該方法與現有方法對比結果較一致，但對于乳糖質量濃度較高的樣品檢測結果不穩定，檢測時需將樣品進行稀釋后再進行檢測，對于檢測過程中出現不合格的樣品，需用液相法進行復檢后出具結果。

表4 低乳糖牛奶檢測結果%

表5 方法特性對比

（4）該方法的檢出限、回收率、精密度等實驗結果均符合要求，且可以提高檢驗效率，降低檢驗成本，可以作為低乳糖牛奶中乳糖質量濃度的快速篩查方法使用。

[1]GB 5413.5-2010食品安全國家標準.嬰幼兒食品和乳品中乳糖、蔗糖的測定[S].

[2]顧新玲.乳糖酶的固定化及其生產低乳糖羊奶的實驗研究[D].西安：陜西師范大學，2007.

[3]李文.β-半乳糖苷酶在液態奶中的應用技術研究[D].中國農業大學，2005.

[4]曾果，黃承鈺，邱云青，等.健康成人牛奶不耐受癥的研究[C].乳糖酶及低乳糖乳制品專題研討會文集，2001.

[5]聶少萍，徐浩鋒，黃偉雄，等.青少年乳糖酶缺乏與氫呼氣量的研究[C].中華預防醫學會兒少衛生分會第六屆全國學術交流會、中國健康教育協會學校分會第三屆學術交流會論文集，2004.

[6]關曉輝，徐洪軍，張曉杰，等.不同年齡段人群乳糖酶缺乏的臨床研究[J].中華內科雜志，2006（6）.

[7]GB/T5009.1-2003 A.2檢出限，A.2.2吸光法[S].

[8]GB/T20001.4-2001標準編寫規則，第4部分：化學分析方法[S].

Adulteration of raw milk in the qualitative determination of zinc salts

LIU Mei-xia，ZHANG He-xia，ZHU Wei，WANG Dan-hui，LI Mei
（Inner Mongolia Mengniu Dairy Industrial Co.Ltd.,Hohhot 011500,China）

In order to improve the speed test，Reduce inspection costs，Special kit to existing law to develop lactose，To meet production、Needs test。Lactose content of low lactose milk is relatively low because，With the existing national standard titration method can not be detected，The chromatography to be equipped with liquid chromatography，High cost，And the detection of more slowly，Test the original study of lactose improved detection kit，Based on their individual details of the revised，So that the original method is more refined，To rapid detection of low-lactose milk lactose content。The detection limit was 3 g/kg。The results show that，The method is sensitive，ease of clinical，low system cost，system accuracy，To meet the needs of online production and R&D。

ELISA；Low-lactose milk；lactose content；detection

TS252.7

A

1001-2230（2011）07-0056-03

2011-05-30

劉美霞（1983-），女，碩士研究生，從事乳品檢測分析。