比色法測定飲料中柚皮苷含量的研究

陸雪梅

（安徽省宣城市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，宣城 242000）

比色法測定飲料中柚皮苷含量的研究

陸雪梅*

（安徽省宣城市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，宣城 242000）

介紹了利用比色法測定橙汁飲料中柚皮苷的方法。柚皮苷與一縮二乙二醇反應顯色，在420 nm波長下測定其吸光度，建立柚皮苷含量與吸光度的線性方程為D（λ） =3.473 2 ρ+0.008 9，線性范圍為0 g/L～0.24 g/L，r=0.998 9，平均回收率為97.49%，相對標準偏差為2.85%。該方法具有簡便、快速、準確的特點，適用于含有此類物質(zhì)飲料的檢測。

比色法；柚皮苷；飲料

柚子是蕓香科植物柚的成熟果實，是我國東南沿海地區(qū)出產(chǎn)的主要水果之一，栽培面積及產(chǎn)量均居世界首位。柚子含有各類維生素及生物活性物質(zhì)，是制作各種飲料的優(yōu)良原料。柚子中含有豐富的生物類黃酮，柚皮苷是其主要成份，占其總黃酮質(zhì)量的80%。柚皮苷具有多種生理功能，具有抗氧化、抗菌、消炎以及抗病毒等作用。但是另一方面，柚皮苷又是許多飲料中苦味物質(zhì)的主要來源，含量超過50 mg/L時就會產(chǎn)生苦感。因此，在此類飲料的生產(chǎn)加工的過程中，建立對柚皮苷的快速、簡便、準確的測定方法是必要的。目前，對于柚皮苷的檢測主要有高效液相法和分光光度法。高效液相法存在試劑用量大、過程復雜、檢測時間長以及成本較高等缺點；分光光度法測定的是總黃酮的含量，與實際結(jié)果有一定的誤差。比色法測定通過柚皮苷與特定的顯色劑發(fā)生反應，能夠較為準確和快速地測定出樣品中柚皮苷的含量。本試驗研究了利用比色法測定飲料中的柚皮苷的含量，為此類產(chǎn)品的監(jiān)控提供了一個較為實用的方法。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

含柚汁飲料，購自宣城市蘇果超市；柚皮苷標準品，購自Sigma公司，純度≥98 g/100g；其他試劑購自國藥集團上海化學試劑公司，均為分析純。

1.2 儀器設(shè)備

723型可見光分光光度計，上海菁華科技儀器有限公司；TDL-40B臺式離心機，上海安亭科學儀器廠；EL-20實驗室pH計，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；BS224S電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司。

1.3 溶液的制備

1.3.1 對照品溶液的制備

精密稱取經(jīng)過干燥后至恒重的柚皮苷對照品1 g于1000 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，制得質(zhì)量濃度為1 g/L的對照品溶液，使用時按比例稀釋到所需的質(zhì)量濃度。

1.3.2 供試品溶液的制備

將市面上購得的含柚汁飲料經(jīng)過濾紙過濾后置于500 mL容量瓶中即為供試品。

1.3.3 樣品的測定

取供試品溶液1.0 mL，注入10 mL的具塞比色管中，每個比色管中再加入體積濃度90%的一縮二乙二醇5 mL、4 mol/L的NaOH溶液0.1 mL、蒸餾水3.9 mL后混勻，于40℃水浴加熱10 min顯色后于420 nm處測吸光度值。

2 結(jié)果與討論

2.1 最大吸收波長的確定

取對照品、供試品溶液各1.0 mL，分別注入10 mL的具塞比色管中，每個比色管中再加入體積濃度90%的一縮二乙二醇5 mL、4 mol/L的NaOH溶液0.1 mL、蒸餾水3.9 mL后混勻，于40℃水浴加熱10 min顯色后，利用分光光度計進行全波長掃描，結(jié)果表明，兩者在420 nm處有最大吸收。

2.2 顯色條件的優(yōu)化

在樣品溶液加熱顯色的過程中，有許多因素對吸光度值都有影響。本試驗主要考察了顯色溫度、顯色時間以及加堿量對于測定的影響。

2.2.1 顯色溫度的影響

以1.0 mL的標準液為試樣，分別在30℃、35℃、40℃、45℃的條件下顯色，結(jié)果見圖1。結(jié)果表明隨著溫度的升高，顯色達到平衡所需要的時間就相對越短，綜合考慮以40℃為最佳顯色溫度。

圖1 溫度對顯色時間的影響

2.2.2 顯色時間的影響

以1.0 mL的標準液為試樣，在40℃條件下分別顯色 4 min、6 min、8 min、10 min、12 min、14 min，結(jié)果如圖2所示，可見在10 min時就已經(jīng)達到最大吸光度值，因此顯色時間定為10 min。

圖2 顯色時間對顯色效果的影響

2.2.3 加堿量的影響

用比色法測定柚皮苷的含量，是基于柚皮苷在堿性條件下與一縮二乙二醇反應呈黃色為基礎(chǔ)的，所以加堿量對反應有重要的影響。以1.0 mL的標準液為試樣，添加了不同量的4 mol/L的NaOH溶液，考察其對吸光度值的影響，試驗結(jié)果如圖3所示，可見堿的添加量在0.1 mL比較合適。

圖3 加堿量對顯色效果的影響

2.3 線性關(guān)系

準確稱取一定質(zhì)量的柚皮苷標準品，分別配制成 0.04 g/L、0.08 g/L、0.12 g/L、0.16 g/L、0.20 g/L、0.24 g/L的柚皮苷標準溶液，用移液管取以上不同質(zhì)量濃度的柚皮苷標準液各1.0 mL分別注入10 mL的具塞比色管中，每個比色管中再加入體積濃度90%的一縮二乙二醇5 mL、4 mol/L的NaOH溶液0.1 mL、蒸餾水3.9 mL后混勻，于40℃水浴加熱10 min，在420 nm下測吸光度，以1.0 mL蒸餾水做同樣處理作空白對照，以吸光度值對標樣的含量作圖，其標準曲線方程為D（λ）=3.473 2 ρ+0.008 9線性范圍為0 g/L～0.24 g/L，r=0.998 9，線性關(guān)系良好，結(jié)果如圖1所示。

圖4 柚皮苷標準曲線方程

2.4 穩(wěn)定性試驗

以0.16 g/L的標準溶液按照1.3.3所述的方法，分別于0 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h進行顯色反應測定吸光度值，其吸光度值分別為0.567、0.566、 0.552、 0.549、 0.540、 0.538、 0.536， 其RSD為2.33%，表明供測試的樣品在6 h內(nèi)基本保持穩(wěn)定。

2.5 重復性試驗

以0.08 g/L的標準溶液按上述1.3.3的方法重復顯色反應5次，測吸光度值分別為0.304、0.311、0.308、0.315、0.302，計算RSD為1.70%，可見該方法的重復性較好。

2.6 回收率試驗

準確量取已測柚皮苷含量的柚汁飲料100 mL，加入一定質(zhì)量的柚皮苷標準品，混合均勻后，取1.0 mL，按照1.3.3項進行測定，計算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為97.49%，RSD為2.85%。結(jié)果見表1。

表1 加標回收率實驗結(jié)果（n=5）

2.7 樣品的檢測

選取5個批號的樣品，按照1.3.2項的方法制備，并且按照1.3.3項操作測定這5份樣品中中柚皮苷的含量，樣品中柚皮苷的含量結(jié)果見表2，飲品中的柚皮苷的含量平均為1.406 mg/L，低于人的苦感值50 mg/L。在不影響口感得前提下，果汁飲料中含有適量的柚皮苷有利于提高產(chǎn)品的生理保健功能。

表2 樣品中柚皮苷的含量

3 結(jié)論

柚皮苷作為黃酮類化合物具有重要的生理活性，通過控制其在飲料中的含量可以提升產(chǎn)品的內(nèi)在品質(zhì)。利用比色法測定飲料中的柚皮苷的含量，具有快速、簡便的特點，為此類產(chǎn)品的監(jiān)控提供了一個較為實用的方法。

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Determination of contents of naringin in beverage by colorimetry

LUXUE-Mei*
（Anhui province XuanChengproducts qualitysupervision and inspection institute，XuanCheng242000，China）

The paper established a method to determination of naringin in beverages by colorimetry.The naringain produced colour with diethylene glycerol that was quantitated in the 420 nm wavelength.The calibration curve was D（λ）=3.473 2 ρ+0.008 9 in the range from 0 g/L to 10.24 g/L （r=0.9989）for naringin.The average recovery was 97.49%with RSD of 2.85%.The method is simple，rapid，and accurate.It is suitable for determination of contents of naringin in beverage.

colorimetry；naringin；beverage

TS272.7

A

1673-6004（2011）02-0044-03

* 陸雪梅，女，1972年出生，1990年畢業(yè)于中國科學技術(shù)大學分析化學專業(yè)，工程師。

2011-04-11