荷斯坦奶牛性控胚胎移植試驗初探

奶牛胚胎移植技術是目前奶牛繁育領域中先進的生物技術，是生產優質高產奶牛和提高母犢出生比例的有效途徑。2008年12月，個舊市畜牧技術推廣站與云南中科胚胎工程生物技術有限公司合作，在乍甸乳業奶牛場和市畜牧技術推廣站肉牛養殖場進行了荷斯坦奶牛性別控制胚胎移植試驗，移植妊娠率為32.6%，產犢率為73.3%，性別控制準確率達90.9%，收到了一定的效果。

一、試驗地點

云南省個舊市乍甸乳業奶牛場、市畜牧技術推廣站肉牛養殖場。

二、試驗材料

1. 受體母牛的選擇。①品種:荷斯坦奶牛、黃牛。②年齡:18~20月齡青年牛和1~4胎的經產母牛。③體重:青年牛體重為成年牛體重的75%。④無產科疾病:直腸檢查母牛生殖系統(卵巢、卵泡、子宮)發育正常，無生殖道疾病，無流產史，發情正常，無傳染性疾病。⑤營養狀況良好:選擇健康、體型較大、性情溫馴、膘情適中的母牛，營養狀況中等以上。

2. 藥品和器械。前列腺素、2%普魯卡因注射液、70%酒精棉球、胚胎移植槍、無菌外套、衛生紙。

3. 冷凍性控胚胎。云南中科胚胎工程生物技術有限公司提供。

三、試驗方法

1. 對受體牛催情。按照受體選擇標準，共選擇受體牛85頭。受體牛同期發情處理，采用2次注射前列腺素的方法，即在受體牛發情周期的任意一天注射前列腺素4毫升，間隔11天后第二次注射前列腺素5毫升，36~72小時后進行發情觀察，每天早晨、中午、下午各觀察1次，每次1小時，并做好詳實的記錄。

2. 對受體牛的黃體及子宮同步檢查。第二次注射前列腺素后，根據受體牛發情情況，在發情后的第七天，直腸檢查受體牛子宮、黃體大小、質地、性狀等，未排卵及新生黃體或黃體界限不明顯的受體牛予以淘汰，不進行移植。經檢查確定黃體合格的受體牛先用2%普魯卡因注射液尾椎硬膜外麻醉，消毒、清洗擦拭外陰后進行移植。

3. 冷凍胚胎的操作程序。胚胎操作室要求干凈、無灰塵、無異味。在移植前進行紫外線消毒，所有器械、用品需經嚴格消毒處理且擺放井然有序，便于使用。工作人員的手臂在操作前要用酒精棉消毒。本實驗所采用的胚胎冷凍保護劑為甘油，多步脫甘油解凍處理后進行移植，移植程序為:胚胎解凍→胚胎質量鑒定→合格胚胎裝管→移植。

4. 胚胎移植。將解凍裝管的胚胎在較短的時間內(原則上不超過10分鐘)植入受體牛體內，同時要注意兩手的協調性，避免在移植的過程中擦破子宮內膜。移植部位是黃體發育較好一側子宮角的上二分之一至下三分之一，如有可能則越深越好。

5. 移植后受體牛的飼養管理。受體牛要栓系圈養，保持環境安靜，避免應激。每天補飼精料2.5千克，精料要營養豐富、品質優良，同時，供給優質牧草，注意補充維生素A、D、E和微量元素及礦物質，每天飼喂青貯飼料25千克以上，禁止飼喂霉變飼料。

四、結果

對85頭受體牛進一步篩選，共選出適宜胚胎移植的母牛46頭，經過二次同期發情處理，3個月后進行直腸妊娠檢查，確定移植妊娠的15頭，移植平均妊娠率為32.6%。產犢11頭，其中母犢10頭、公犢1頭，產犢率73.3%，性別控制準確率達90.9%。

五、討論

1. 與受胎率相關的主要因素。此次選擇的母牛發情正常，營養狀況良好，經產牛年齡為1.5~6歲，無產科疾病，但受胎率仍較低，主要原因有2方面:一是初次進行胚胎移植，缺乏實踐經驗，技術員水平較低。二是胚胎質量。胚胎質量也是決定移植成功與否的重要因素之一，只有好的胚胎才能獲得較高的受胎率。選擇A級胚胎可保證獲得較高的受胎率，但此次移植的胚胎全部是B級，所以移植試驗的受胎率相對較低。

2. 發情癥狀與受胎率的關系。受體牛的兩次發情癥狀明顯，外陰腫脹明顯，黏液量多，清亮干凈的受胎率較高。

3.黃體發育與受胎率的關系。通過對受體牛進行直檢，黃體發育直徑在0.6~1.5厘米之間，凸出卵巢表面，有彈性、柔軟的受胎率高。

4. 受體牛的年齡跟受胎有關。此次移植選擇的受體牛為1~4胎的經產牛，受胎牛15頭，其中青年牛6頭，占40%，青年牛相對經產牛受胎率較高。

5. 受體牛的飼養管理。對牛群進行精心飼養管理，日糧精粗搭配，在胚胎移植前6~8周開始加強營養供給，在同期發情處理前1周開始飼喂精料，每天2.5千克，直到胚胎移植時。苜蓿、黑麥草自由采食，粗料以青貯玉米秸為主。保持牛體況良好，膘情中等。受體牛自由運動。

(作者聯系地址:許婭虹 馬云章 李寧仙 云南省個舊市畜牧技術推廣站 郵編:661110;王建云 龍梅 云南省紅河州動物衛生監督所 郵編:661110)