1 206例呼吸道感染兒童肺炎支原體DNA檢測結果分析

鐘偉明，郭 靜，陳 俏

（廣西貴港市婦幼保健院檢驗科，廣西貴港 537100）

肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae，MP）是小兒呼吸道感染的重要病原體之一，除呼吸道感染（咽炎、支氣管炎、肺炎）外，MP尚可通過血行播散或免疫機制引起腦炎、腎炎、心肌炎等多種肺外并發癥[1-2]，對兒童健康有較大危害性。近年來MP感染的發病率呈上升趨勢[3]。多項研究顯示，10%～30%的社區獲得性肺炎病例由MP引起[4]，而兒童社區獲得性肺炎中，有近40%由MP引起。肺炎支原體性肺炎（MPP）通常表現為一類非典型的肺炎，常見癥狀：頭痛、肌痛、咽喉炎、干咳等，白細胞計數正常或輕度升高。但其癥狀、體征及胸部X線缺乏特異性，確診需依靠病原學檢查。

以往認為MPP為自限性疾病，臨床經過和預后較好。但是近年發現部分MPP患兒病程長、癥狀重、甚至會遺留肺部損害和肺外表現[5]，因此，MPP早期診斷及治療越來越來受到重視。本研究采用FQ-PCR對1 206例呼吸道感染患兒的咽拭子標本檢測MP-DNA，為臨床診斷MPP提供準確快速的診斷依據。

1 材料與方法

1.1 對象

2008年2月～2009年3月我院兒科收治1 206例呼吸道感染患兒中，男698例，女508例；入院年齡1月齡～12歲；病程2～20 d。經臨床檢查，均為呼吸道感染，有發熱、咳嗽等癥狀，已排除其他病因。

1.2 標本采集

用濕潤了的無菌生理鹽水咽拭子，采集患兒上腭懸雍后部分泌物，置于干燥試管中，密封立即送檢。

1.3 試劑與方法

儀器為中山大學達安基因股份公司DA7600實時熒光定量PCR擴增儀，試劑為中山大學達安基因股份公司生產的肺炎支原體核酸擴增熒光定量檢測試劑盒，嚴格按試劑說明書操作。

1.4 統計學方法

所有數據分析采用SPSS 11.0統計軟件包處理，計數資料的比較采用χ2檢驗。

2 結果

咽拭子MP-DNA的檢測結果見表1。

表1 不同年齡組兒童MP感染的檢出率（例）Tab.1 Detection rate of MP infection in different age children(case)

2.1 MP總檢出率

1 206例呼吸道感染患兒中，MP-DNA陽性435例，總檢出率為36.0%。

2.2 不同性別患兒MP檢出率

受檢男性患兒698例，檢出陽性254例，檢出率為36.4%；受檢女性患兒508例，檢出陽性181例，檢出率為35.6%。男女性別之間MP檢出率差異無統計學意義（χ2=0.07，P＞0.05）。

2.3 不同年齡組兒童MP感染的檢出率

1 206例呼吸道感染的患兒中MP-DNA總陽性數為435例，其中小于1歲141例，1～3歲198例，4～6歲60例，7～14歲36例，陽性者主要為1～3歲的患兒。各年齡組之間檢出率比較差異無統計學意義（χ2=4.33，P＞0.05）。

3 討論

支原體是一種介于病毒和細菌之間能獨立生活的最小微生物，廣泛存在于自然界中。MP是對人類有致病性的主要支原體，主要通過呼吸道飛沫傳播，是各年齡段兒童急性呼吸道感染的常見病原。近年來，肺炎支原體感染明顯上升，不僅引起嚴重的肺炎，還引起嚴重的并發癥或持久的后遺癥，嚴重的肺炎也可導致死亡。MPP一年四季均有發生，并可在學校、幼兒園等人群密集場所暴發流行，學齡兒童及嬰幼兒普遍易感。

本研究使用MP熒光定量PCR進行檢測，男性患兒檢出率為36.4%，女性患兒為35.6%；男女之間MP檢出率差異無統計學意義。MP總檢出率為36.0%，與方紅等[6]的報道基本一致。

既往認為MP感染多見于學齡兒童及青少年，但近年來，報道嬰幼兒感染病例逐漸增多。本文中小于1歲組的檢出率為35.8%，1～3歲組的檢出率為37.9%，顯示嬰幼兒發病率有增高趨勢，呈現低齡化趨勢[7]。其原因可能包括：①肺炎支原體感染年齡前移；②實驗室檢測技術進步；③臨床醫師對肺炎支原體感染的重視程度及診斷意識不斷提高。這兩年齡組MP感染發病人數最多，MP檢出率也最高，分析其原因是嬰幼兒免疫功能不健全，易被各種病原體感染。各年齡組MP-DNA檢出率比較，差異無統計學意義，以1～3歲組最高，為37.9%。

肺炎支原體感染的臨床表現、肺部X線表現均不具特異性，故本病的診斷主要根據實驗室檢查結果。實驗室診斷方法有支原體分離培養、血冷凝集實驗、支原體特異性抗體檢測及PCR等方法。分離培養MP對診斷和鑒別診斷有決定性意義，但是其要求高且需要時間長，而且檢出率低，難以被臨床接受，因而限制了其在臨床的推廣應用。以往臨床依賴血冷凝集試驗進行診斷，但病程在1周以上才會有陽性結果，而且與其他感染有一定的交叉反應，無法滿足早期診斷和早期治療的目的。抗MP-IgM是機體受支原體感染最早出現的特異性抗體，它于發病后1周左右可檢出，10～20 d達高峰，12～16周轉陰，易受以下因素影響。①患兒年齡：因嬰幼兒免疫系統發育尚未完全，在MP感染后抗體生成不足，影響檢出率；②病程：MP-IgM發病后1周左右才開始上升，對于小于1周病程的易造成漏診、誤診；③免疫功能狀態：對于免疫低下患兒，其免疫反應低，IgM升高幅度很低，抗MPIgM檢出率低。因此，MP-IgM存在一定的局限性[8]。

PCR技術用于病原體的檢測，其敏感性、穩定性是以往其他檢測技術無法比擬的，但存在基因高效擴增造成增產物污染而導致假陽性的可能。1995年出現的以標記特異性熒光探針為特點的熒光定量PCR技術完全閉管式操作，大大減少了擴增物污染的機會，提高了檢測特異性，并可對擴增物進行精確定量[9]。FQ-PCR技術巧妙地利用了PCR的DNA高效擴增、探針技術高特異性和光譜技術的敏感性及定量分析的優點，解決了以上問題，可作為肺炎支原體感染的早期診斷的有效方法。

本研究結果表明，采用FQ-PCR檢測MP-DNA法既有利于早期診斷，又能提高診斷的準確性。肺炎支原體感染率較高，對小兒呼吸道感染患者進行MP-DNA檢測，有利于支原體肺炎的早期診斷及合理治療。

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[4]Liebeman D,Schlaeffer F,Lieberman D,et al.Mycoplasma pneumoniae community-aquired pneumonia a review of 101 hospitalized adult patients[J].Respiration,1996,63(5):261-266.

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[6]方紅,楊雪香,陳冬蓮.不同年齡兒童呼吸道感染肺炎支原體IgM與DNA的相關性研究[J].中華醫院感染學雜志,2007,17(8):1024-1025.

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[8]懂傳莉,謝懷珍.不同年齡組支原體肺炎臨床分析[J].蚌埠醫學院學報,2008,33(3):333-335.

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