IGF-II在原核生物中的表達＊

王慶忠,任科云

(濰坊學院,山東 濰坊 261061)

IGF-II在原核生物中的表達＊

王慶忠,任科云

(濰坊學院,山東 濰坊 261061)

胰島素生長因子IGF-Ⅰ和 IGF-Ⅱ在機體的許多組織中都有表達,具有促進細胞生長和分裂等的多種生物學功能。在本研究中,我們采用RT-PCR法克隆和擴增到了IGF-Ⅱ基因,通過雙酶切、膠回收純化、連接后得到了p ET21b-IGF-Ⅱ重組質粒載體,然后將其轉化DH5α中,經IPTG誘導后表達的重組蛋白經純化,并用Western blot檢測,顯示重組質粒p ET21b-IGF-Ⅱ編碼一個約25kD的外源蛋白。

IGF-Ⅱ;RT-PCR;原核表達載體;表達

胰島素樣生長因子(insulin-like grow th factors,IGFs)是一類既有細胞分化和增殖活性,又有胰島素樣作用的多肽,包括IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ兩種。IGF-Ⅱ也被稱為生長調節素A(somatomedio A)。是Dechiara T M等發現的第一個內源性印跡基因表達產生的生長因子[1]。IGF2為單鏈多肽,分子量7.5ku,有A、B、C、D四個區域[2-3]。IGFs在結構和功能上與胰島素相似,具有促進細胞有絲分裂的生物學功能,對細胞的生長與分化起重要的調節作用,機體的許多組織器官都有IGFs的表達[4]。最近又發現IGF-Ⅱ能刺激神經及肌肉再生,是目前生物、醫學領域研究的熱點。由于天然IGF-Ⅱ的分離困難,阻礙了研究的深入。因此,我們利用基因工程方法克隆IGF-Ⅱ基因,構建原核表達載體,并在原核細胞中表達IGF-Ⅱ因子,為其調控機制研究以及它的應用打下基礎。

1 實驗材料

ICR小鼠購自濰坊醫學院實驗動物中心。

菌株為DH5α和BL21(DE3)。質粒為p GEM-T vector(Promega)和p ET21b vector(Novagen)主要化學試劑及耗材包括 TRlzol Reagent(Invitrogen)、Ribonuclease Inhibito r(aKaRa Biotech)、限制性內切酶(TaKaRa Biotech)、LA Taq DNA polymerase(TaKaRa Biotech)、M-MLV(Invitrogen life technologies)、T4 DNA Ligase(Promega)、凝膠回收試劑盒和質粒回收試劑盒(天為時代)、低分子量蛋白M arker (上海生科院研制)等。

2 研究方法

2.1 引物設計與合成

以p rimer 5.0軟件設計引物,并用verto r N TI 9.0進行分析。……