HBsAg陰性血清模式與HBV DNA的關系及臨床意義

陳應華，肖 燕，李 佳，邱隆敏，林世德，陳 宇

（遵義醫學院附屬醫院 感染科，貴州 遵義 563000）

乙型肝炎是一種嚴重危害人類健康的傳染性疾病。而乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性的乙型肝炎約占乙型肝炎患者的10%~25%，HBsAg陰性HBV感染是臨床不明原因慢性肝炎的常見原因之一。因此對HBsAg陰性的HBV感染能及早的發現并進行及時治療非常重要。本文HBsAg陰性但有其他HBVM陽性血清標本進行HBV DNA熒光定量PCR和肝功能檢測，從不同角度較為系統的觀察了HBsAg陰性血清模式與HBV DNA的關系及HBsAg陰性慢性HBV感染者血清中HBV DNA水平，并對肝功能正常和肝功能異常組血清中的HBV DNA陽性率作了分析。目的在于了解HBsAg陰性但有其他HBVM陽性中哪種血清模式HBV DNA陽性率更高，以及病毒載量與肝功能損害的關系，主要針對基層醫院進行肝穿刺檢查較困難，從血清學的角度對臨床上遇到的不明原因慢性肝炎在病因診斷方面提供一定的幫助。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 我院門診及住院的185份HBsAg陰性但有其他HBVM陽性的血清標本。男163例，女22例，年齡13~76歲，中位年齡45.5歲，肝功能正常者135例，肝功能異常者50例。所有慢性肝病患者診斷均符合2000年9月西安會議制訂的《病毒性肝炎防治方案的診斷標準》。并除外HAV、HCV、HDV、HEV感染，同時也排除了脂肪肝、酒精性肝病和藥物性肝病等。

1.2 標本收集 清晨空腹采取外周靜脈血3ml，分離血清－20℃保存備用，避免溶血、高血脂標本，同一時間統一用熒光定量PCR檢測儀（型號：LightCycler美國 Roche公司） 檢測 HBV DNA，以＜1.00×102copies/ml。同期用OLMPUS2700全自動生化分析儀常規檢測血清TBIL、ALT水平，并對肝功能異常者進行腹部B超檢查。

1.3 統計學處理 研究數據按成組統計要求收集、整理、建立數據庫，采用SPSS12.0軟件進行統計分析，以均數±標準差（x±s）表示，率的比較采用 χ2檢驗，計量資料的比較采用方差分析。

2 結果

表1 不同HBVM血清模式與HBV DNA的關系

表2 HBV DNA與肝功能的關系

2.1 在HBsAg陰中不同HBVM血清模式與HBV DNA的關系見表1。

2.2 HBsAg陰性的血清標本中，HBV DNA與肝功能的關系，兩組HBV DNA陽性率差異有顯著性(P<0.01),見表 2。

3 討論

乙型肝炎是我國的常見病、多發病,目前臨床上仍以檢測HBV的某些免疫學標志物尤其是HBsAg來確定HBV的感染及體內有無HBV存在,而HBV DNA是HBV感染及復制的最直接指標。許多研究表明,在血清HBsAg陰性但其他HBVM陽性的人群中仍有可能存在HBV感染,其中的一個重要原因是由于S基因變異造成部分患者HBsAg呈現陰性[1]，但其體內仍存在低水平HBV,這部分患者的確診主要依據PCR法檢測血清或肝組織中HBV DNA。從表1發現，在HBsAg陰性但有其他HBVM陽性的185份血清標本中，共測出HBV DNA陽性39例，陽性率為21.08%，進一步證實HBsAg陰性并不能排除HBV感染。有研究發現，在HBsAg消失后4年，仍可在外周血單核細胞(PBMC)中檢測到HBV DNA,因此肝外組織細胞病毒的存在可能是隱匿性HBV感染的病灶。一般認為，免疫應答是終止HBV復制的主要機制，在機體免疫功能低下或免疫耐受狀態時，可能無法清除低水平的病毒而出現隱匿性感染。本文結果還發現在這部分HBVM陽性標本中Anti-HBs+Anti-HBc組陽性率最低 (10%)，進一步證實Anti-HBs是保護性抗體，可中和HBV，是HBV感染恢復的標志，但當HBsAg發生變異引起免疫逃避時也可檢出Anti-HBs[2]，故Anti-HBs陽性標本仍有少部分可檢出HBV DNA陽性。本文還發現單項Anti-HBc組及Anti-HBc+Anti-HBe組陽性率較高 (22.84%，32.2%),與Anti-HBs+Anti-HBc組比較差異有顯著性(P＜0.05)。 可能是單項Anti-HBc組有部分人群處于HBV感染的窗口期，此時HBsAg消失但Anti-HBs還未產生，仍有低水平的HBV復制；慢性乙肝感染,HBsAg水平很低，用一般的血清學法不能檢測出HBsAg；既往乙肝感染,由于Anti-HBc比Anti-HBs在體內存在時間長，因此Anti-HBs已消失或在可檢測水平以下時,Anti-HBc仍存在。而在Anti-HBc+Anti-HBe組檢測到32.2%的HBV DNA陽性率，其陽性率與既往報道[3]的HBsAg＋Anti-HBc+Anti-HBe模式的HBV DNA陽性率（31.6%）接近，這部分感染者可能存在HBsAg低水平.

有研究表明在HBV自然感染后產生單項Anti-HBs的人群中也檢測到低水平的HBV DNA，在劉愛平的研究中[4]，14例單項Anti-HBs陽性者中檢測出2例血清HBV DNA陽性，在劉耀敏的研究中[5]發現59例單項Anti-HBs陽性者的血清中檢測到4例HBV DNA陽性，本文在24例單項Anti-HBs陽性標本血清中未檢測到HBV DNA，可能與樣本例數較少有關。

Chemin等[6]研究發現，在50例不明原因的肝病患者中，15例檢測到HBV DNA陽性，陽性率30%，在這15例中，8例有肝纖維化或肝硬化，隨訪中反復肝組織學檢查發現，有2例由原來慢性肝炎發展為肝硬化。另外，Brechot C等[7]在不明原因慢性肝病患者的肝組織及血清中檢測到HBV DNA，這些發現可以說明，隱匿性的HBV感染是不明原因的肝病的病因之一。本文顯示，肝功能正常組135例其中有20例HBV DNA陽性，陽性率14.81%，而在肝功能異常組50例中就有19例檢測出HBV DNA，陽性率達38%，明顯高于肝功能正常組，差異有顯著性(P＜0.01)。提示肝功異常組隱匿性HBV感染率高于肝功能正常組。本結果提示我們在臨床工作中，對HBsAg陰性而肝功能異常者，有必要檢測血清HBV DNA來明確是否有HBV感染，對有條件的醫院，還應進行肝組織活檢,通過免疫組化檢測肝組織HBV DNA或HBsAg、HBcAg來確定是否存在隱匿性乙肝病毒感染。

[1]黃利華,謝志萍,童福易,等.HBsAg陰性/HBVDNA陽性與S基因變異的關系附8例報告 [J].傳染病信息，2001，14(4)：165-167.

[2]斯崇文.近十年醫學新近展[J].中華醫學雜志,1994,74(2):728.

[3]邱隆敏，羅亞文，吳亞麗，等．乙肝病毒DNA與血清免疫標志物的對比研究[J]．遵義醫學院學報，1998，21(3):19-20.

[4]劉愛平，龐曉鷹，周大明，等.隱匿性乙型肝炎79例臨床與病理分析 [J].中西醫結合肝病雜志，2006，16（1）：13-15.

[5]劉耀敏，薛承巖,白連祥，等.乙型肝炎病毒在HBsAg陰性模式者血液中的檢測情況[J].河北醫學，2002，8（8）：717-718.

[6]Chemin I,Jeantet D,Kay A,et al.Role of silent Hepatitis B virus in chronic hepatitis B surface antigen(-)liver disease[J].Ativiral Res,2001,33:972-976.

[7]Brechot C,Thiers V,Kremsdorf,et al.Persistent Hpatitis B virus infection in subjects without hepatitis B surface antigen clinicly significant of purel“occult”[J]?Hepatology,2001,34:194-203.