CD105在急性白血病中的表達及其臨床意義

何建業 張秋堂

CD105是內皮細胞表面與增殖相關的膜抗原，同時又是調節轉化生長因子-β (Transforming growth factor β，TGF-β)受體復合物成分之一，其主要作用為抑制TGF-β的生物學效應，促進血管新生，是新生血管的標志。然而，CD105在腫瘤細胞，如原發性或轉移性黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌、卵巢的子宮內膜樣癌細胞上弱表達［1］。國外研究表明，CD105在部分急性白血病細胞高表達［1］，其臨床意義需要進一步研究，國內未見報道。本文應用流式細胞術檢測了急性白血病骨髓細胞中CD105的表達，并探討了其臨床意義。

1 資料和方法

1.1 一般資料 初治和復發急性白血病患者61例，其中ALL18例，AML43例;患者平均年齡38歲(14～70歲)，男40例，女21例，初治患者52例，復發患者9例。均為鄭州大學第一附屬醫院血液科2007年5月至2007年12月住院患者，經臨床、血常規和骨髓細胞形態學與細胞化學染色，流式細胞學分型等檢查后確診，符合1991年FAB分型診斷標準［2］。浸潤組定義為有淋巴結、肝脾腫大及齒齦腫脹的患者。對照組15例，男9例，女6例，年齡20～50歲(平均35歲)均為患非惡性血液疾病的住院患者，血常規及骨髓形態學正常，無肝、脾及淋巴結腫大。

誘導緩解治療方案及療效判斷初治AML患者(除M3外)采用標準蒽環類藥物聯合阿糖胞苷(3+7)方案進行誘導化療。M3患者主要采用全反式維甲酸或全反式維甲酸聯合亞砷酸誘導治療，直至完全緩解(CR)。ALL患者接受標準VDCP(長春新堿、柔紅霉素、環磷酰胺、強的松或地塞米松)方案或VDCLP(VDCP+左旋門冬酰胺酶)作為誘導緩解治療，1個療程治療結束3周后，根據血常規和骨髓細胞學檢查，參照張之南主編的《血液病診斷及療效標準》(第三版)［2］判斷療效。

1.2 實驗材料 CD105鼠抗人CD105單克隆抗體為美國Lab Vision公司產品;流式細胞儀:FAC-Scan型，美國 BECTON DICKINSON(BD)公司。

1.3 實驗方法 在無菌條件下按照常規操作穿刺，抽取骨髓1 ml，肝素抗凝，用0.01 mol/L，PBS1∶1 稀釋，以淋巴細胞分離液(Ficol，l密度1.077)按常規方法分離骨髓單個核細胞，并調整細胞濃度為1×106/L。取2支試管，1管為參照管，加有IgG1;另1管為試驗管，加有FITC結合的CD105單克隆抗體(為美國Lab Vision公司產品，1∶20稀釋)，各取100μl細胞懸液加入2管，室溫避光孵育30 min，PBS洗滌3次后用流式細胞儀檢測骨髓細胞CD105的表達水平。流式結果判定:以Cell Quest軟件獲取分析數椐，定量分析每管樣品中10000個細胞，檢測細胞中CD105抗原的表達率。

1.4 統計學處理 應用SPSS 11.0統計軟件進行數據處理，統計數據以樣本均數±標準差(x±sD)表示，首先對資料進行正態及方差齊性檢驗。多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，以上均取α=0.05為顯著性檢驗水準。

2 結果

2.1 CD105在急性白血病的表達 CD105在急性白血病的表達率［(30.39±8.69)%］明顯高于在對照組表達率［(1.90±0.61)%］(P＜0.05)。ALL患者CD105陽性率為［(49.92±16.71)%］，AML 患者 CD105陽性率為［(22.21±9.95)%］，兩者間差異有統計學意義(P＜0.05)，AML患者CD105表達率顯著高于對照組(P＜0.05)。結果如圖1示。

2.2 CD105在不同類型急性白血病的表達 CD105在急性白血病各亞型中的表達有差異(表1)，表達率最高的是B-ALL，其次是AML-M5。在AML-M3中，有2例復發患者CD105的表達率均＞40%，余樣本表達率在(0～10)%。見表1。

表1 CD105在急性白血病各個類型中的表達

2.3 CD105與臨床的關系 在10例AL患者中CD105化療前表達率［(48.74±16.45)%］，緩解后表達率為［(3.99 ±1.45)%］，兩者相比有統計學意義(P＜0.05);浸潤組CD105表達率［(41.39±14.05)%］高于非浸潤組表達率［(21.06±9.14)%］(P＜O.01);初治組［(30.92±9.92)%］和復發組［(24.17±10.06)%］的表達率顯著高于對照組(P＜0.05)，緩解組表達率［(3.99±1.45)%］與對照組相比無統計學意義(P＞0.05)。進一步觀察CD105水平與治療反應，發現經過一療程誘導治療達完全緩解者 CD105表達率［(25.74±10.50)%］低于未達到緩解者表達率 ［(40.73±14.37)%］(P ＜0.05)。

圖1 CD105在急性白血病細胞的表達

3 討論

CD105為細胞膜糖蛋白，是TGF-β受體復合物的成分之一，能調節細胞對TGF-β的反應，是新生血管的標志。CD105能調節內皮-間質間的信號傳遞，參與血管新生過程，而血管新生是腫瘤普遍存在的特征，與腫瘤組織的浸潤、轉移密切相關。在不同組織來源的惡性腫瘤中，CD105在腫瘤組織及其周圍的動脈、靜脈的內皮細胞強表達［4］，并且CD105主要在未成熟的血管表達，少數情況下可在腫瘤細胞弱表達［5］，由于CD105在惡性腫瘤中的表達可以反應出腫瘤血管新生和內皮細胞活躍情況，所以CD105的高表達可作為惡性腫瘤患者轉移和預后判斷的指標之一。

近年來CD105在腫瘤細胞上的表達也做了大量的研究，其在急性B淋巴細胞白血病表達82%，在急性T淋巴細胞白血病表達7%。CD105在急性髓系白血病中表達47%，在急性髓系白血病亞型中表達陽性率M1為35%，M2為47%，M3為0%，M4為26%，M5為32%［1］。本文實驗結果提示:CD105在B型急性淋巴白血病中表達率明顯高于在急性髓系白血病表達率，且在急性T淋巴白血病中表達低，與上述報告一致。而CD105在急性髓系白血病各亞型中表達情況與文獻對比各亞型表達率略有不同，可能與本研究各亞型收集樣本量較小有關。

文獻報道:CD105表達在前-B淋巴細胞白血病和髓系白血病細胞上，由于CD105在骨髓腫瘤細胞上的過表達抑制了TGF-β對骨髓的增殖抑制作用，因此CD105間接促進了骨髓的過度增殖，考慮這為CD105在急性白血病中發病機制［6］。本研究發現，急性白血病初治組CD105的表達水平顯著高于對照組表達水平，緩解組表達比初治組顯著降低，而復發患者表達再次升高，可能提示異常表達的CD105與急性白血病發病有關。本研究結果進一步表明，CD105在化療前后表達水平有顯著差異，且浸潤組CD105表達率顯著高于非浸潤組的表達率，這表明CD105是白血病細胞生物學行為重要的影響因素。El-Gohary［7］等發現CD105與腫瘤的預后有關。本研究觀察到CD105表達水平與治療的反應有關，CD105表達水平高的緩解率低。提示CD105的表達可能與白血病預后有關。因此，CD105在急性白血病中的高表達可能與急性白血病的發生、發展和預后以及類型有關。

［1］Fonsatti E，Del Vecchio L，Altomonte M，et al.Endoglin:An accessory component of the TGF-beta-binding receptor-complex with diagnostic，prognostic，and bioimmunotherapeutic potential in human malignancies.J Cell Physiol，2001，188(1):1-7.

［2］張之南，沈悌.血液病診斷及療效標準.科學出版社，2007:131-133.

［4］Li SL，Gao DL，Zhao ZH，et al.Correlation of matrix metalloproteinase suppressor genes RECK，VEGF，and CD105with angiogenesis and biological behavior in esophageal squamous cell carcinoma.World J Gastroenterol，2007，13(45):6076-6081.

［5］Yu D，Zhuang L，Sun X，et al.Particular distribution and expression pattern of endoglin(CD105)in the liver of patients with hepatocellular carcinoma.BMC Cancer，2007，7:122.

［6］Letamendia A，Lastres P，Almendro N，et al.Endoglin a component of the TGF-beta receptor system，is a differentiation marker of human choriocarcinoma cells.Int J Cancer，1998，76(4):541-546.

［7］El-Gohary YM，Silverman JF，Olson PR，et al.Endoglin(CD105)and vascular endothelial growth factor as prognostic markers in prostatic adenocarcinoma.Am J Clin Pathol，2007，127(4):572-579.