西昌地區(qū)石榴葉霉病的病原鑒定*

鄭曉慧, 卿貴華, 鐘 川

(1.西昌學(xué)院園藝系,西昌 615013; 2.西昌學(xué)院農(nóng)學(xué)系,西昌 615013;3.四川涼山州農(nóng)業(yè)局多經(jīng)站,西昌 615000)

石榴(Punica granatum Linn.)為石榴科(Punicaceae)石榴屬(Punica L.)落葉果樹,其果汁、果皮、籽、葉片中,都含有豐富的天然活性物質(zhì),特別是抗氧化活性物質(zhì),近年來的多項研究成果表明了其延緩衰老、預(yù)防動脈粥樣硬化、減緩癌變進程的作用優(yōu)于綠茶、紅酒以及幾乎所有水果[1],因此石榴具有很高開發(fā)利用價值。

在石榴生長過程中,受到多種病害的危害,如:麻皮病(Sphaceloma punicae)、干腐病(Coniella granati)、褐斑病(Cercospora punicae)、“太陽果”病(Alternaria alternata)、枯萎病(Ceratocystis f imbriata)等[1-3],這些病害不僅嚴(yán)重影響石榴的產(chǎn)量,同時也使石榴果實的商品性下降。在石榴生長后期,褐斑病一直被認(rèn)為是造成石榴提早落葉的主要病害,作者自2004年以來,對引起石榴提早落葉的病害進行了研究,發(fā)現(xiàn)癥狀與以往報道的褐斑病有較大差異,因此,對該病病原進行了分離鑒定。

1 材料與方法

1.1供試材料

2004-2008年分別從四川西昌市禮州田壩村、西昌學(xué)院石榴園采集病葉,并隨即進行病菌分離。

1.2 病原菌分離

參照方中達(dá)的方法用PDA培養(yǎng)基進行組織分離[4],在22℃恒溫箱培養(yǎng)4～5 d后,待產(chǎn)生大量的卵圓形、橢圓形、近圓形的分生孢子后在水瓊脂培養(yǎng)基上進行單孢分離純化。

1.3 接種試驗

1.3.1 離體葉片接種

將純培養(yǎng)后產(chǎn)生的分生孢子制成分生孢子懸浮液,用針刺法接種于經(jīng)表面消毒的健康離體石榴葉片上,石榴葉放入直徑20 cm的消毒培養(yǎng)皿內(nèi),接種葉片下墊經(jīng)無菌水濕潤的滅菌濾紙,放入28℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)4 d,設(shè)無菌水對照。

1.3.2 果園接種

本試驗在西昌學(xué)院石榴園中進行。將純培養(yǎng)后產(chǎn)生的分生孢子制成分生孢子懸浮液,用針刺法接種于經(jīng)表面消毒的西昌學(xué)院石榴園健康石榴葉片上,接種后的石榴枝條套上塑料袋進行保濕,設(shè)無菌水對照。

2 試驗結(jié)果

2.1 病害田間癥狀

該病一般發(fā)生在石榴生長的后期,通常先從下部葉片開始發(fā)病。從葉尖或葉緣開始發(fā)病,逐漸向下擴展,形成褐色或黑褐色病斑(圖1a),略帶油漬狀,病健交界不明顯,后期葉背面密生橄欖綠色霉層。

圖1 石榴葉霉病的癥狀

2.2 病原菌形態(tài)

病原菌分生孢子梗簇生,屈膝狀,表面平滑,褐色。分生孢子鏈生,卵圓形、橢圓形、近圓形、黃褐色,雙層壁,有隔膜0～2個,孢子大小(3.88～25.9)(12.3)μm×(2.88～4.8)(3.92)μm(圖2)。鑒定為極細(xì)枝孢(Cladosporium tenuissimum)。

圖2 極細(xì)枝孢(Cladosporium tenuissimum)

2.3 接種結(jié)果

果園接種及離體葉片接種7 d后葉上出現(xiàn)與田間相同的癥狀,針刺部位病斑擴大并形成褐色病斑,葉背密生橄欖綠色霉層,再分離成功(圖1b)。

3 結(jié)論與討論

石榴葉霉病主要發(fā)生在石榴生長的后期,是引起石榴提早落葉的主要病害之一。通過顯微觀察,對病原菌進行形態(tài)觀察和測量,根據(jù)觀察結(jié)果參考張中義主編的《中國真菌志》第14卷進行分類鑒定,其病原菌為極細(xì)枝孢(Cladosporium tenuissimum Cooke)。

在石榴生長后期,葉片上發(fā)生的病害主要是石榴葉霉病和由Cercospora punicae引起的褐斑病,在病害的診斷上有時容易混淆,其實兩者從病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律到田間癥狀均有顯著的區(qū)別。石榴褐斑病在石榴整個生長季節(jié)均可發(fā)生,既危害葉片,在葉片上形成圓形、近圓形,褐色或黑褐色小而密集的病斑,后期在病部可見呈同心輪狀的小黑點,即病原菌的子座。同時還危害果實,在果實上形成很多黑色或黑褐色不規(guī)則微凹病斑,對石榴的產(chǎn)量和質(zhì)量都造成很大的影響,是石榴的主要病害。而石榴葉霉病發(fā)生在石榴生長后期,一般只危害葉片,所形成的病斑比褐斑病大,但病斑數(shù)量沒有褐斑病的多,同時,在病斑上可見密生的橄欖綠色霉層,對石榴造成的影響遠(yuǎn)沒有褐斑病大。

在張中義主編的《中國真菌志》第14卷中報道了目前我國胡蘿卜、梧桐、黃花落葉松、美人蕉、月季花、千里光、石榴等18種植物上由C.tenuissimum引起的病害[5],但并未對C.tenuissimum引起的石榴病害進行描述,其標(biāo)本的采集地為云南蒙自和昆明,因此,不能確定是否就是作者研究的石榴葉霉病。近年來國內(nèi)研究報道了由極細(xì)枝孢引起的新林木病害雪松針葉枯斑病[6],國外報道了由極細(xì)枝孢引起的黃瓜果實畸形病害[7]以及芒果花穗病害[8],但一直未見有極細(xì)枝孢危害石榴引起葉霉病的系統(tǒng)報道。對該病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律及防治的研究,將在以后的工作中進行。

[1] 鄭曉慧,易言郁,徐彪,等.石榴“麻皮"病病原研究[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2004,19(4):498-499.

[2] 鄭曉慧,徐彪.石榴“太陽果”病病原研究[J].云南大學(xué)學(xué)報,2005(2):387-389.

[3] 劉云龍,何永宏,王新志.國內(nèi)一種果樹新病害——石榴枯萎病[J].植物檢疫,2003,19(4):206-208.

[4] 方中達(dá).植病研究方法[M].第 3版.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1998.

[5] 張中義.中國真菌志(第十四卷)[M].北京:科學(xué)出版社,2003:166-168.

[6] 雷桂林,劉云龍,劉雪峰,等.雪松針葉枯斑病病原鑒定及其生物學(xué)特性研究[J].林業(yè)科學(xué)研究,2003,16(4):453-458.

[7] Batta Y A.Clad osporium tenuissimum Cook e(Deuteromycotina:Hyphomycetes)as a causal organism of new disease on cucumber fruits[J].European Journal of Plant Pathology,2004,110(10):1003-1009.

[8] Dagoberto G S,Maria J YM,Daniel T O,et al.Morphological and molecular characterization of Cladosp or ium tenuissimum(Deuteromycotina:Hyphomycetes)on mango tree panicles:symptom,pathogenicity and severity of the fungus[J].Fruits,2007,62:361-368.