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膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白TaqIB基因多態(tài)性與視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞的關(guān)系

2010-11-22 06:41:22西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院西安710061
陜西醫(yī)學(xué)雜志 2010年2期

西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院(西安710061)

王小東* 張德秀

視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞(Central retinal vein occlusion,CRVO)是常見的視網(wǎng)膜血管病,也是致盲的眼底病之一。病因比較復(fù)雜,與動(dòng)脈硬化、高血脂、血液高粘度和血流動(dòng)力學(xué)有密切關(guān)系[1]。膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)基因突變可致動(dòng)脈粥樣硬化和血脂改變。本研究觀察了60例CRVO患者和120例對照者 CETP TaqIB基因多態(tài)性,旨在探討其對視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞的影響。

對象與方法

1 研究對象 收集了我院 2008年11月到 2009年3月經(jīng)眼底熒光造影確診并排除了糖尿病、嚴(yán)重的心腦血管疾病及腎功能不全等全身疾病的CRVO患者60例,男43例,女17例,年齡 35~62歲,平均(48±6)歲。對照組 120例,來自我院其他疾病患者及體檢人員,與病例組按年齡、性別、體重、煙酒史進(jìn)行 1∶2配比,并排除了糖尿病、嚴(yán)重的心腦血管疾病及腎功能不全等全身疾病。兩組均為無血緣關(guān)系的漢族人。

2 研究方法

2.1 人基因組 DNA的提取:采取空腹靜脈血 3 ml,3.8%枸櫞酸鈉抗凝,采用低滲溶血,鹽析法提取外周血白細(xì)胞基因組 DNA。

2.2 CETP基因型分析:PCR擴(kuò)增相應(yīng)CETP目的片斷,引物1 5’-CACTAGCCCAGAGAGAGGA GTGCC-3’,引物2 5’-CTGAGCCCAGCCGCACAC TAAC-3’,25μl反應(yīng)體系中含有10×PCR反應(yīng)緩沖液5.0μl、MgCl2 4μl、10MdNTPs 1μl、Lmthfr-P1、P2各2μl、Tap DNA 聚合酶 1.25μl、基因組 DNA 5μl。在PE2400熱循環(huán)儀上進(jìn)行熱循環(huán),95℃預(yù)變性 5min,進(jìn)入PCR循環(huán):95℃變性 30s;62℃退火 30s;72℃延伸60s;循環(huán)35次,72℃延伸7min。擴(kuò)增產(chǎn)物用 TaqI酶切,2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定基因型(見附圖)。電泳圖譜上出現(xiàn)535bp一條條帶者為B2B2基因型,361bp和174bp兩條條帶者為B1B1基因型,535bp、361bp和174bp三條條帶者為B1B2基因型。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,基因型及等位基因頻率用χ2檢驗(yàn)。

附圖 CEPT酶切電泳

結(jié) 果

CRVO組和對照組CETP TaqIB基因型及等位基因頻率的分布見附表,可見 CETP TaqIB基因型、B1與B2等位基因頻率分布在兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

附表 CRVO組和對照組 CETP TaqIB基因型及等位基因頻率

討 論

膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)是一種疏水性糖蛋白,CETP基因位于人第 16染色體長臂(16q12-21),長約25kb,含16個(gè)外顯子和15個(gè)內(nèi)含子。介導(dǎo) HDL與富含paoB的v LDL、LDL的脂蛋白之間CE與TG的交換,也參與血漿脂蛋白之間約 50%磷脂的轉(zhuǎn)運(yùn),外周組織的游離膽固醇(FC)被新生的HDL顆粒攝取,經(jīng) LCAT轉(zhuǎn)化為CE,再由 CETP向 LDL、IDL、VLDL轉(zhuǎn)運(yùn),通過LDL受體在肝臟被分解[2]。CETP的基因表達(dá)對體內(nèi)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和脂蛋白的組成起著重要作用,其中 TaqIB基因多態(tài)性具有普遍性,TaqIB基因按等位基因分有B1B1、B1B2、B2B2三個(gè)基因型。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)CRVO患者 TaqIB基因 B1B1基因型頻率顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,B1等位基因頻率也顯著高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明攜帶 B1等位基因的個(gè)體易患CRVO,可能與CETP導(dǎo)致脂質(zhì)代謝異常,在視網(wǎng)膜血管產(chǎn)生動(dòng)脈硬化、血栓形成有關(guān)。

[1] 楊 鈞.現(xiàn)代眼科手冊 [M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993:457.

[2] 鄢盛愷.膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的研究方法與臨床意義[J].國外醫(yī)學(xué)臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊,2003,24:137.

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