膽固醇酯轉運蛋白TaqIB基因多態性與視網膜中央靜脈阻塞的關系

西安交通大學醫學院第一附屬醫院(西安710061)

王小東* 張德秀

視網膜中央靜脈阻塞(Central retinal vein occlusion,CRVO)是常見的視網膜血管病,也是致盲的眼底病之一。病因比較復雜,與動脈硬化、高血脂、血液高粘度和血流動力學有密切關系[1]。膽固醇酯轉運蛋白(CETP)基因突變可致動脈粥樣硬化和血脂改變。本研究觀察了60例CRVO患者和120例對照者 CETP TaqIB基因多態性,旨在探討其對視網膜中央靜脈阻塞的影響。

對象與方法

1 研究對象 收集了我院 2008年11月到 2009年3月經眼底熒光造影確診并排除了糖尿病、嚴重的心腦血管疾病及腎功能不全等全身疾病的CRVO患者60例,男43例,女17例,年齡 35～62歲,平均(48±6)歲。對照組 120例,來自我院其他疾病患者及體檢人員,與病例組按年齡、性別、體重、煙酒史進行 1∶2配比,并排除了糖尿病、嚴重的心腦血管疾病及腎功能不全等全身疾病。兩組均為無血緣關系的漢族人。

2 研究方法

2.1 人基因組 DNA的提取:采取空腹靜脈血 3 ml,3.8%枸櫞酸鈉抗凝,采用低滲溶血,鹽析法提取外周血白細胞基因組 DNA。

2.2 CETP基因型分析:PCR擴增相應CETP目的片斷,引物1 5’-CACTAGCCCAGAGAGAGGA GTGCC-3’,引物2 5’-CTGAGCCCAGCCGCACAC TAAC-3’,25μl反應體系中含有10×PCR反應緩沖液5.0μl、MgCl2 4μl、10MdNTPs 1μl、Lmthfr-P1、P2各2μl、Tap DNA 聚合酶 1.25μl、基因組 DNA 5μl。在PE2400熱循環儀上進行熱循環,95℃預變性 5min,進入PCR循環:95℃變性 30s;62℃退火 30s;72℃延伸60s;循環35次,72℃延伸7min。擴增產物用 TaqI酶切,2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定基因型(見附圖)。電泳圖譜上出現535bp一條條帶者為B2B2基因型,361bp和174bp兩條條帶者為B1B1基因型,535bp、361bp和174bp三條條帶者為B1B2基因型。

3 統計學處理 采用 SPSS13.0統計軟件,基因型及等位基因頻率用χ2檢驗。

附圖 CEPT酶切電泳

結 果

CRVO組和對照組CETP TaqIB基因型及等位基因頻率的分布見附表,可見 CETP TaqIB基因型、B1與B2等位基因頻率分布在兩組間差異有統計學意義(P＜0.05)。

附表 CRVO組和對照組 CETP TaqIB基因型及等位基因頻率

討 論

膽固醇酯轉運蛋白(CETP)是一種疏水性糖蛋白,CETP基因位于人第 16染色體長臂(16q12-21),長約25kb,含16個外顯子和15個內含子。介導 HDL與富含paoB的v LDL、LDL的脂蛋白之間CE與TG的交換,也參與血漿脂蛋白之間約 50%磷脂的轉運,外周組織的游離膽固醇(FC)被新生的HDL顆粒攝取,經 LCAT轉化為CE,再由 CETP向 LDL、IDL、VLDL轉運,通過LDL受體在肝臟被分解[2]。CETP的基因表達對體內脂質轉運和脂蛋白的組成起著重要作用,其中 TaqIB基因多態性具有普遍性,TaqIB基因按等位基因分有B1B1、B1B2、B2B2三個基因型。本研究結果發現CRVO患者 TaqIB基因 B1B1基因型頻率顯著高于對照組,差異有統計學意義,B1等位基因頻率也顯著高于對照組,差異有統計學意義。表明攜帶 B1等位基因的個體易患CRVO,可能與CETP導致脂質代謝異常,在視網膜血管產生動脈硬化、血栓形成有關。

[1] 楊 鈞.現代眼科手冊 [M].北京:人民衛生出版社,1993:457.

[2] 鄢盛愷.膽固醇酯轉運蛋白的研究方法與臨床意義[J].國外醫學臨床生物化學與檢驗學分冊,2003,24:137.