自體 CIK細胞過繼免疫治療晚期非小細胞肺癌的臨床研究

北京軍區(qū)總醫(yī)院胸外科(北京 100700)

李 文 宋立強* 劉吉福

肺癌的發(fā)病率高居惡性腫瘤之首。盡管近年來的化療藥物層出不窮,但療效方面仍然處于難以突破的平臺期[1,2]。肺癌的免疫治療一直在綜合治療中扮演者拾遺補缺的角色,不斷有新理論和新方法充實到臨床實踐當(dāng)中。免疫治療效果差的主要原因之一是肺癌細胞的免疫原性差,無法主動激發(fā)機體有效的免疫應(yīng)答,從而增加了腫瘤細胞免疫逃逸的幾率。因此,提高機體的免疫力,建立有效的免疫應(yīng)答機制是肺癌治療積極有效的途徑。其中輸注自體細胞因子誘導(dǎo)的殺傷(Cytokine induced killer,CIK)細胞療法,被認為是目前新一代過繼免疫治療的首選方案。CIK細胞是外周血單個核細胞(Peripheral blod mononuclear cell,PBMC)在體外經(jīng)過多種細胞因子(IFN-γ、IL-2、anti-CD3 McAb)共同誘導(dǎo)而獲得的一群異質(zhì)細胞,兼具有T淋巴細胞強大的抗瘤活性和NK細胞非 M HC限制殺瘤特點[3]。目前 CIK細胞療法已用于腎癌、結(jié)腸癌、淋巴瘤等的臨床研究,并取得了一定的治療效果[4]。我院自 2005年9月至2006年12月應(yīng)用CIK細胞過繼免疫治療晚期非小細胞肺癌患者 32例,并進行了系統(tǒng)隨訪,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

對象與方法

1 對 象 被觀察的32例IIIB-IV期肺癌患者均經(jīng)胸部影像學(xué)、組織病理學(xué)等方法確診,并根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟(UICC)分期標準進行臨床分期。而且患者均為經(jīng)過 2～4周期化療顯示為進展,并且放棄繼續(xù)化療的患者。其中男18例,女14例。年齡分布為48～66歲,平均62.2歲。32例中接受CIK過繼免疫治療3個療程的患者為2例,2個療程為30例。治療方案經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會批準,患者均簽署知情同意書。

2 方 法 CIK細胞制備及回輸:用淋巴細胞分離液分離外周血 PBMC,然后在含有 CD3Mc Ab、IL-2、IFN-γ、IL-1α等的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)擴增,14～28d后,再將培養(yǎng)的CIK細胞取少許做流式細胞儀檢測,當(dāng)CD3+CD56+細胞數(shù)≥50%、CD3+CD8+≥30%,且細菌及真菌培養(yǎng)陰性時收集細胞,加入1%人血白蛋白生理鹽水中分次回輸。一個療程輸注的細胞總數(shù)為(5～15)×109。以后第 2年輸注 2個療程,第 3年輸注1個療程。

3 觀察指標及療效判定 觀察指標包括瘤體變化、生存期、臨床癥狀改善情況、生存質(zhì)量、體重及不良反應(yīng)等。腫瘤瘤體變化評價參照實體瘤標準,以患者治療前及治療后1月CT及B超進行對照比較,以完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、輕度緩解(M R)、穩(wěn)定(SD)、進展(PD)進行療效評定,緩解率為CR與PR、MR的總和。并觀察治療對心肝腎及消化道的影響。

結(jié) 果

1 臨床療效 32例患者經(jīng)CIK治療后 CR 4例,PR 6例,M R 15例,SD 5例,PD 2例。生存期的變化:經(jīng) CIK治療后隨訪,其存活率為:1年生存率為80.4%,2年生存率為70.5%,3年生存率為49.8%。52例患者大多數(shù)臨床癥狀治療后較治療前有明顯改善,其中以乏力、氣短、失眠癥狀改善為最明顯。兩組間率比較的顯著性檢驗采用χ2分析,差異顯著(P＜0.01),見表 1。生存質(zhì)量的改善:對 32例患者用Karnofsky評定及體重的改變來評估生存質(zhì)量的改善,結(jié)果見表2。

2 不良反應(yīng) 輸注 CIK細胞過程中僅有 2例病人出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng),體溫≤38.5℃,對癥處理后很快恢復(fù)正常,均未影響治療。未見消化道不良癥狀及肝腎功能異常。

表1 32例患者治療前后主要癥狀分析(n=32)

表2 治療后Karnofsky評分及體重變化表(n=32)

討 論

用于治療肺癌的免疫活性細胞主要有淋巴因子激活的殺傷(LAK)細胞、腫瘤浸潤的淋巴(TIL)細胞、CIK細胞等。CIK細胞,又稱為NK細胞樣 T淋巴細胞,同時表達 CD3和CD56兩種膜蛋白分子。研究表明,與既往臨床使用的過繼免疫療法(譬如 LAK細胞、TIL細胞和CD3AK細胞)相比,CIK細胞具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、對多重耐藥腫瘤細胞同樣敏感、對正常骨髓造血前體細胞細胞毒性小[5]、能抵抗腫瘤細胞引發(fā)的效應(yīng)細胞 Fas-FasL凋亡[6],由于該種細胞同時表達 CD3和CD56兩種膜蛋白分子,故又稱為NK細胞樣淋巴細胞。CIK細胞中的效應(yīng)細胞CD3+CD56+在正常人外周血中極為罕見,僅 1%～5%。在體外經(jīng)多種細胞因子培養(yǎng) 14～28d,CD3+CD56+細胞迅速增多,較培養(yǎng)前升幅可達 1000倍以上[7]。大量體外實驗證實 CIK細胞較以 NK細胞為主的LAK細胞具有更強大的殺瘤活性。腫瘤克隆抑制實驗顯示,CIK細胞的瘤細胞抑制 Log指數(shù)為2.5-3.5,較 LAK細胞的瘤細胞抑制指數(shù)高 2個Log[8]。

本研究采用 Schmidt-woif等所述方法[9]略加修改,制備出CIK細胞。其殺瘤機制為,當(dāng)CIK細胞受到敏感的靶細胞刺激時,CIK細胞通過其表面殺傷抑制受體系統(tǒng)或粘附因子對靶細胞的識別,這種細胞之間的直接接觸導(dǎo)致:① CIK細胞釋放具有細胞毒的胞漿顆粒物到膜外空間,其中CD3+CD56+細胞可產(chǎn)生最大的顆粒釋放量。這些胞漿顆粒對靶細胞具有直接殺傷力;② 分泌 IFN、TNF、IL-2、TGF-β和GM-CSF等細胞因子,這些細胞因子對靶細胞有直接或間接抑制或殺傷作用,進一步放大免疫殺瘤效應(yīng);③ CIK細胞在培養(yǎng)過程中表達 FasL,一方面增強了其對FasL+腫瘤細胞引發(fā)的Fas-Fas L凋亡的抵抗性,還可通過對 Fas+腫瘤細胞誘導(dǎo)凋亡行使其對腫瘤細胞的慢性殺傷作用,保證抗瘤活性的長期持久。CIK細胞殺瘤譜廣,為非 MHC限制性效應(yīng)細胞,對自體與異體、同種與異種腫瘤細胞均有殺傷作用。CIK細胞對化療藥物敏感的親本細胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細胞均具有強大的殺傷活性。實驗表明,CIK細胞的療效與CIK細胞的治療量和體內(nèi)殘留腫瘤細胞量存在一定相關(guān)性。我們臨床經(jīng)驗表明,回輸細胞總數(shù)應(yīng)＞5×109才具有治療作用。

從臨床觀察結(jié)果顯示,經(jīng) CIK細胞治療后瘤體有不同程度的縮小,總緩解率為78.12%;3年存活期為49.8%;臨床癥狀如乏力、失眠、氣短和食欲不振等均有明顯改善。從整體看,結(jié)果好轉(zhuǎn)明顯。所以我們認為,CIK細胞治療安全有效,無明顯毒副作用,是較為理想的免疫學(xué)肺癌治療方法。

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