杜仲葉提取物對(duì)女運(yùn)動(dòng)員骨組織保健的機(jī)理研究

喬媛媛 王曉晨 王曼瑩

(玉林師范學(xué)院 體育系，廣西 玉林 537000)

杜仲葉提取物對(duì)女運(yùn)動(dòng)員骨組織保健的機(jī)理研究

喬媛媛 王曉晨 王曼瑩

(玉林師范學(xué)院 體育系，廣西 玉林 537000)

探討杜仲提取物對(duì)女運(yùn)動(dòng)員骨組織保護(hù)的作用機(jī)制。方法：用未成年雌性大鼠，PMSG處理，48h后處死，取其卵巢，收集顆粒細(xì)胞，用MTT法測(cè)定顆粒細(xì)胞的增殖，用酶聯(lián)免疫法測(cè)定雌激素的含量，觀察了杜仲提取物對(duì)顆粒細(xì)胞增殖和分泌激素的影響。結(jié)果：杜仲提取物可增加顆粒細(xì)胞的增殖和雌二醇的生成量，呈劑量依賴性關(guān)系。結(jié)論：杜仲提取物對(duì)女運(yùn)動(dòng)員骨組織保護(hù)的機(jī)理與其促進(jìn)顆粒細(xì)胞雌二醇的生成有關(guān)。

杜仲提取物；顆粒細(xì)胞；雌二醇

1 引言

雌激素對(duì)女性生理特征與機(jī)體內(nèi)分泌系統(tǒng)的作用影響已廣為人知。絕經(jīng)前期的女運(yùn)動(dòng)員，若體內(nèi)雌激素水平降低可導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性閉經(jīng)與骨質(zhì)的過早丟失。絕經(jīng)期后的婦女，尤其是退役女運(yùn)動(dòng)員因體內(nèi)雌激素缺乏可導(dǎo)致骨內(nèi)礦物質(zhì)含量減少與骨基質(zhì)的等比例丟失，發(fā)生骨質(zhì)疏松病變，稱為絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥(PMOP)。臨床研究表明，雌激素缺乏是導(dǎo)致絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松的一個(gè)危險(xiǎn)因素。適宜運(yùn)動(dòng)可增加體內(nèi)雌激素的分泌，但劇烈運(yùn)動(dòng)，大強(qiáng)度訓(xùn)練可影響下丘腦-垂體-性腺軸，使體內(nèi)雌激素水平降低，對(duì)骨代謝產(chǎn)生負(fù)面影響。因此，如何正確理解雌激素與骨代謝的關(guān)系，科學(xué)地保護(hù)女運(yùn)動(dòng)員的骨組織健康，預(yù)防職業(yè)性骨質(zhì)疏松的發(fā)生已經(jīng)成為一個(gè)重要的醫(yī)學(xué)課題。

杜仲是一種具有補(bǔ)腎壯陽作用的名貴滋補(bǔ)藥材，杜仲提取物中的雌激素活性物質(zhì)可以激活性腺芳香化酶系統(tǒng)，使雌激素生成增加，這一藥食兩用的天然資源不僅可以防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松，而且可以用于競(jìng)技運(yùn)動(dòng)員特別是女性運(yùn)動(dòng)員的日常護(hù)理與調(diào)養(yǎng)。本實(shí)驗(yàn)采用離體細(xì)胞培養(yǎng)的方法，觀察了杜仲葉提取物對(duì)大鼠顆粒細(xì)胞增殖和分泌雌二醇的影響，并對(duì)其防治骨質(zhì)疏松的機(jī)理作了初步研究。

2 材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)材料

孕馬血清促性腺激素(PMSG)(寧波市三生藥業(yè)有限公司)；定量E2酶聯(lián)免疫診斷試劑盒(北京北方生物技術(shù)研究所)；DMEM培養(yǎng)基(GIBCO公司)；胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；杜仲葉提取物(本實(shí)驗(yàn)室自己提取)。SD大鼠由江西醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

2.2大鼠顆粒細(xì)胞懸液的制備及培養(yǎng)

選用21-25天齡的雌性SD大鼠，于早晨8點(diǎn)皮下注射PMSG100U/只，48h后斷頭處死動(dòng)物，取出雙側(cè)卵巢可見卵巢表面有多個(gè)囊狀卵泡，用不銹鋼針刺破卵泡，用PBS緩沖液反復(fù)沖洗，將含有顆粒細(xì)胞的PBS液離心10min(2000轉(zhuǎn)/min)，棄上清，向沉積在離心管底的疏松細(xì)胞團(tuán)中加入DMEM，充分混勻即得顆粒細(xì)胞懸液。

用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)顆粒細(xì)胞，用DMEM將其稀釋至2×105/ml，按4×104/孔接種到96孔培養(yǎng)板，每孔200μl細(xì)胞懸液，放入37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，吸去培養(yǎng)上清，加入不含胎牛血清的培養(yǎng)液及各種濃度的杜仲提取物，每組6孔，繼續(xù)培養(yǎng)兩天后進(jìn)行操作。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)所得樣品按E2酶聯(lián)免疫試劑盒要求程序進(jìn)行操作。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(M±SD)表示，以t檢驗(yàn)檢查其顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1杜仲葉提取物對(duì)離體大鼠顆粒細(xì)胞增殖的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，杜仲提取物直接給藥可促進(jìn)顆粒細(xì)胞的增殖，并呈一定的劑量依賴性，其中以10-5中藥組作用最為明顯(表1)。

表1 杜仲提取物對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞增殖的影響(M±SD)

注：*與對(duì)照組比 P<0.05

3.2杜仲葉提取物對(duì)離體大鼠顆粒細(xì)胞生成E2的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同濃度的杜仲葉提取物均可以刺激大鼠顆粒細(xì)胞E2的生成，以10-5杜仲提取物對(duì)大鼠顆粒細(xì)胞的E2生成作用最強(qiáng)(表2)。

表2 杜仲提取物對(duì)顆粒細(xì)胞產(chǎn)生E2的影響 (M±SD)

注：*與對(duì)照組比P<0.05

4 討論

研究表明，大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)可影響下丘腦-垂體-性腺軸功能，使雌激素水平下降，而雌激素缺乏時(shí)，促骨吸收因子增多，導(dǎo)致骨量快速丟失。因此，雌激素在女運(yùn)動(dòng)員的骨組織保護(hù)中占有重要地位。藥物直接作用于體外培養(yǎng)的卵巢顆粒細(xì)胞，受體內(nèi)其他因素的干擾少，作用直接，便于觀察。

4.1動(dòng)物的選擇

21-25日齡的SD雌性幼鼠下丘腦-垂體-卵巢軸功能尚未發(fā)育成熟，其顆粒細(xì)胞在離體前未受到內(nèi)源性促性腺激素的刺激，處于未分化狀態(tài)，受PMSG刺激后，未成熟卵巢可同時(shí)產(chǎn)生大量同步發(fā)育的顆粒細(xì)胞，故本實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物選擇可最大限度的排除卵巢外因素的干擾。

4.2杜仲提取物對(duì)顆粒細(xì)胞增殖的影響

顆粒細(xì)胞是卵巢的主要功能細(xì)胞，其增殖能力直接影響卵泡的發(fā)育，排卵及甾體激素的分泌等。本研究通過MTT法觀察杜仲提取物對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖的影響，結(jié)果表明，杜仲提取物直接給藥可促進(jìn)顆粒細(xì)胞的增殖，且作用與藥物劑量有明顯相關(guān)性。

4.3杜仲提取物顆粒細(xì)胞分泌激素的影響

卵泡顆粒細(xì)胞是構(gòu)成卵泡的重要體細(xì)胞，其分泌雌、孕激素的功能與卵泡的生長(zhǎng)、發(fā)育狀況密切相關(guān)。眾多體外研究表明，顆粒細(xì)胞在離體情況下可產(chǎn)生雌二醇。故本實(shí)驗(yàn)室觀察了在杜仲提取物的影響下，離體顆粒細(xì)胞分泌雌二醇的情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)杜仲提取物可增加顆粒細(xì)胞雌二醇的分泌量。

4.4杜仲提取物對(duì)女運(yùn)動(dòng)員骨組織保健的機(jī)理探討

劇烈運(yùn)動(dòng)、大強(qiáng)度訓(xùn)練可影響下丘腦-垂體-性腺軸，使體內(nèi)雌激素水平降低，對(duì)骨代謝產(chǎn)生負(fù)面影響。雌激素可以增加人成骨細(xì)胞OPGmRNA的表達(dá)。OPG通過與破骨細(xì)胞分化因子結(jié)合，間接抑制破骨細(xì)胞的生成和活化，從而發(fā)揮抗骨質(zhì)疏松的作用。本實(shí)驗(yàn)可以看出，杜仲提取物可以增加卵巢顆粒細(xì)胞雌激素的分泌。因此杜仲提取物保護(hù)女運(yùn)動(dòng)員骨組織健康的機(jī)理可能與其增加卵巢顆粒細(xì)胞雌激素的分泌有關(guān)。

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ResearchonMechanismofAbstractivePartsofDuzhongLeavesforBoneHealthofFemaleAthletes

Qiao Yuanyuan，Wang Xiaochen，Wang Manying

(P.E.Department，Yulin Normal University，Yulin，537000，Guangxi，China)

To examine the effect of Duzhong leaves on the estrogen production by cultured rat granulose cells in vito.Methods: Immature female SD rats were treated with PMSG for 48h and were sacrificed their ovaries were taken out and granular cells were collected,with Duzhong leaves.The production of estradiol was determined by ELISA.Results: Abstractive parts of Duzhong leaves increased estradiol production and also decreased the progesterone peoduction.Conclusion: we could conclude from the date that the abstractive parts of Duzhong leaves stimulated production of rat ovarian granular cells.

abstractive parts of Duzhong leaves;ovarian granular cells;estradio

2010-03-10；

2010-05-08

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30460160)。

喬媛媛(1980-)，女，山西太谷人，碩士，研究方向：運(yùn)動(dòng)生化與營(yíng)養(yǎng)。

G804.7

A

1672-1365(2010)04-0060-02