桂西地區幽門螺桿菌耐藥性影響因素分析＊

黃衍強,歐 平,黃贊松,周喜漢,李曉華,韋紅玉

(1.右江民族醫學院醫學微生物學與免疫學教研室,廣西百色533000;2.賀州學院,廣西542800;3.右江民族醫學院附屬醫院,廣西百色533000)

桂西地區幽門螺桿菌耐藥性影響因素分析＊

黃衍強1,歐 平2,黃贊松3△,周喜漢3,李曉華1,韋紅玉1

(1.右江民族醫學院醫學微生物學與免疫學教研室,廣西百色533000;2.賀州學院,廣西542800;3.右江民族醫學院附屬醫院,廣西百色533000)

目的 了解桂西地區幽門螺桿菌(Hp)對甲硝唑等抗菌藥物產生耐藥性的影響因素。方法 采集右江民族醫學院附屬醫院2006年1月至2008年12月確診為 Hp感染患者的胃竇部黏膜標本進行 Hp分離培養和鑒定,經鑒定后選擇374株 Hp菌株,采用紙片擴散法測定其對甲硝唑等抗菌藥物的敏感性;利用單因素分析χ2檢驗及精確概率法分析 Hp對抗菌藥物耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關系。結果 Hp對甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐藥率與患者性別、民族、疾病及年齡的關系差異無統計學意義(P>0.05)。結論 Hp對甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡無密切關系。

幽門螺桿菌;耐藥性;桂西

目前,幽門螺桿菌(helicobacter pylori,Hp)對抗菌藥物的耐藥性是影響 Hp感染根治效果的主要原因,尤其對甲硝唑、克拉霉素和阿莫西林的耐藥率逐年增加。因此,Hp耐藥菌株的研究已引起人們普遍關注[1]。為了解桂西地區 Hp對甲硝唑等抗菌藥物產生耐藥的因素,指導臨床用藥,克服耐藥菌株的產生,提高根治率,本研究于2006年1月至2008年12月選擇右江民族醫學院附屬醫院就診的胃潰瘍及胃炎患者,從其胃黏膜中分離培養 Hp,并進行了耐藥性觀察和耐藥影響因素分析,現將結果報道如下。

1 對象與方法

1.1 對象(1)菌株來源:選擇2006～2008年在右江民族醫學院附屬醫院就診并經病理診斷為胃潰瘍、胃炎患者共482例,利用胃鏡活檢鉗采集患者胃竇部黏膜,進行 Hp培養鑒定。(2)培養基與試劑:哥倫比亞血瓊脂培養基、腦心浸液培養基、螺桿菌添加劑(廣州迪景微生物科技有限公司產品);酪蛋白綿羊血(本實驗室自制);1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液、1%α-萘酚-乙醇溶液、3%過氧化氫溶液;Hp快速尿素酶試紙;甲硝唑(5μg/片)、阿莫西林(10μg/片)、克拉霉素(15μg/片)藥敏紙片(杭州天和微生物試劑有限公司產品);微需氧袋(含5%氧的小型厭氧產氣袋、厭氧塑料袋、厭氧塑料袋封口夾、厭氧指示劑,廣州迪景微生物科技有限公司產品);Hp J99標準菌株(中國 Hp保藏中心贈送)。

1.2 Hp培養 把采集的胃竇部黏膜先利用 Hp快速尿素酶實驗進行篩選,陽性者則收集保存于腦心浸液培養基中,把培養基置保溫瓶中冷凍送回實驗室。在無菌工作臺上把采集的胃黏膜和腦心浸液倒置在配制好的哥倫比亞血瓊脂培養基中,使用手術剪刀快速把黏膜組織剪碎,然后使用L棒在哥倫比亞血瓊脂培養基表面把黏膜碎粒涂布均勻,迅速放入厭氧塑料袋,剪開小型厭氧產氣袋,放入厭氧指示劑,最后使用厭氧塑料袋封口夾封閉厭氧塑料袋,放置孵箱35℃培養7 d[2]。

1.3 直接涂片染色檢查 對分離培養出來的菌落進行革蘭染色,染色方法按文獻[3],經過染色鏡檢發現革蘭陰性桿菌或革蘭陰性弧菌即初步判斷為 Hp。

1.4 生化鑒定 對初步判斷是 Hp的細菌進行氧化酶試驗、觸酶試驗、快速尿素酶試驗[4],3個試驗結果均為陽性者即鑒定該細菌為 Hp[5]。

1.5 藥物敏感試驗 采用紙片擴散法(K-B法)觀察 Hp對甲硝唑、阿莫西林、克拉霉素的耐藥性。稱取哥倫比亞血瓊脂培養基38 g,加入1 000 mL蒸餾水,制備血瓊脂平板,按每個平皿(直徑9 mm)25 mL進行分裝。將孵育4 d的 Hp接種于生理鹽水試管中,校正濃度至0.5麥氏濁度(相當于1.0×107CFU/mL)。用無菌棉簽蘸取菌液,在試管內壁旋轉擠去多余菌液后,在哥倫比亞血瓊脂表面均勻涂布接種3次,每次旋轉平板60°,最后沿平板內緣涂抹1周。平板在室溫下干燥3～5min后,用無菌鑷子將藥敏紙片緊貼于瓊脂表面,放入微需氧袋,置35℃孵育3～4 d,測量抑菌環大小,記錄抑菌圈直徑。抑菌環直徑大于10 mm判定為敏感,直徑為0時判定為耐藥;使用 Hp J99標準菌株作為對照。

1.6 統計學方法 應用SPSS12.0統計軟件進行統計學數據分析,使用χ2檢驗及精確概率法。

2 結 果

2.1 Hp對甲硝唑的耐藥與患者年齡、性別、民族及疾病的關系 共分離培養 Hp 374株,其中對甲硝唑耐藥300株,耐藥菌株與患者年齡、性別、民族及疾病的關系相比較,差異無統計學意義(P>0.05),見表1。

表1 Hp對甲硝唑的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關系[n(%)]

2.2 Hp對克拉霉素的耐藥與患者年齡、性別、民族及疾病的關系 在分離培養的374株 Hp中,對克拉霉素耐藥95株,耐藥菌株與患者年齡、性別、民族及疾病的關系相比較,差異無統計學意義(P>0.05),見表2。

2.3 Hp對阿莫西林的耐藥與患者年齡、性別、民族及疾病的關系 在分離培養的374株 Hp中,對阿莫西林耐藥49株,耐藥菌株與患者年齡、性別、民族及疾病的關系相比較,差異無統計學意義(P>0.05),見表3。

2.4 Hp耐藥株不同地區分布 分布在百色市、田陽縣、田林縣、凌云縣者分別有 117、89、86、82 株,見表4。

表2 Hp對克拉霉素的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關系[n(%)]

表3 Hp對阿莫西林的耐藥與患者性別、民族、疾病及年齡的關系[n(%)]

表4 桂西地區4縣 Hp耐藥情況[n(%)]

3 討 論

Hp的感染率在不同國家或地區不盡相同[6～7],耐藥率也是一樣,發達國家的耐藥率比發展中國家低[8-9]。耐藥率差異可能與地理分布、民族、經濟水平、用藥習慣、時間跨度和所采用的藥敏實驗方法有一定的關系[10-11]。桂西地區處于滇、黔、桂3省交界處,屬于邊遠山區,經濟發展比較落后;該地區有壯、漢、謠、苗等民族分布,主要以壯、漢族為主。近幾年,由于國家藥品采購制度以及抗菌藥物使用制度逐漸完善,醫師的用藥習慣也逐步規范,濫用抗菌藥物的現象明顯減少,迅速增長的抗菌藥物耐藥率得到了有效控制[12],但是,由于原發性和繼發性耐藥的發生,耐藥率還是逐年上升。誘導原發性和繼發性耐藥發生的原因是什么,是否真的與地理分布、民族、經濟水平、用藥習慣等因素有關?本研究使用了單因素χ2分析 Hp耐藥與性別、民族、疾病及年齡的關系,尋找產生耐藥性的影響因子,研究結果顯示差異無統計學意義。由此可見,桂西地區人群的性別、民族、疾病及年齡并不是 Hp耐藥產生的主要影響因素。

本研究結果還顯示了桂西地區 Hp耐藥菌株的區域分布情況,4縣市各抗菌藥物耐藥率比較沒有超過1%。原因可能是該地區地理位置、經濟情況、衛生條件等因素的影響,各醫院醫師的治療方法以及用藥習慣比較一致,致使原發性耐藥和繼發性耐藥的發生差異無統計學意義。

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Study on the affecting factors of helicobacter pylori to the drug resistance in west-Guangxi＊

HUANG Yan-qiang1,OU Ping2,HUANG Zan-song3△,et al.
(1.Department of Microbiology and Immunology of Youjiang Medical College for Nationalities,Baise,Guangxi533000,China;2.Hezhou College,Guangxi542800,China;3.Affiliated Hospital of Youjiang Medical College for Nationalities.Baise,Guangxi533000,China)

Objective To study on the affecting factors of resistance of Helicobacter pylori(Hp)to metronidazole,amoxicillin,clarithromycin in west-Guangxi.Methods Gastric mucosa biopsy specimens were taken from the patients in west-Guangxi during 2006-2008.Three hundred seventy-four strains were diagnosed.These strains resistant to metronidazole,amoxicillin and clarithromycin were determined by using K-B diffusion test.The affectting factors of resistance were determined by analyzed the sex,nationality,types of diseases,age of patient.Results The data showed that the resistance rates were no statistical significant difference in the sex,nationality,types of diseases,age of patient(P>0.05).Conclusion The data show that the resistance rates are not a close relationship with the sex,nationality,types of diseases,age of patient.

helicobacter pylori;drug resistance;west-Guangxi

10.3969/j.issn.1671-8348.2010.19.005

R378;R969.3

A

1671-8348(2010)19-2555-03

廣西自然科學基金資助項目(0499002);廣西教育廳基金資助項目(2004)。△

,電話:(0776)2846532;E-mail:huangzansong@hotmail.com。

2010-04-22

2010-06-08)