HPLC法測定復方四嗪利血平片中氫氯噻嗪的含量

陳玉璞

（焦作市食品藥品檢驗所，河南焦作 454000）

復方四嗪利血平片為常用降壓藥品，主要成分為利血平和氫氯噻嗪，其中氫氯噻嗪有利尿、降壓等作用。復方四嗪利血平片現行國家藥品標準中氫氯噻嗪只做定性鑒別，無含量測定。 本實驗建立用高效液相色譜法測定其中氫氯噻嗪的含量，作為復方四嗪利血平片質量控制指標之一，為控制藥品質量，提供了一種簡單、靈敏、快速準確的檢測方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

UVIKONXL型紫外分光光度計（法國）；AE-240雙量程電子天平（瑞士梅特勒公司）；島津高效液相色譜儀（LC-10ADVP泵；SPD-10AVP紫外檢測器；CS-Light Potrun Analysis數據處理系統）。

1.2 試藥

氫氯噻嗪對照品(批號：10309-0001，中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，含量為99.40%）；復方四嗪利血平片（批號：080317，鄭州邦泰藥業有限公司；批號：080102，新鄉中杰藥業有限公司；批號：20090602，鄭州海締邦林制藥有限公司）；水為純凈水，甲醇為一級色譜純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil-C18（6.0 mm×150 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-磷酸鹽緩沖液（30∶66∶4）（0.05 mol/L 磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調節pH至3.0）；檢測波長：272 nm；流速：1.0 ml/min。柱溫：30℃；進樣量：20 μl；理論塔板數按氫氯噻嗪計不低于3000。

2.2 檢測波長的選擇

取對照品溶液，在180～300 nm的波長范圍內進行掃描。結果在272 nm的波長處有最大吸收，故選用272 nm為氫氯噻嗪的檢測波長。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取氫氯噻嗪對照品22.4 mg，置100 ml量瓶中，用流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻。即得。

2.4 供試品溶液的制備

取本品20片，除去包衣后，精密稱取細粉適量（約相當于氫氯噻嗪20 mg），置100 ml量瓶中，用流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液5.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.5 陰性對照試驗

按復方四嗪利血平片的處方工藝，不加氫氯噻嗪，制成陰性對照品，同供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。在選定的色譜條件下，準確進樣20 μl，從色譜圖上看出，在該色譜條件下，在保留時間（tR）4.1 min處，供試品和對照品溶液中出現色譜峰，而陰性對照溶液未見此色譜峰，表明在本實驗條件下，氫氯噻嗪的測定不受其他雜質峰干擾。見圖1。

2.6 線性關系的考察

分別精密量取“2.3”項下氫氯噻嗪對照品溶液1.0、2.5、5.0、7.5、10.0 ml，分別置于 50 ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取20 μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定色譜峰峰面積，以對照品進樣量（μg）為橫坐標，峰面積為縱坐標，計算回歸方程，結果表明氫氯噻嗪進樣量在0.0896～0.0896 μg范圍內，呈良好的線性關系?；貧w方程為 Y=44102.9X+1637.05（r=0.9999）。

2.7 精密度試驗

取濃度為22.40 μg/ml的氫氯噻嗪對照品溶液，重復進樣5次，分別測定峰面積，結果顯示，氫氯噻嗪RSD=0.76%，表明該法精密度良好。

2.8 穩定性試驗

取“2.3”項下的氫氯噻嗪對照品溶液每間隔1 h進樣1次，共8次，結果氫氯噻嗪RSD=0.67%。結果表明樣品在8 h內基本穩定。

2.9 重復性試驗

取樣品（批號：080317，鄭州邦泰藥業有限公司）適量，依法平行測定6次，結果氫氯噻嗪RSD=0.93%。結果表明該法重現性良好。

2.10 加樣回收率試驗

取樣品（批號：080317，鄭州邦泰藥業有限公司）約0.11 g，共6份，精密稱定，分置100ml量瓶中，分別加入“2.3”項下對照品溶液5.0 ml，用流動相超聲溶解，并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm的微孔濾膜濾過，取續濾液，按色譜條件測定，結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 樣品含量測定

取樣品3批，各20片，除去包衣后，精密稱取細粉適量（約相當于氫氯噻嗪20 mg），置100 ml量瓶中，用流動相超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續濾液5.0 ml，置100 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；另取氫氯噻嗪對照品適量，用流動相制成每毫升中含氫氯噻嗪11.20 μg的溶液。分別精密吸取20 μl注入液相色譜儀，按上述色譜條件，以峰面積計算，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 討論

筆者查閱了許多文獻，發現許多流動相中含有乙腈。筆者認為，乙腈價格較貴且有毒，故棄用。部分流動相用磷酸鹽緩沖液（1 mol/L磷酸二氫鉀溶液，用磷酸調節pH至3.0）-甲醇-水，筆者進行了實驗，發現1 mol/L磷酸二氫鉀溶液與甲醇混合后有大量渾濁產生。通過反復實驗，選用0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液，能達到滿意效果。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].二部.北京:化學工業出版社,2005:附錄ⅤD:28-30.

[2]周岐勛,李健和,徐幸民.高效液相色譜法測定鹽酸甲氯芬酯分散片含量及有關物質[J].中國當代醫藥,2009,16(4):73-76.

[3]國家藥典委員會.國家藥品標準—化學藥品地方標準上升國家標準第四冊[S].北京:中國醫藥科技出版社,2002:195-199.

[4]國家藥典委員會.國家藥品標準—化學藥品地方標準上升國家標準第十一冊[S].北京:中國科技出版社,2002:235-238.

[5]王宜祥,楊漢中,吳韶銘.復方卡托普利中卡托普利和氫氯噻嗪的HPLC測定[J].中國醫藥工業雜志,2003,34(8):404-405.

[6]趙素珍,宋衛云.高效液相色譜法測定清熱止瀉合劑中葛根素的含量[J].中國醫藥導報,2007,4(30):87-88.