禽蛋中泰樂菌素殘留量的微生物學檢測方法

瑪爾江·木坎 庫麗扎達·木拉提

試樣經加水均質、離心后取上清液，進行杯碟法測定。利用被測樣液中的泰樂菌素殘留量與藤黃微球菌的作用產生抑菌圈，根據產生抑菌圈的大小用標準曲線法進行定量測定。

1 試劑和材料

1.1 緩沖液（pH值8.0±0.1）

稱取13.3 g無水磷酸二氫鉀加入900 ml水溶解，再加入100 ml 6.2%氫氧化鉀溶液，混勻，于121℃高壓滅菌15 min。

1.2 生理鹽水

稱取8.5 g氯化鈉，溶于1 000 ml水中，于121℃高壓滅菌15 min。

1.3 泰樂菌素標準品

1 006 μg/mg，由中國獸醫藥品監察所提供。

1.4 泰樂菌素標準儲備液

稱取適量的泰樂菌素標準品，先用少量甲醇溶解，再加水至 1 000 ml,使其濃度達 1 000 μg/ml，置 4 ℃冰箱保存，可使用8 d。

1.5 泰樂菌素標準工作液

吸取一定量泰樂菌素標準儲備液，分別用緩沖液稀釋成濃度為 0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 μg/ml的標準工作液。需當天配制和使用。

1.6 培養基

1.6.1 培養基Ⅰ（pH值6.1±0.1）

蛋白胨10.0 g，牛肉浸膏5.0 g，氯化鈉2.5 g，瓊脂15.0 g，加蒸餾水至1 000 ml，分裝于試管或克氏瓶中，于121℃高壓滅菌15 min；滅菌后可制成斜面。

1.6.2 培養基Ⅱ（pH值7.0±0.1）

蛋白胨 10.0 g，牛肉浸膏 5.0 g，氯化鈉 2.5 g，加蒸餾水至1 000 ml，分裝于試管中，于121℃高壓滅菌15 min。

1.6.3 培養基Ⅲ（pH值8.5±0.05）

蛋白胨6.0 g，牛肉浸膏1.5 g，酵母浸膏3.0 g，葡萄糖1.0 g，胰水解酪蛋白4.0 g，瓊脂15.0 g，加蒸餾水至1 000 ml，分裝于錐形瓶中，于121℃高壓滅菌15 min。

1.7 試驗菌種

藤黃微球菌CMCC（28001）由中國生物藥品檢定所提供。

2 儀器和設備

牛津杯：不銹鋼小管，外徑（8.0±0.1）mm，內徑（6.0±0.1）mm，高（10±0.1）mm。培養皿：直徑約 90 mm，底部平整光滑的玻璃皿或塑料皿，具陶瓦蓋。ZY-300Ⅳ多功能微生物自動測量分析儀。均質器：不低于10 000 r/min。離心機：不低于8 000 r/min。培養相：（36±1）℃，擱板應保持水平。高壓滅菌器，恒溫水浴鍋：（恒溫±1℃）。

3 方法

3.1 樣液制備

將試樣均質1 min（5 000 r/min）后，再稱取20 g于離心管內，加入5 ml水，充分攪勻，放置60 min后，離心20 min（8 000 r/min），取上清液作為樣液。……