高效液相色譜法同時測定枳實導滯丸中柚皮苷與橙皮苷含量

劉 源，沈好文

(江蘇省鎮江藥品檢驗所，江蘇 鎮江 212003)

枳實導滯丸[1]收載于2005年版《中國藥典(一部)》，由黃芩[2-3]、大黃、白術、茯苓、澤瀉、枳實(炒)[4]、黃連(姜汁炙)、六神曲(炒)等組方，具消積導滯、清利濕熱之功效，用于飲食積滯、大便秘結等癥。本試驗在藥典規定的基礎同時測定枳實導滯丸的柚皮苷、橙皮苷[5-6]兩種有效成分的含量，這有利于更好地評價和監控產品質量。

1 儀器與試藥

2695型液相色譜儀，Empower色譜工作站(美國沃特斯公司);AG-245型電子分析天平(瑞士梅特勒公司)。柚皮苷對照品(批號為110722-200610)、橙皮苷對照品(批號為110721-200512)均由中國藥品生物制品檢定所提供;乙腈、甲醇(色譜級)，其他試劑(AR 級);枳實導滯丸(批號分別為 081110，090618，091006，湖北香連藥業有限公司)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱:用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:水 -乙腈，梯度洗脫(表 1);檢測波長:230 nm，流速:1.0 mL/min;柱溫:37 ℃ ;進樣量:10 μL。理論板數按柚皮苷計算應不低于 3 000。色譜圖見圖1。

表1 梯度洗脫條件

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

精密稱取柚皮苷、橙皮苷對照品適量，分別加甲醇制成質量濃度為2.62 μg/mL和0.32 μg/mL的對照品溶液。取樣品裝量差異項下供試品，研細，取約1.5 g，精密加甲醇100 mL使溶解，加熱回流1 h，稱重，用甲醇補足減失的質量，濾過，精取續濾液1 mL，加甲醇至100 mL，即得供試品溶液。取枳實導滯丸的陰性樣品，制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

線性關系考察:精密稱取柚皮苷對照品10.47 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，分別精密量取1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 μL進樣，以峰面積對對照品質量濃度(μg/mL)進行線性回歸，得柚皮苷回歸方程 Y=2.4×106C+76 787，r=0.999 7。柚皮苷質量濃度在1.047～10.47 μg/mL范圍內與峰面積有良好的線性關系。精密稱取橙皮苷對照品12.75 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，加甲醇至10 mL，再分別精密量取 1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，置 100 mL 量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取10 μL進樣，以峰面積對對照品質量濃度(μg/mL)進行線性回歸，得橙皮苷回歸方程為Y=2.4×106X+76 787，r2=0.999 6。橙皮苷質量濃度在 0.127 5～1.275 μg/mL范圍內與峰面積有良好的線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續進樣5次。結果得柚皮苷與橙皮苷峰面積的 RSD分別為1.1%和1.5%(n=5)。表明進樣精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8 h時進樣測定。結果柚皮苷和橙皮苷含量的 RSD分別為1.0%和1.2%(n=5)，表明溶液穩定性良好。

重復性試驗:取同一批號樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定含量。結果柚皮苷平均含量為18.07 mg/g，RSD為1.9%(n=6);橙皮苷平均含量為 3.35 mg/g，RSD為1.7%(n=6)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:分別稱取已知含量的樣品適量，精密加入對照品適量，按供試品溶液的制備方法制備溶液，測定含量并計算回收率。結果見表2。

表2 柚皮苷與橙皮苷加樣回收試驗結果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取2.2項下供試品溶液和對照品溶液，各進樣10 μL，測定峰面積，按外標法計算。結果3批樣品的柚皮苷含量分別為18.12，17.93，18.51 mg/g，平均含量為18.19 mg/g;橙皮苷的含量分別為3.18，3.63，3.49 mg/g。

3 討論

曾分別使用超聲和直接加熱回流兩種方法處理樣品，結果后者較前者效果好，樣品雜質干擾少，分離效果好，故采用直接加熱回流的方法處理樣品。以甲醇-水作為流動相時，成分的分離及測定結果均不理想;改為水-乙腈后，測定結果符合預期。在后來的試驗中，通過進一步摸索，又采用梯度洗脫方法，得到了滿意的結果，故決定采用水-乙腈梯度洗脫的方法。本測定方法簡便、準確、重現性好，可有效控制產品質量。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:515.

[2]石 焱，吳 瓊.高效液相色譜法測定枳實導滯丸中黃芩苷含量[J].解放軍藥學學報，2006，22(6):474-475.

[3]羅興平，聶凌云，陳立仁，等.HPLC測定肝泰康膠囊中黃芩苷的含量[J].解放軍藥學學報，2004，20(2):148.

[4]歐陽榮，周新蓓，皮曉華.枳實生品及不同炮制品中橙皮苷含量比較[J].中國藥房，2004，15(1):57.

[5]史萬忠，徐德生，劉 力，等.HPLC法測定中藥復方OPG片中橙皮苷的含量[J].中國試驗方劑學雜志，2003，9(1):4.

[6]譚生建，劉 剛.高效液相色譜法測定枳實導滯丸中橙皮苷和黃芩苷的含量[J].解放軍藥學學報，2006，22(5):387.