超微粉碎對羚玳息風丸溶出特性的影響＊

孫文格，趙午申

(1.河北省石家莊市中醫院，河北 石家莊 050051; 2.河北省邢臺市中醫院，河北 邢臺 054001)

羚玳息風丸是根據我國名中醫邢月朋主任中醫師的經驗方制成的純中藥制劑，具有滋陰潛陽、涼肝息風等功效，用于陰虛肝熱所致的頭痛眩暈、偏頭痛、煩躁失眠、目赤、急躁易怒。將超微粉碎技術應用到該制劑工藝中，所制產品的臨床療效較好[1]。本研究旨在利用薄層色譜半定量法和高效液相色譜法對羚玳息風丸(超微細粉和傳統蜜丸兩種蜜丸)的黃芩苷和延胡索乙素進行定性、定量測定，探討超微粉碎技術對其溶出特性的影響。

1 儀器與試藥

島津2010型高效液相色譜儀;AUW-220D型電子分析天平;5210DT型超聲處理器(功率250 W，頻率33 kHz);WKZ-10型超微粉碎機(山東青州精誠機械制造公司);BT-1500型離心沉降式粒度分布儀。延胡索乙素對照品(批號為110726-200809)，黃芩苷對照品(批號為110715-200815)，均由中國藥品生物制品檢定所提供;羚玳息風丸(超微細粉，批號 20081026，20081105，20081207)，羚玳息風丸(傳統蜜丸，批號為 20080326，20080606，20080810)，均由石家莊市中醫院生產;甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 樣品制備

超微細粉丸:按處方比例稱取羚羊角絲、玳瑁、天麻等藥材適量，先粗粉碎，過3號篩，再放入超微粉碎機，粉碎1 h。經測試，粒度在10 μm以下者大于95%。每100 g超微細粉加煉蜜70 g，制成小蜜丸。

傳統蜜丸:按處方比例稱取羚羊角絲、玳瑁、天麻等藥材適量，粉碎成細粉。每100 g細粉加煉蜜70 g，制成小蜜丸。

2.2 定性測定(薄層色譜半定量法)

極性目標成分黃芩苷:分別取超微細粉丸和傳統蜜丸各5 g，加硅藻土5 g，研勻，加甲醇25 mL，超聲處理5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，制得供試品溶液A和B;另取超微細粉丸和傳統蜜丸各5 g，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液同上處理，作為供試品溶液C和D;再取黃芩苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗，吸取上述5種溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液。結果供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應的位置上，供試品溶液A，C，D的斑點大小相等、顏色相同，而供試品溶液B則幾乎無斑點(圖1)。

脂溶性目標成分延胡索乙素:分別取超微細粉丸和傳統蜜丸各 5 g，加硅藻土 5 g，研勻，加甲醇 25 mL，超聲處理 5 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，加濃氨試液調至堿性，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，制得供試品溶液A和B;另取超微細粉丸和傳統蜜丸各5 g，加硅藻土 5 g，研勻，加甲醇 25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液同前處理，作為供試品溶液C和D;再取延胡索乙素對照品，加無水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的對照品溶液。照薄層色譜法[2]試驗，吸取上述5種溶液各5 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰。結果供試品溶液A，C，D色譜中，在與對照品溶液色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，其中供試品溶液A和C與對照品溶液色譜的斑點大小相等，供試品溶液D的斑點略小于C，供試品溶液B則幾乎無斑點;在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365 nm)下檢視，熒光斑點差異同前(圖2)。

圖1 黃芩苷薄層鑒別色譜圖

2.3 延胡索乙素含量測定

2.3.1 色譜條件與系統適用性試驗[2]

色譜柱:DiscoveryC18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:0.1%磷酸(三乙胺調pH至6.0)-甲醇(45∶55);流速:1.0 mL/min;檢測波長:280 nm;柱溫:30℃;進樣量:10 μL。在此色譜條件下，左旋延胡索乙素與相鄰的色譜峰分離完全，以延胡索乙素峰計理論板數為5 000，陰性對照品溶液對測定無干擾(圖3)。

圖2 延胡索乙素薄層鑒別色譜圖

圖3 延胡索乙素含量測定高效液相色譜圖

2.3.2 溶液制備

精密稱取延胡索乙素對照品50.32 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲使完全溶解后，稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液10 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取超微細粉丸和傳統蜜丸各約1 g，精密稱定，各加硅藻土1 g，研勻，置具塞錐形瓶中，精密加入濃氨試液-甲醇(1∶20)的混合溶液50 mL，密塞，精密稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用濃氨試液-甲醇(1∶20)的混合溶液補足質量，濾過，取續濾液25 mL，蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉移至5 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液作為供試品溶液。取不含延胡索的陰性樣品，同法制備陰性對照品溶液。

2.3.3 方法學考察

線性關系考察:精密量取對照品貯備液 1，2，3，4，5 mL，分別置50 mL量瓶中加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按擬訂的色譜條件分別進樣，記錄延胡索乙素峰面積值。以峰面積積分值(Y)對對照品質量濃度(X)進行線性回歸，得回歸方程 Y=4.23 X-6.30，r=0.999 1(n=5)。結果表明，延胡索乙素對照品質量濃度在 2.062～202.10 μg/mL范圍內與峰面積值呈良好的線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，重復進樣5次。結果峰面積的 RSD=0.73%(n=5)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:分別取超微細粉丸(批號為20081026)和傳統蜜丸(批號為20080326)，按2.4.2項下方法制備供試品溶液，分別于0，1，2，3，4，5，6 h 時進樣測定。結果超微細粉丸的 RSD=0.88%(n=7)，傳統蜜丸的 RSD=0.98%(n=7)，表明供試品溶液在6 h內峰面積基本穩定。

重復性試驗:分別取超微細粉丸(批號為20081026)和傳統蜜丸(批號為20080326)各6份，按2.4.2項下方法制備供試品溶液，進樣測定含量。結果超微細粉丸和傳統蜜丸含量的 RSD=0.85%和 RSD=0.73%(n=6)，表明方法的重復性良好。

加樣回收試驗:分別取已知含量的超微細粉丸(批號為20081026)和傳統蜜丸(批號為20080326)各5份，每份加入對照品0.5 mL，按2.4.2項下方法制備待測溶液，進樣10 μL，分別測定。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果(n=6)

2.3.4 樣品含量測定

對超微細粉丸和傳統蜜丸各取3批樣品，按2.4.2項下方法制備供試品溶液，分別進樣測定，按外標法以峰面積計算含量。結果批號為20081026，20081105，20081207的超微細粉丸中延索乙素的含量分別為 53.01，53.69，53.57 μg/g，平均 53.59 μg/g;批號為20080326，20080606，20080810的傳統蜜丸中延胡索乙素的含量分別為 37.26，37.19，37.17 μg/g，平均 37.21 μg/g。

3 討論

薄層色譜半定量法定性和高效液相色譜法定量結果表明，超微細粉丸指標成分溶出量大于傳統蜜丸，延胡索乙素含量多于傳統蜜丸(P＜0.05)，故超微細粉丸的溶出特性優于傳統蜜丸。這說明超微粉碎有利于提高羚玳息風丸的溶出速率和溶出量。當然，羚玳息風丸中尚含有其他多種成分，超微粉碎對這些成分有何影響，有待進一步研究。

藥材經超微粉碎后，細胞破壁率提高，大大增加了比表面積，使藥材中化學成分的溶出效率提高。丸劑是中藥傳統劑型之一，也是中成藥中所占比例最大的劑型，在2010年版《中國藥典(一部)》中收載的丸劑總數為320個，占制劑總數的30%。在丸劑的制備工藝中，粉碎工序非常關鍵。采用普通粉碎得到的藥材細粉粒徑分布寬，均一性差;而超微粉碎后粒徑分布變窄，均一性顯著提高。超微粉碎技術不僅有利于有效成分的溶出，又保證了丸劑本身的質量，值得研究。

[1]孫文格，李 紅，鄭 倩.羚玳息風丸應用超微粉碎技術的臨床研究[J].時珍國醫國藥，2009，20(3):609-610.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄Ⅵ B，130.