高效液相色譜法測定回春如意膠囊中蘆丁含量

黃余龍，何瑞榮，陳 奕，黃妙嬋

(廣東省東莞市人民醫(yī)院，廣東 東莞 523018)

回春如意膠囊由鹿茸、熟地黃、狗腎、鎖陽、羊腎、菟絲子、山藥、何首烏、槐米等組方，臨床上用于治療虛乏力、腎虛耳鳴、腰膝酸痛等癥。為控制產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測定了制劑中蘆丁的含量，報道如下。

1 儀器與試藥

Dionex P680型高效液相色譜儀，ASL-100型全自動進(jìn)樣器，DAD紫外檢測器;HN1006型超聲儀;Sartorius BP211 D型電子天平。蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100080-200306);回春如意膠囊(澳門泳江制藥廠，批號為070701，20070101，20070102，20070103);甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為雙蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]

色譜柱:Supelco C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-1%冰醋酸(32∶68);流速:1.0 mL/min;檢測波長:257 nm;進(jìn)樣量:10 μL。理論板數(shù)按蘆丁峰計算應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品適量，用甲醇制成質(zhì)量濃度為0.1 g/L的對照品溶液。取裝量差異項下的供試品粉未0.5 g，精密稱定，精密加入甲醇20 mL，稱定質(zhì)量，置超聲儀(功率500 W，頻率50 kHz)中超聲處理30 min，冷卻至室溫，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，即得供試品溶液。以相同的處方比例，按樣品工藝制備不含槐米藥材的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各10 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，陰性樣品對測定無干擾(圖1)。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密稱取蘆丁對照品適量，加甲醇制成0.104 8 g/L 的溶液。分別精密吸取 2，4，6，8，10 μL，注入色譜儀，記錄峰面積，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、色譜峰峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=26.522X-0.65，r=0.999 9(n=5)。結(jié)果表明，蘆丁質(zhì)量濃度在0.209 6～1.048 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

加樣回收試驗:取同一批(批號為070701)供試品6份，各約0.5 g，精密稱定，分別加入蘆丁對照品溶液適量，按供試品溶液的制備方法制備溶液，進(jìn)樣測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

重復(fù)性試驗:精密稱取批號為070701的供試品1份，依法制備供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測定。結(jié)果的 RSD為1.70%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

表1 蘆丁加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

穩(wěn)定性試驗:取批號為070701的供試品，依法制備成供試品溶液，分別于 0，1，3，5，8 h時進(jìn)樣測定。結(jié)果的 RSD為 1.77%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 樣品含量測定

取不同批號的供試品，依法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定含量。結(jié)果批號為20070101，20070102，20070103的供試品中蘆丁含量分別為 0.099 6，0.102 8，0.100 5 mg/粒。

3 討論

曾比較了75%甲醇、水、甲醇加熱回流提取或超聲提取的效果，結(jié)果甲醇超聲提取30 min的效果最好，雜質(zhì)較少且提取較完全。流動相為甲醇-磷酸(42∶58)時，分離效果不太好，改為甲醇-1%冰醋酸(32∶68)后，峰形、分離度、保留時間均較好，故本試驗以甲醇-1%冰醋酸為流動相。取批號為070701的供試品試驗，考察流動相甲醇-1%冰醋酸的體積比分別為32∶68和35∶65，色譜柱分別為Supelco C18柱和Thermo C18柱，柱溫為25℃和30℃時的RSD值。結(jié)果 RSD值分別為0.25%，0.1%及0.94%，表明結(jié)果均不受影響。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:276.