紫外分光光度法測定腫節風不同部位總黃酮的含量

勵 娜，楊榮平，王賓豪，張小梅

(重慶市中藥研究院，重慶 400065)

腫節風 Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai又名九節茶、草珊瑚、接骨木等，是金粟蘭科草珊瑚屬植物，在民間廣泛用于接骨祛風、消炎解毒，現代醫學研究證明其具有抗菌消炎、抗癌和增強免疫功能等功效，已制成針劑、片劑、膜劑、含漱劑、口服液等多種劑型。主要用于各種常見炎癥性疾病的治療和癌癥的輔助性治療。腫節風中所含黃酮類化合物是其主要有效成分[1]。筆者根據黃酮類化合物特性，以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法對腫節風的葉、莖、根中總黃酮進行了含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

UV-1601型紫外可見分光光度計、AEG-45SM型電子天平(十萬分之一，日本島津);BP121-S型電子天平(萬分之一，德國Sartorius公司);HH-2型恒溫水浴箱、KQ-250型超聲波清洗器(鞏義市英峪予華儀器廠)。腫節風(重慶紅池藥業有限公司提供，本院生藥鑒定室秦松云副研究員鑒定);蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為100080-200306);所有試劑均為分析純(重慶川東化工＜集團＞有限公司化學試劑廠)。

2 方法與結果

2.1 溶液制備

精密稱取蘆丁對照品7.03 mg，置10 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，置水浴上微熱使溶解，放冷，加乙醇至刻度，搖勻，即得質量濃度為0.703 g/L的對照品溶液。取腫節風藥材各部位粉末(40目)約5 g，精密稱定，置燒瓶中，加85%乙醇100 mL，冷浸30 min后，在水浴上加熱回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，濃縮至50 mL，作為供試品溶液。

2.2 測定波長選擇[2]

取對照品溶液和供試品溶液0.5 mL，分別置25 mL量瓶中，加5%NaNO21 mL，混勻，放置 6 min，加 10%Al(NO3)31 mL，搖勻，放置 6 min，加 NaOH試液 10 mL，加 85%乙醇至刻度，搖勻放置15 min后，在400～800 nm波長范圍內掃描。結果二者在500 nm波長處有最大吸收，故選擇500 nm為測定波長。

2.3 方法學考察

標準曲線繪制:精密量取對照品溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分別置25 mL量瓶中，加5%NaNO21 mL，混勻，放置6 min，加10%Al(NO3)31 mL，搖勻，放置 6 min，加 NaOH 試液 10 mL，加 85%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min后，于500 nm波長處測定吸光度。以蘆丁質量濃度為橫坐標(X)、吸光度值為縱坐標(Y)進行線性回歸，得回歸方程 Y=0.496 2 X-0.026，r=0.999 9(n=5)。結果表明，蘆丁質量濃度在0.351 5～3.163 5 g/L范圍內與吸光度呈良好的線性關系。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液(0.703 g/L)1 mL，置25 mL量瓶中，依法操作，經放置顯色后，于500 nm波長處測定吸光度。結果的 RSD為0.140%(n=6)，表明儀器精密度較好。

穩定性試驗:取腫節風藥材全草樣品5 g，依法制備供試品溶液，經放置顯色后，在不同時間測定其吸光度。結果樣品總黃酮含量平均值為25.93 mg/g，RSD為1.55%(n=6)，表明供試品溶液在顯色后60 min內基本穩定。

重現性試驗:取腫節風藥材全草樣品，依法平行制備供試品溶液6份，經放置顯色后，于500nm波長處測定吸光度。結果總黃酮的含量平均值為25.95mg/g，RSD為0.75%(n=6)，表明方法重現性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的腫節風藥材9份，精密稱定。按樣品中總黃酮含量的80%，100%，120%精密加入對照品，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定吸光度。結果見表1。

2.4 樣品含量測定

取腫節風藥材各部位粉末(40目)約5 g，各5份，精密稱定，按供試品溶液制備方法依法制備，各取0.5 mL，置25 mL量瓶中，依法操作，經放置顯色后，于500 nm波長處測定吸光度，代入回歸方程，計算總黃酮的含量(n=5)。結果葉、莖、根的平均含量分別為3.17%，2.38% ，2.11%。

3 討論

采用紫外分光光度法測定腫節風藥材中總黃酮的含量，方法快速、簡便、準確、可靠，為今后腫節風中總黃酮含量的檢測提供了便捷方法，同時為深入開發利用腫節風中黃酮類成分的研究奠定了基礎。經檢測的腫節風中，葉中的總黃酮含量高達3.17%。因此，藥材腫節風中黃酮類化合物具有非常重要的開發利用價值。

表1 蘆丁加樣回收試驗結果(n=9)

本試驗僅考察了不同部位對腫節風中總黃酮含量的影響，產地、采收期等因素對腫節風中總黃酮及其他活性物質的動態變化影響還有待進一步研究。

[1]李石蓉，夏繪晶，康麗潔，等.中藥草珊瑚中異嗪皮啶和總黃酮含量的分析研究[J].中南藥學，2005，3(6):327-329.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:化學工業出版社，2005:154.