氣相色譜法測定蔬菜水果中三氯殺螨醇殘留量

周艷明，忻 雪，胡 睿

(沈陽農業大學分析測試中心，遼寧 沈陽 110161)

氣相色譜法測定蔬菜水果中三氯殺螨醇殘留量

周艷明，忻 雪，胡 睿

(沈陽農業大學分析測試中心，遼寧 沈陽 110161)

建立測定蔬菜和水果中三氯殺螨醇農藥殘留的氣相色譜方法。選擇10種蔬菜、水果樣品，經丙酮正己烷混合試劑提取后，過弗羅里固相萃取柱凈化、堿解，用帶有電子捕獲檢測器的氣相色譜儀測定，外標法定量。通過對該方法的靈敏度、準確度和精密度進行實驗，三氯殺螨醇的最低檢出限為0.005mg/kg，各水平的添加回收率范圍為70.23%～98.10%，變異系數為3.21%～10.12%，所建立的蔬菜、水果中三氯殺螨醇殘留量的測定方法滿足國家標準對食品中農藥殘留測定的要求。

氣相色譜法；蔬菜；水果；三氯殺螨醇；堿解反應

Abstract ：A method using gas chromatography (GC) was established for the determination of dicofol residue in vegetables and fruits. Samples were extracted with a mixture of acetone and n-hexane. The resulting extract was then cleaned up on a Florisil column and treated with a mixture of absolute ethanol and aqueous potassium hydroxide solution. The n-hexane (upper layer) was harvested and washed with 20 g/L aqueous sodium sulfate solution twice prior to the injection into a GC system equipped with an electron capture detector. The external standard method was adopted for dicofol quantification. The figures of merit of the developed method such as sensitivity, accuracy and precision were evaluated. The limit of detection for dicofol was 0.005 mg/kg. Average recoveries for dicofol in 10 species of real samples separately spiked at 3 levels in 10 replicates each were ranged from 70.23%to 98.10%, with a RSD range between 3.21% and 10.12%. This method may satisfy the requirements of the national standards for pesticide residue determination.

Key words：gas chromatography；fruits and vegetables；dicofol；alkaline hydrolysis

三氯殺螨醇又稱開樂散，是一種有機氯殺螨劑。工業品為褐色透明油狀液體，微溶于水，能溶于多種有機溶劑。化學性質穩定，在堿性條件下能水解成二氯苯酮和氯仿[1]。該藥為神經毒劑，對害螨具有較強的觸殺作用，無內吸附性，對成螨、若螨和卵均有效，是我國目前常用的殺螨劑農藥，可防治棉花、果樹、蔬菜等作物上的螨類[2]。

三氯殺螨醇日容許攝入量為0.025mg/kg，過多的攝入有致畸作用。其分解慢，施藥一年后在蔬菜、水果中仍有殘留，嚴重影響蔬菜水果等作物的質量[3-5]。目前我國國家標準中尚無蔬菜水果中三氯殺螨醇殘留量的檢測方法。本實驗擬建立測定蔬菜、水果中三氯殺螨醇殘留量的氣相色譜方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蔬菜、水果 市售。

丙酮、正己烷、氯化鈉、無水乙醇、氫氧化鉀、無水硫酸鈉(650℃灼燒4h備用)均為分析純；固相萃取柱(1000mg/6mL)；正己烷(色譜純) Dikma公司；三氯殺螨醇(dicofol)標準品(純度≥99%) 農業部環境保護科研檢測所。

1.2 儀器與設備

6890N氣相色譜儀[配有電子捕獲檢測器(ECD)及7683B自動進樣器] 美國Agilent公司；分析天平(感量0.0001g和0.01g)；KQ-500DB數控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；勻漿機；RE-52AA旋轉蒸發儀上海亞榮生化儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：HP-1(30m×0.32mm，0.25μm)；載氣(N2)流速1.0mL/min；進樣口溫度260℃；檢測器溫度280℃；程序升溫：120℃保持0.5min，以10℃/min的速度升至260℃，保持10min；進樣量1μL；不分流進樣[6]。

1.3.2 樣品處理

提取：稱取10g(精確至0.01g)樣品于100mL三角瓶中，加入丙酮-正己烷(1:1，V/V)20mL，搖勻，在20℃條件下超聲15min，取出上清液過濾，重復上一步驟，合并濾液，在濾液中加入適量氯化鈉，充分振蕩5min，靜置分層；將上層有機相轉移至30mL雞心瓶中，用旋轉蒸發儀于40℃條件下濃縮至1mL。

凈化：將濃縮后1mL濾液通過已用正己烷活化的固相萃取柱，用10mL丙酮-正己烷(1:9，V/V)洗脫，收集洗脫液于雞心瓶中，在40℃旋轉蒸發儀下濃縮近干[7-12]。

堿解：用1mL正己烷溶解濃縮殘渣，加入0.5mL無水乙醇和1mL 10mol/L的氫氧化鉀溶液，劇烈振蕩5min，靜置分層，移取上面正己烷相于另一個雞心瓶中，用1mL質量濃度為20g/L的硫酸鈉溶液分兩次洗滌，棄去水相。上機測定。

2 結果與分析

2.1 堿解條件的優化

三氯殺螨醇在氣相條件下很不穩定，容易分解成二氯二苯甲酮(DBP)，但分解率不確定，難以瞬間定量分解。三氯殺螨醇在堿性介質氫氧化鉀中可完全分解為DBP和三氯甲烷，反應方程式為：

在常規色譜條件下測定三氯殺螨醇的含量必須將其轉化成色譜條件下穩定的DBP。DBP性質穩定，氣相條件下不易分解，并含有電負性較強的氯原子，可用靈敏度高的電子捕獲檢測器(ECD)測定[13]。影響堿解反應條件有氫氧化鉀溶液濃度、體積，反應時間及反應溫度，本實驗對這4個條件進行了優化，結果見圖1～4。

圖1 氫氧化鉀溶液濃度對堿解反應的影響Fig.1 Effect of potassium hydroxide concentration on the alkaline hydrolysis

圖2 氫氧化鉀溶液加入體積對堿解反應的影響Fig.2 Effect of amount of aqueous potassium hydroxide solution on the alkaline hydrolysis

圖3 堿解反應與時間的關系Fig.3 Effect of time on the alkaline hydrolysis

圖4 堿解反應與溫度的關系Fig.4 Effect of temperature on the alkaline hydrolysis

由圖1可知，隨著氫氧化鉀溶液濃度的增大，標樣峰面積逐漸增大，當濃度大于10mol/L時，峰面積變化很小，因此確定氫氧化鉀溶液的濃度為10mol/L；由圖2可知，當氫氧化鉀溶液加入體積為1mL時，反應基本完全，當加入體積大于1mL時反應完全，考慮到用量及環境問題，最后確定加入體積為1mL；由圖3可知，反應時間為10min時，堿解反應效率為98%，當反應時間大于10min時完全反應，并且穩定，考慮效率因素，最后確定反應時間為10min；由圖4可知，當溫度低于40℃時堿解反應的效率基本相等，當溫度高于40℃時堿解反應效率降低，說明高溫不利于三氯殺螨醇與氫氧化鉀的堿解反應，所以確定反應溫度為室溫。

2.2 三氯殺螨醇的標準曲線和線性范圍

以100μg/mL三氯殺螨醇的標準樣品溶液作為標準儲備液，再分取標準儲備液用正己烷逐級稀釋成10、5、1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.005μg/mL 的標準工作液。堿解后上機測定，以峰面積為縱坐標(y)、質量濃度為橫坐標(x)，繪制工作曲線見圖5，其線性方程為y=15245x－90.037，相關系數R=1，在10～0.01μg/mL范圍內線性關系良好。

圖5 三氯殺螨醇的標準曲線Fig.5 Standard curve of dicofol

2.3 精密度和回收率

在3個濃度點(檢出限0.005mg/kg、最高允許限量0.02mg/kg和5倍限量0.1mg/kg)考察回收率。每種樣品分別做3個濃度添加，每個濃度添加分別做3個平行，按上述方法處理后測定，結果見表1，可見回收率為70.2%～98.1%，變異系數為3.21%～10.12%。

表1 回收率與RSD值(n=10)Table 1 Average recoveries for dicofol in 10 species of real samples separately spiked at 3 levels in 10 replicates each

2.4 檢出限

在本實驗選定的色譜條件下，三氯殺螨醇0.05μg/mL標準溶液色譜圖、葡萄空白樣品色譜圖、葡萄添加0.02mg/kg三氯殺螨醇標準品的色譜圖見圖6～8。

圖6 三氯殺螨醇標準溶液色譜圖0.2μg/mLFig.6 GC chromatogram of dicofol standard at 0.2μg/mL

圖7 葡萄空白樣品色譜圖Fig.7 GC chromatogram of a blank grape sample

圖8 葡萄添加0.02mg/kg三氯殺螨醇標準品的色譜圖Fig.8 GC chromatogram of a grape sample spiked with 0.02 mg/kg dicofol

根據圖8得出信噪比RSN=13.4，按式(1)計算出方法的檢出限為0.005mg/kg，按式(2)計算出方法的定量限為0.015mg/kg。

最低檢出限的計算公式：

式中：c為樣品添加量/(mg/kg)；RSN為信噪比。

3 結 論

本實驗所建立的方法測定快速，靈敏度高、精密度好、準確度高。三氯殺螨醇檢出限為0.005mg/kg，各添加量的回收率范圍為70.23%～98.10%，相對標準偏差為3.21%～10.12%，符合現代農藥殘留分析技術的發展趨勢。

[1] 梁剛, 唐超智. 三氯殺螨醇的刺激素效應及其機制的研究進展[J]. 四川環境, 2004, 23(5): 54-56;71.

[2] YANG X L, WANG S S, BIAN Y R, et al. Dicofol application resulted in high DDTs residue in cotton fields from northern Jiangsu province,China[J]. Journal of Hazardous Materials, 2008, 150: 92-98.

[3] 曹喆. 美國FDA和歐盟農殘檢測技術及最新進展[J]. 現在科學儀器,2005(1): 5-6.

[4] DOMAGALSKI J. Occurrence of dicofol in the San Joaquin river, California[J]. Bullet Enuiron Contam Toxicol, 1996, 57: 84-91.

[5] SAFE S. Clinical correlated of environmental endocrine disruptors[J].Trends Endocrinol Metabol, 2005, 16: 139-144.

[6] SN/T 0.48.1—95 出口茶葉中三氯殺螨醇殘留量的檢測方法氣相色譜法[S].

[7] 陳明, 耿志明, 王冉. 蜂蜜中三氯殺螨醇殘留量的檢驗方法[J]. 中國養蜂, 2005, 56(3): 7-8.

[8] 程雪梅. 色譜分析樣品前處理技術-固相萃取法[J]. 中國計量學院學報, 2002(3): 240-244.

[9] 謝湘云, 沈愛斯, 葉江雷. 固相萃取小柱凈化-氣相色譜法測定土壤和沉積物中有機氯和擬除蟲菊酯農藥殘留[J]. 環境化學, 2006, 25(3): 29-31.

[10] 王錫寧, 季萍. 氣相色譜法同時測定蔬菜水果中三氯殺螨醇及菊酯類農藥殘留[J]. 中國衛生檢驗雜志, 2005, 16(5): 33-35.

[11] 趙道輝, 林國斌, 張瑩, 等. 氣相色譜法測定食品中三氯殺螨醇殘留量的研究[J]. 中國食品衛生雜志, 2003, 15(3): 24-26.

[12] GB/T 5009.176—2003 茶葉水果植物油中三氯殺螨醇殘留量的測定[S].

[13] 朱夢栩, 王勇. 大口徑毛細管氣相色譜柱測定茶葉中三氯殺螨醇的殘留量[J]. 色譜, 2000, 18(1): 64-66.

Gas Chromatographic Determination of Dicofol Residue in Vegetables and Fruits

ZHOU Yan-ming，XIN Xue，HU Rui
(Analysis and Testing Center, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China)

TS207.7

A

1002-6630(2010)10-0219-04

2009-06-15

農業部國家標準方法制定項目(20010671-T-560)

周艷明(1955—)，女，教授，碩士，研究方向為食品質量與控制。E-mail：syauzym@163.com