髓過氧化物酶基因G-463A多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的meta分析

滑峰 王競 谷俊東 李書軍 劉紅雨 周清華

肺癌是目前在全球范圍內(nèi)對人類健康威脅最大的惡性腫瘤之一，關(guān)于肺癌的基礎(chǔ)及臨床研究已經(jīng)成為腫瘤研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容[1,2]。對肺癌病因的研究已經(jīng)明確，腫瘤易感性的不同是影響人群患病率的重要因素，因而對肺癌易感性的研究是當前肺癌研究領(lǐng)域的一個熱點，主要研究方向是單核苷酸多態(tài)性與肺癌易感性關(guān)系的研究[3]。人髓過氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）是一種I相代謝酶，廣泛存在于肺巨噬細胞內(nèi)，具有代謝煙草中的多環(huán)芳烴的作用，因此被認為與肺癌的易感性有關(guān)[4,5]。London[6]于1997年報告了關(guān)于MPO G-463A位點與肺癌易感性關(guān)系的研究后，近十余年先后有近30余位研究者報告了這一位點與肺癌易感性的關(guān)系的研究，但結(jié)果存有爭議，而且研究人群、樣本量、研究方法不一致。本研究采用meta分析的方法對已發(fā)表的研究結(jié)果進行系統(tǒng)評價，以進一步評價MPO-463位點多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 文獻檢索 檢索中國學術(shù)期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫（CNKI）、萬方數(shù)據(jù)庫、維普數(shù)據(jù)庫、Pubmed、Ovid、Elsevier數(shù)據(jù)庫，收集國內(nèi)外公開發(fā)表的“關(guān)于MPO-463位點多態(tài)性與肺癌易感性的關(guān)系”的獨立病例對照研究，中文文獻檢索詞為：“髓過氧化物酶”、“MPO”、“myeloperoxidase”、“肺癌”、“肺腫瘤”，分別作為關(guān)鍵詞、自由詞、主題詞進行檢索；英文文獻檢索詞為：“MPO”“myeloperoxidase”、“l(fā)ung cancer”、“l(fā)ung neoplasm”，分別作為主題詞、自由詞進行檢索。為盡量避免漏查文獻，對所有檢索文獻中提供的參考文獻進行二次檢索，相關(guān)綜述文章、有關(guān)會議的摘要均被檢索，以發(fā)現(xiàn)可能的合格研究。以上檢索工作由3個研究者獨立完成，文獻檢索截止日期為2009年11月18日。

1.2 文獻納入標準 ①研究方法符合流行病學要求；②基因分型方法可信；③文獻提供基因型頻數(shù)、比值比（odds ratio, OR）及95%CI；④研究人群為高加索人群及東亞人群。

1.3 文獻剔除標準 ①研究方法不符合流行病學要求；②基因分型技術(shù)不可信，研究質(zhì)量較差；③重復(fù)研究人群資料；④不能提供原始數(shù)據(jù)資料；⑤其他研究人群。

1.4 數(shù)據(jù)提取 3個研究者獨立提取納入的每個研究的相關(guān)數(shù)據(jù)，如有異議，與第4個研究者協(xié)商解決，然后匯總數(shù)據(jù)，提取以下內(nèi)容：①文獻作者、研究對象國家和種族背景、發(fā)表年代和雜志名稱；②納入研究總的例數(shù)，病例和對照組研究對象的定義和特點；③病例和對照組的等位基因和基因型的分布情況；④基因分析樣本來源和采用的方法；⑤病例和對照組研究對象是否符合Hardy-Weinberg遺傳平衡。

1.5 統(tǒng)計學分析 按照meta分析的要求整理原始文獻并摘錄數(shù)據(jù)，對各研究的基因分布進行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗。由于部分研究僅提供了GG、AG+AA兩種基因型分布的頻數(shù)，而且AA型在人群中的比例很低，本研究只進行了AA+AG/GG兩種基因型比較的系統(tǒng)評價。應(yīng)用統(tǒng)計分析軟件Review manager 4.2分析AA+AG/GG的OR值及95%可信區(qū)間（95% confidence interval, 95%CI），繪制OR值分布圖。對所得的OR值取自然對數(shù)In（OR），進行齊性檢驗，根據(jù)一致性結(jié)果選擇相應(yīng)的數(shù)據(jù)合并方法。若各研究結(jié)果間無異質(zhì)性，則采用Mantel-Haenszel固定效應(yīng)模型進行數(shù)據(jù)合并，計算合并OR及95%CI；若結(jié)果間存在異質(zhì)性，則選用Dersimonian-Laird隨機效應(yīng)模型計算。進行敏感性分析，繪制漏斗圖并采用Egger法對發(fā)表結(jié)果是否偏倚進行評估。

2 結(jié)果

2.1 納入分析研究的一般資料 根據(jù)文獻納入標準，共納入文獻20篇，其中來自歐洲高加索人群報道13篇，中國人群報道3篇，韓國人群3篇，日本及高加索人群混合研究1篇，納入文獻的發(fā)表時間為1997年-2008年，病例診斷均符合WHO標準，基因分型均使用公認的、科學的檢測方法。14項研究進行了性別配對，16項進行了年齡配對。一般資料見表1。

2.2 高加索人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析

2.2.1 meta分析結(jié)果 納入數(shù)據(jù)的歐洲高加索人群13項研究累計病例5 381例，對照5 827例。通過對各研究的AA+AG/GG結(jié)果的異質(zhì)性檢驗，得χ2值為25.17（P=0.02），認為有統(tǒng)計學意義，故采用隨機效應(yīng)模型進行分析得合并OR值為0.91（95%CI: 0.81-1.02），z值為1.68（圖1）。

2.2.2 敏感性分析 換用固定效應(yīng)模型，改用統(tǒng)計效應(yīng)指標為Peto odds ratio，合并OR值未見明顯改變，剔除樣本量最大的Xu等[15]的研究后，計算合并OR值未見明顯改變，提示結(jié)果穩(wěn)定。

2.2.3 發(fā)表偏倚的評估 發(fā)表偏倚評估所得漏斗圖的圖形對稱性差，應(yīng)用SAS程序擬合Egger檢驗，提示有發(fā)表偏倚（t=2.67, P=0.02）（圖2）。

2.3 東亞人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析

2.3.1 meta分析結(jié)果 納入數(shù)據(jù)的亞洲人群7項研究累計病例1 558例，對照1 755例。通過對各研究的AA+AG/GG結(jié)果的異質(zhì)性檢驗，得 值為14.83（P=0.02），認為有統(tǒng)計學意義，故采用隨機效應(yīng)模型進行分析得合并OR值為0.83（95%CI: 0.63-1.09），z值為1.35（圖3）。

2.3.2 敏感性分析 改用固定效應(yīng)模型計算，合并OR值為0.82，未見明顯改變，改用統(tǒng)計效應(yīng)指標為Peto odds ratio,合并OR值未見明顯改變，剔除樣本量最大的Park等[10]的研究后，計算合并OR值未見明顯改變，提示結(jié)果穩(wěn)定。2.3.3 發(fā)表偏倚的評估 發(fā)表偏倚評估所得漏斗圖的圖形基本對稱，應(yīng)用SAS程序擬合Egger檢驗，未見明顯發(fā)表偏倚（t=-0.39, P=0.71）（圖4）。

表 1 納入分析的20項研究一般資料Tab 1 The characteristic of the studies included

圖 1 高加索人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析森林圖Fig 1 The forest plot of the meta analysis for the Caucasians

圖 2 高加索人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析漏斗圖Fig 2 The funnel plot of the meta analysis for the Caucasians

圖 3 東亞人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析森林圖Fig 3 The forest plot of the meta analysis for East Asians

圖 4 東亞人群MPO G-463A與肺癌關(guān)聯(lián)性分析漏斗圖Fig 4 The funnel plot of the meta analysis for the East Asians

3 討論

考慮到MPO G-463A在不同種族的差異分布（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/snp ref.cgi?rs=2333227），本研究只收集以歐洲高加索人群及東亞中日韓人群為研究對象的文獻進行系統(tǒng)評價，檢索到符合要求的文獻28篇。其中重復(fù)報道文獻3篇，2篇沒有提供詳細基因頻數(shù)，2篇為系統(tǒng)評價，1篇研究質(zhì)量較差，予以剔除。共計納入研究文獻20篇，其中高加索人群研究13篇，東亞人群研究6篇，1篇研究人群為高加索及日本人群[12]。分析各個獨立研究樣本人群的流行病學資料，可以看到納入研究人群的性別、年齡、地域、吸煙狀況、飲食習慣、職業(yè)暴露、肺癌病理類型等具有明顯差異性，其中11項研究[6,7,11-14,20,22,24,25]的病例樣本量小于300，距離遺傳關(guān)聯(lián)性研究對樣本量的要求有一定差距，因此單個獨立研究所得到的結(jié)果有可能會是假陽性或者假陰性。對兩種人群發(fā)表偏倚的評價，從所作出的漏斗圖形態(tài)及參考Egger法所計算出的t值，認為在高加索人群研究中有發(fā)表偏倚，但不明顯，在東亞人群研究中沒有偏倚。由于部分文獻只給出了AG+AA基因型的頻數(shù)，而且AA為少見基因型，本研究以AA+AG/GG的合并OR值為效應(yīng)指標。

對高加索人群的分析，采用固定效應(yīng)模型計算得到的合并OR值為0.94（95%CI: 0.87-1.02），異質(zhì)性檢驗P值為0.02，改用隨機效應(yīng)模型，計算合并OR值為0.91（95%CI: 0.81-1.02），由于部分進行亞組人群分析的研究分類標準不一致，無法進行亞組人群的meta分析。剔除樣本量最大的Xu等[15]的研究，結(jié)果無明顯改變，提示敏感性分析得到的結(jié)果是穩(wěn)定的。對東亞人群的分析，采用固定效應(yīng)模型計算得到的合并OR值為0.82（95%CI:0.70-0.97），異質(zhì)性檢驗P值為0.02，改用隨機效應(yīng)模型，計算合并OR值為0.83（95%CI: 0.63-1.09）。有3篇文獻進行了亞組分析，但分組不同，而且樣本量有限，所以未進行亞組人群的meta分析。剔除樣本量最大的Park[10]的研究，結(jié)果無明顯改變，提示敏感性分析的到的結(jié)果是穩(wěn)定的。

Taioli等[14,26,27]對這一問題先后做了系統(tǒng)評價。其中Feyler于2002年第一次做了meta分析，對高加索人群分析計算的結(jié)果是0.82（95%CI: 0.66-1.02），共納入研究6篇。Kiyohara僅僅計算了AA基因型的合并OR值為0.70。Taioli進一步研究了此問題，對納入的15篇文獻進行meta分析計算的合并OR值為0.91（95%CI: 0.84-0.99），研究人群主要為高加索人群。他利用其中的10篇文獻[6,12-14,16,18-20,22,28]進行的pooled analysis得出的AG基因型OR值為0.88（95%CI: 0.80-0.97），AA基因型的合并OR值為0.71（95%CI: 0.57-0.88），但人群為混合人群，而且其中有2篇文獻[13,20]采用的數(shù)據(jù)與公開發(fā)表文獻上的數(shù)據(jù)有差異?？偟膩碚f，這些研究的結(jié)果與我們是一致的。

髓過氧化物酶是一種糖蛋白，主要存在于白細胞中，大量的體外細胞實驗、動物實驗以及以人體為對象的實驗研究提示髓過氧化物酶的異質(zhì)性可能與肺癌易感性具有潛在的關(guān)聯(lián)[29-31]。通過對已發(fā)表文獻的系統(tǒng)評價，我們認為髓過氧化物酶基因G-463A位點兩種基因型在肺癌人群中分布具有差異性，但在總體人群中的潛在作用是微弱的，對單個基因多態(tài)性的研究，意義是十分有限的。