肝硬化并發自發性細菌性腹膜炎患者中性粒細胞吞噬功能的研究

郭春輝，翁錫定

（江陰市人民醫院感染科，江蘇 江陰 214400）

自發性細菌性腹膜炎(Spontaneous bacterial peritonitis，SBP)是肝硬化合并腹水患者常見的嚴重并發癥[1]，而中性粒細胞（Poly-morphonuclear leukocytes，PMNs）的吞噬作用可能是防御腹水感染的主要屏障。為此，我們采用酵母吞噬法檢測50例失代償期肝硬化患者PMNs的吞噬功能水平，以探討肝硬化合并SBP免疫狀況。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取本院2008年3月至2010年3月住院的失代償期肝硬化患者50例，其中男36例，女14例，年齡最大65歲，最小32歲，平均48歲。所有病例均符合2000年西安會議制定的《病毒性肝炎防治方案》診斷標準[2]，且經腹部超音波確定均有腹水產生，其中合并SBP23例。SBP診斷依據：(1)典型的腹膜炎癥狀、體征，如發熱、腹痛、反跳痛及腹肌緊張等腹膜刺激征；(2)腹水常規檢查PMNs＞0.25×109/L；(3)腹水細菌培養陽性。具備上述標準中的兩項或兩項以上者，并排除結核性、癌性腹水即可診斷。正常人組30例，其中男22例，女8例，年齡最大62歲，最小30歲，平均47歲。均為我院體檢中心經健康體檢合格的健康人。所有受檢者在取血前均未使用激素或免疫抑制劑等藥物。

1.2 方法

1.2.1 PMNs吞噬功能檢測 酵母吞噬法的主要過程是：①先將酵母菌置于37℃，培養18-24 h，然后用Hanks平衡鹽水溶液洗滌兩次，再計算酵母菌數，涂片后作姬母薩染色，測定其活力；②抽血2.5 ml置于無菌肝素抗凝管內，測定白細胞總數及中性粒細胞數；③取0.2 ml酵母菌Hanks平衡鹽水溶液加到0.8 ml肝素抗凝全血中(使酵母菌數與中性粒細胞數之比為2：1，置37℃下孵育1 h)，吸取自然沉淀的白細胞層涂片，姬母薩染色。④計數200個PMNs中吞噬的酵母菌數(包括死菌與活菌)，活菌染成藍色，死菌不著色或中心和(或)兩端出現不著色區。

1.2.2 判定標準 (1)吞噬百分率：每100個PMNs中吞噬有酵母菌的中性粒細胞數；(2)吞噬指數：每100個PMNs吞噬的酵母菌數。

1.3 統計學分析 使用SPSS11.5軟件進行統計分析，數據以均數±標準差（x±s）表示，均數比較采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

從表1可見，失代償期肝硬化組PMNs吞噬百分率和吞噬指數分別為（20±6）%、（23±3）%，正常人組分別為（39±8）%、（43±1）%，失代償期肝硬化患者PMNs吞噬功能顯著低于正常人（P＜0.01)。此外，肝硬化患者中SBP組PMNs吞噬百分率和吞噬指數分別為（17±4）%、（19±5）%，明顯低于非SBP組[23±8)%、（27±2）%，P＜0.01]，提示肝硬化合并SBP患者中性粒細胞吞噬功能水平明顯減退。

表1 正常人和失代償期肝硬化患者中性粒細胞吞噬功能水平比較

3 討論

盡管在肝硬化并發SBP發病機制方面，國內外許多學者做了積極的研究，但是對其機制仍不十分清楚，目前認為自發性菌血癥加上易感染的腹水”是形成自發性細菌性腹膜炎的原因。自發性菌血癥發生基礎是腸道細菌分布異常及肝硬化獨特的血液動力學改變，更為重要的是肝硬化患者機體防御能力下降，主要見以下兩類改變：其一是肝硬化患者單核-巨噬細胞系統功能低下[3]，加之肝內血液分流，很多血液通過解剖性或功能性肝內短路進行循環，使位于肝竇的單核-巨噬細胞系統不能發揮吞噬血液內細菌的作用。其二是PMNs數量及功能異常。Aref等[4]通過檢測PMNs凋亡證明，肝硬化患者PMNs壽命縮短，加之肝硬化時由于脾機能亢進和骨髓造血功能受抑制，致使其外周血PMNs數量減少。功能異常最常見的變化是PMNs趨化性顯著降低[5]，本組研究發現失代償期肝硬化患者PMNs吞噬功能顯著低于正常人，此與Nakamura等[6]報告的結果相一致。由此筆者認為可能因為單核-巨噬細胞、中性粒細胞的吞噬作用下降，細菌不能被清除，而在血循環中持續存在，最終可以定植于腹水，導致SBP發生。

此外，我們亦發現肝硬化患者中SBP組PMNs吞噬百分率和吞噬指數較非SBP組降低更顯著，雖然其PMNs絕對數或相對數增高，因此，與PMNs數量相比，中性粒細胞吞噬功能更準確反映PMNs狀態。結合臨床發現PMNs吞噬功能降低程度常標志著患者已發生感染，或易于發生感染，且預后不良。據此分析，PMNs吞噬功能下降可作為肝硬化合并自發性細菌性腹膜炎臨床早期預警指標。

[1]汪長生,楊 進,孫 都,等.乙肝肝硬化并發自發性細菌性腹膜炎危險因素分析[J].臨床內科雜志,2010,27(1):31-33.

[2]中華醫學會傳染病與寄生蟲學分會及肝病分會.病毒性肝炎防治方案[J].中華肝臟病雜志,2000,8(6):324-329.

[3]丁明權.肝硬化合并自發性細菌性腹膜炎診治進展[J].實用醫藥雜志,2008,25(8):1006-1007.

[4]Aref SE,Mahmoud LA,El Retie MF,et al.Assessment of neutrophil apoptosis ex vivo in hepatosplenic patients with neutropenia pre and post splenectomy[J].Hematology,2003,8(4):265-272.

[5]何浩明,田小平.肝硬化患者中性粒細胞趨化性測定[J].蚌埠醫學院學報,1999,24(3):192.

[6]Nakamura I,Ochiai K,Imawari M.Phagocytic function of neutrophils of patients with decompensated liver cirrhosis is restored by oral supplementation of branched-chain amino acids[J].Hepatol Res,2004,29(4):207-211.