ELISA法與TRUST法、膠體金法檢測梅毒抗體的臨床應用和方法學評價

吳麗婷，陳立剛，林 哲

(海南省人民醫院醫學檢驗部，海南 海口 570133)

梅毒是由蒼白密螺旋體(TP)感染所致的一種慢性全身性傳播疾病，其可通過性接觸、母嬰垂直傳播、輸血、注射等途徑傳播，嚴重危害人類健康。TP一旦侵入人體內，血清中可產生非特異性抗體(反應素)和梅毒特異性抗體，因此，血清學檢測是診斷梅毒的重要依據之一，它在梅毒的診斷、治療方面有重要意義。目前，在臨床實驗室用于診斷TP感染的血清學方法有快速血漿反應素試驗(RPR)、TRUST、膠體金法、ELISA、TPPA、聚合酶鏈反應(PCR)、蛋白印跡法和熒光密螺旋體抗體吸收試驗(FTA-ABS)等。不同的檢測方法都有其特殊的臨床應用價值，選擇有效的方法對梅毒的早期診斷、預防和控制梅毒的傳播、避免因錯誤的檢測結果引起不必要的醫療糾紛有著重要的意義。TPPA法是美國疾病預防控制中心2002年推薦的梅毒確證試驗，也是我國實驗室近年來臨床常用的梅毒確診試驗[1]，但由于其步驟繁瑣、試劑昂貴、操作和結果判斷難以自動化，不適合在臨床工作中用于大批量篩查。本文就我院檢驗科最常用的TRUST法、膠體金法、ELISA法做以下方法學評價。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年2月至6月皮膚科患者標本240例，隨機抽取2010年5月病房做輸血四項的患者標本100例，年齡在19-82歲。其中一期梅毒有24例，二期梅毒有26例，三期梅毒8例，其診斷均符合臨床梅毒診斷分期標準。不明期梅毒有21例，其他161例非梅毒患者標本不排除為孕產婦和其他疾病。

1.2 儀器和試劑 TRUST試劑、膠體金試劑均為英科新創公司產品，批號分別是2010017601和2010020907；ELISA試劑為上海科華公司產品，批號是201003011；TPPA試劑為日本富士瑞必歐株式會社公司產品，批號是VN00303。主要儀器有芬蘭MK3酶標儀，深圳匯松PW-960全自動酶標洗板機。

1.3 檢測方法 所有受試者均空腹抽血5 ml，4000 r/min離心5 min后分離血清，血清標本不能及時檢測則置于4℃冰箱，避免反復凍融，均采用TRUST法、ELISA法、膠體金法與TPPA法對所選擇標本按各種方法試劑盒說明進行檢測。前三種方法所得檢測結果均與TPPA法進行比較。

1.4 統計學處理 每種方法與TPPA法檢測結果之間采用χ2檢驗進行顯著性差異比較，均以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 三種血清學方法對各期梅毒標本的檢測結果比較 三種血清學方法對各期梅毒標本的檢出率見表1，可見ELISA法在各期梅毒中的檢出率都比較高，與TPPA法有較高的一致性。

2.2 三種血清學方法檢測結果的評價 三種血清學方法敏感度、特異度及與TPPA法的比較見表2。

表1 三種方法對不同血清標本的檢測結果(例)

表2 三種血清學方法檢測結果的評價（例）

3 討論

TP侵入人體后，人體可產生兩種抗體:一種是抗心磷脂的非特異性抗體(即反應素)，一種是抗菌體的特異性抗體。非特異性抗體不是機體針對菌體本身所起的反應，而是針對菌體破壞患者組織后釋放的類脂產生的反應，故其檢出時間要比檢出機體對菌體產生的特異性抗體遲兩周，并且在一期梅毒早期、晚期梅毒、潛伏期梅毒及梅毒治療后其檢出率降低甚至可呈陰性，所以，用檢測非特異性抗體來對梅毒進行診斷，會有比特異性抗體更長的窗口期和更多的假陰性。而針對菌體的特異性抗體出現早、消失遲，甚至梅毒治愈后還可終生存在[2]的特點，我們認為特異性抗體是診斷TP感染的依據。目前，臨床上常用來檢測非特異性抗體的試驗有RPR和TRUST，這兩種試驗所用的抗原均為心磷脂類。這類試驗雖操作簡便、結果易讀、檢測迅速、試劑成本設備要求低，但由于該試驗方法的局限性、結果易受主觀因素影響、靈敏度和特異性較差、很多時候易受某些傳染病或自身免疫性疾病的影響，常出現生物學假陽性，主要常見于懷孕、紅斑狼瘡、類風濕性關節炎等。所以，即使非特異性抗體陽性結果也只能提示所測標本中有抗類脂抗體的存在，而不能作為患者感染TP的依據。但由于非特異性抗體是TP破壞患者組織后釋放的物質刺激機體產生的，TP在人體的活動程度基本上與此抗體的滴度成正比，所以非特異性抗體是梅毒經診斷后，療效觀察和復發的判斷指標[3]，即當血清滴度升高時，可表示最近感染或復發；當滴度降低時，可表示梅毒得到適當的治療。

臨床上常用以檢測特異性抗體的試驗有膠體金、ELISA、TPPA試驗，膠體金法是一種應用現代生物工程技術制備的高度純化單克隆TP的基因工程抗原，快速檢測特異性抗體的診斷技術，具有快速(5-10 min)、操作簡便、準確的特點，而且，價格實惠、不需要特殊設備、結果易判讀，但膠體金法存在一定的假陰性，在梅毒潛伏期時容易漏診，所以只能作為一般的篩檢試驗，主要用于術前和急診篩查。ELISA法是利用重組TP的特異性抗原包被酶標板孔，采用雙抗原夾心法原理檢測血清中的特異性抗體，對各期梅毒的檢出率較高，其特異度和靈敏度與TPPA非常接近，具有操作簡便、可自動化、標準化的優點，并且能大批量同時檢測。ELISA法可通過酶標儀讀取數據，克服了肉眼判讀的主觀性缺點，為臨床工作中的首選方法，但ELISA結果陽性只能說明正在或曾經感染過梅毒，而不能判斷梅毒的活動情況，故不能用于療效觀察、梅毒復發或再感染的診斷。有相關報道指出梅毒ELISA“一步法鉤狀效應”的影響[4]，即當標本中的梅毒抗體濃度過高或過低時，會因“鉤狀”現象出現假陰性或弱陽性而漏檢，必要時一些可疑的標本可同時進行多種方法測定。

梅毒的以上試驗方法雖各有利弊，但在臨床工作中不能舍棄任何一種方法，本人認為，用膠體金對梅毒進行術前或急診篩選、ELISA法可替代TPPA法用于對梅毒進行確診和大批量標本的篩查，并用ELISA結合TRUST進行療效判斷是較理想的組合方法。

[1]程艷杰,王廣杰,王 旭,等.梅毒螺旋體血清學檢測方法的實驗室評價[J].中國皮膚性病學雜志,2005,19(8):503-504.

[2]季 陽.輸血相關梅毒的檢測[M]//王培華.輸血技術學.2版.北京:人民衛生出版社,2002:113-116.

[3]吳 薇.試析TPHA與TRUST在梅毒血清學診斷中的應用[J].中國衛生檢驗雜志,2003,13(2):239.

[4]張京豫,譚愛國,郭 健.TP-ELISA一步法檢測梅毒螺旋體抗體鉤狀現象研究[J].中國實驗診斷學,2007,11(11):1520-1523.