水泡狀胎塊與水腫性流產患者印記基因P57kip2檢測分析

廖旭慧 宋 云 (浙江麗水市人民醫院 323000)

水泡狀胎塊(HM)是最常見的妊娠滋養細胞疾病，根據肉眼檢查、顯微鏡下特點及染色體核型分析和臨床表現不同，分為完全性水泡狀胎塊(CHM)和部分性水泡狀胎塊(PHM)[1]。臨床上單純依靠病理組織學難以區分一些不典型病例。本研究采用免疫組織化學檢測CHM、PHM及水腫性流產(HA)組織中P57kip2的表達情況，以探討P57kip2在HM的診斷分型及臨床意義。

1 對象與方法

1.1 對象 收集本院2003年1月至2008年12月經病理確診CHM 30例、PHM 30例、HA 15例，均為首次清宮標本，孕齡為6～16周，年齡22～37歲，平均29歲。取正常早期妊娠絨毛組織20例作為對照組。

1.2 試劑與方法 鼠抗人單克隆抗體P57kip2和Elivision檢測試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術有限公司。免疫組化采用Elivision法，常規設陽性對照和陰性對照，用已知陽性片作陽性對照，以TBS代替一抗作陰性對照。所有標本經10%甲醛溶液固定，石蠟包埋切片，經二甲苯脫蠟、梯度酒精脫水、檸檬酸緩沖液高壓抗原修復、3%H2O2封閉過氧化物酶。滴加鼠抗人P57kip2單克隆抗體工作液室溫孵育60min,PBS液沖洗3次，再滴加酶標抗鼠/兔聚合物，室溫孵育30min，室溫下DAB顯色，自來水沖洗，復染，脫水透明，封片。

1.3 結果判定 P57kip2蛋白陽性定位于細胞核，以細胞核出現棕黃色的顆粒為陽性，陽性細胞<5%為(-)，5%～24%為(+)，25%～49%(++)，>75%(+++)。

2 結果

2.1 P57kip2蛋白在CHM、PHM、HA、正常絨毛中的表達情況(表1) P57kip2在CHM中存在表達分布的細胞有特異性，CHM高度水腫的絨毛間質細胞和細胞滋養層細胞P57kip2表達幾乎陰性，絨毛外滋養細胞團細胞散在陽性。PHM水腫的絨毛間質細胞和細胞滋養層細胞P57kip2表達陽性。HA組織中絨毛間質細胞、細胞滋養層細胞和絨毛外的滋養細胞團細胞P57kip2均陽性表達。早孕正常絨毛的表達與HA相似。四種類型的合體滋養層細胞P57kip2均陰性。可見，P57kip2在CHM與其他三種類型的胎盤比較，細胞滋養層細胞和絨毛間質細胞表達有顯著差異，而絨毛外滋養細胞團和合體滋養層細胞無明顯差別。

表1 P57kip2蛋白在CHM、PHM、HA、正常絨毛中的表達情況

2.2 CHM、PHM、HA細胞滋養層細胞和絨毛間質細胞中的P57kip2表達(表2) CHM與PHM、HA三種組織類型細胞滋養層細胞和絨毛間質細胞P57kip2基因表達陽性率比較差異有統計學意義(χ2＝52.32，P<0.01)。

表2 CHM、PHM、HA細胞滋養層細胞和絨毛間質細胞中的P57kip2表達 [例(%)]

3 討論

水泡狀胎塊是一組良性妊娠滋養細胞疾病，但是有一定的惡變傾向，完全性水泡狀胎塊的惡變率約20%，部分性水泡狀胎塊為1%～10%[2]。有關文獻報道侵襲性葡萄胎主要來自完全性水泡狀胎塊，罕見來自部分性水泡狀胎塊[3]。盡管有病理組織學診斷與鑒別診斷標準，但當送檢標本的臨床和病理特征不明顯時，診斷較為困難，特別是處于妊娠6～9周之間的早期CHM，常常被誤診為水腫性流產。近年來，國內外學者運用分子及細胞遺傳學技術，為水泡狀胎塊的分類、發病機制和臨床預后評估提供了更客觀、科學的診斷方法。基因組印記被認為在HM的形成中起關鍵作用[4]。CHM形成機制是空卵受精，不含母體核的DNA，核型為46XX，均為純合子，為二倍體，滋養層細胞核只含父系的染色體[5]，父體DNA過多引起胚胎外過度生長和分化，結果導致滋養細胞的顯著增生。PHM染色體組成為三倍體（69，XXX或69，XXY），一個來自母體，另兩個來自父本單倍體，為正常卵子的雙精子受精[6]。

P57kip2是細胞周期抑制因子和腫瘤抑制因子。此基因是母源等位基因表達，父源等位基因的表達印記被抑制而不表達。CHM均由父系DNA產生，無母系DNA，P57kip2不表達；PHM由一個母源性DNA和兩個父源性DNA構成，表達P57kip2。Fukunaga[7]研究發現，P57kip2在正常早孕絨毛的細胞滋養層及絨毛間質細胞中高表達，而DNA完全來自父方的CHM不表達或極少表達；DNA來自父母雙方的PHM的表達類似正常絨毛。P57kip2抗體單克隆可以在石蠟切片中表達，染色陽性定位胞核。我們運用免疫組化方法，研究結果顯示，P57kip2在CHM中幾乎陰性表達，而在PHM和HA中為強陽性表達。

綜上所述，P57kip2基因的免疫組化分析有助于水泡狀胎塊的診斷分類，輔助臨床正確治療及判斷預后。

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[7]Fukunaga M. Immunohistochem icalcharacterization of P57kip2 expression in early hydatidiform moles[J]. Hum Pathol,2002,33:1188-1192.