乳腺癌組織中Survivin基因的表達及臨床意義

周振宇 谷元廷

多細胞生物體細胞數量恒定取決于細胞增殖與凋亡間的動態平衡，破壞平衡可導致腫瘤的發生。Survivin是凋亡抑制蛋白家族的一個新成員，是迄今發現最強的凋亡抑制因子［1］。近年研究表明，Survivin與腫瘤的發生、發展密切相關。本研究旨在探討乳腺癌組織中Survivin蛋白的表達及其與淋巴結轉移的關系，為臨床治療及提高患者的生存率提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 43例乳腺癌標本選自鄭州大學第一附屬醫院乳腺科2008年至2009年手術切除并經病理證實的組織標本，均為浸潤性導管癌，術前未行任何化療、放療。本組患者年齡30～72歲，中位年齡51歲。臨床分期:Ⅰ期和Ⅱ期16例，Ⅲ期和Ⅳ期27例。其中有淋巴結轉移28例，無淋巴結轉移15例。按組織學分級為:高中分化30例，低分化13例;另取癌旁5 cm外經病理證實的正常乳腺組織作為正常對照。

1.2 Survivin的檢測 采用免疫組織化學鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)法染色，SP試劑盒購于北京中山生物技術有限公司，用兔抗人Survivin多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)檢測Survivin的表達，嚴格按照說明書操作。已知陽性乳腺癌切片作為陽性對照，PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。結果判定:以細胞漿中出現棕黃色顆粒為陽性細胞，400倍鏡下計數500個細胞，≥10%為陽性，〈10%為陰性。

1.3 統計學分析 采用SPSS 10.0統計軟件包進行統計分析。計數資料的比較采用χ2檢驗，相關分析采用Spearman相關分析。

2 結果

2.1 Survivin蛋白表達結果 Survivin在正常乳腺組織中不表達，腫瘤組織中Survivin蛋白陽性染色顆粒主要定位于腫瘤細胞胞漿內，細胞膜亦可有少量著色，周圍間質亦見少量陽性染色。正常組Survivin陽性表達率為0%(0/12)，乳腺癌組Survivin蛋白陽性表達率62.8%(27/43)，乳腺癌組Survivin蛋白陽性表達率顯著高于正常組，差異有統計學意義(P＜0.05)。

2.2 Survivin蛋白陽性表達與乳腺癌臨床病理特征的關系淋巴結轉移組Survivin蛋白陽性表達率(75%，21/28)顯著高于無淋巴轉移組(46.2%，6/15)(P＜0.05);根據臨床病理分期，Ⅰ+Ⅱ期組與Ⅲ+Ⅳ期組之間Survivin蛋白陽性表達率(50.0%νs70.4%)差異有統計學意義(P＜0.05);隨臨床分期增加及淋巴結的轉移，Survivin蛋白陽性表達率逐漸升高(P＜0.05)。見表1。另外，Survivin蛋白陽性表達與患者年齡及分化程度無關(P＞0.05)。

表1 Survivin與乳腺癌臨床病理特征的關系

3 討論

近年來，乳腺癌的發病率呈明顯上升趨勢，嚴重影響著女性的生活質量及威脅其生命。因此，探討乳腺癌的發生、發展、浸潤、轉移的機制，成為目前研究的熱點。多細胞生物體細胞數量恒定取決于細胞增殖與凋亡間的動態平衡，破壞平衡可導致腫瘤的發生。在惡性腫瘤病變中，細胞增殖和凋亡同時增加，但增殖速率明顯大于凋亡速率。當抑制腫瘤細胞增殖和/或促進腫瘤細胞凋亡，則會影響腫瘤的生長。Survivin基因是一個新近發現的凋亡抑制基因［1］，具有強大的凋亡抑制功能，其異常表達與多種人類腫瘤的發生發展及預后密切相關［2］，是聯系細胞周期和細胞凋亡界面的重要因子。在大多數腫瘤均有表達，為腫瘤靶向治療提供了一個良好的前景。

細胞凋亡主要有兩條途徑:死亡受體途徑和線粒體途徑，兩條途徑最終都通過激活下游效應因子使細胞凋亡。1997年耶魯大學的Altieri等［1］利用效應細胞蛋白酶受體1(EPR1)cDNA在人類基因組文庫中雜交篩選并克隆產生了1個IAP基因家族新成員，即Survivin基因，因可延長細胞的生存，故又名生存素。組織分布上Survivin只表達于胚胎和發育的胎兒組織，除胸腺、生殖腺外不見于其他終末分化的正常成人組織。相反在大多數腫瘤組織中均可檢測到Survivin的表達［3，4］。Survivin的主要生物學功能就是抗凋亡，可以直接粘附于活化的效應因子上，使其不能發揮作用，從而阻斷細胞凋亡過程，是目前已知作用最強的凋亡抑制蛋白。

本研究顯示，Survivin在正常乳腺組織中不表達，乳腺癌中Survivin表達率顯著高于正常乳腺組織，提示Survivin基因的表達發生在乳腺癌惡性轉化的早期，表明Survivin基因與乳腺癌的發生有關。Survivin基因在乳腺癌組織中的表達可能抑制了異常突變的細胞的凋亡，從而擾亂了細胞生長和凋亡途徑，促使細胞逃離生長監控，導致腫瘤的發生。對Survivin蛋白的檢測可作為早期乳腺癌的輔助診斷。Tanaka等［5］研究表明，Survivin在乳腺癌組織中的陽性率為70.7%，而在癌旁正常乳腺組織中無表達。與本結果相似。Aziz等［6］檢測皮膚癌和癌前病變組織，發現皮膚癌組織中Survivin基因高表達(87%)，同時發現在皮膚癌前病變中有Survivin基因部分表達，認為Survivin基因的表達與皮膚角化細胞轉化有關，Survivin基因表達可能參與皮膚癌的發生、發展，從而認為Survivin基因的表達是癌變早期事件。

本研究證實，根據臨床病理分期，乳腺癌Ⅰ期組與Ⅱ組期之間Survivin蛋白陽性表達率差異有統計學意義;淋巴結轉移組Survivin蛋白陽性表達率顯著高于無淋巴轉移組;隨臨床分期增加及淋巴結的轉移，Survivin蛋白陽性表達率逐漸升高。提示Survivin基因不但參與乳腺原位腫瘤形成過程的調節，促進其發展，可能還參與乳腺癌細胞轉移過程的調節，在轉移過程中發揮作用。Sarela等［7-8］認為，在惡性腫瘤中，脫落的癌細胞因為Survivin對凋亡的抑制而受到了保護，得以繼續存活并分裂增殖，進而形成腫瘤鄰近或遠離部位的轉移，從而引起預后不良。關于預后情況本組正在跟蹤調查之中。

Survivin的異常表達與乳腺癌的發生、發展密切相關，其在乳腺癌中的高表達與淋巴結轉移及臨床病理分期密切相關，可能是影響乳腺癌預后的重要分子指標。

［1］Ambrosini G，Adida DC，Altier DC.A novel anti-apoptosis gene，survivin，expressed in cancer and lymphoma.Nat Med，1997，3(8):917-821.

［2］Salz W，Eisenberg D，Plescia J，et al.A survivin gene signature predicts aggressive tumor behavior.Cancer Res，2005，65(9):3531-3534.

［3］Suga K，Yamamoto T，Yamada Y，et al.Correlation between transcriptional expression of survivin isoforms and clinicopathological findings in human colorectal carcinomas.Oncol Rep，2005，13(5):891-897.

［4］Li JX，Zhou KY，Liang T，et al.Knockdown of survivin Expression by Small Interfering RNA Induces Apoptosis in Human Breast Carcinoma Cell Line MCF-7.Ai Zheng，2005，24(3):268-272.

［5］Tanaka K，Iwamoto S，Con G，et al.Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas.Clin Cancer Res，2000，6(1):127-134.

［6］Wang M，Wang B，Wang X.A novel antiapoptosis gene，survivin，bcl-2，p53 expression in cervical carcinomas.Zhong Ha Fu Chan Ke Za Zhi，2001，36(9):546-548.

［7］Aziz MH，Reagan-Shaw S，Wu J，et al.Chemoprevention of skin cancer by grape constituent resveratrol:relevance to human disease FASEB J，2005，Apr，18.

［8］Sarela AI，Macadam RC，Farmery SM，et al.Expression of the antiapoptosis gene，survivin，predicts death from recurrent colorectal carcinoma.Gut，2000，6(5):645-650.