高效液相色譜法測定消溶排石合劑中綠原酸的含量

黃 健

江蘇省南通市啟東市中醫院，江蘇 啟東 226200

消溶排石合劑由金錢草，六一散，海金沙，雞內金，威靈仙，炮山甲，生地逾，冬葵子等中藥組成，具有清濕熱、利尿、排石等功效，在本院應用多年，證明對尿路結石、膽結石等疾病有效。為了控制消溶排石合劑的質量，保證臨床用藥效果，本實驗建立了HPLC測定消溶排石合劑中綠原酸含量的方法。經方法學考察證實該方法特異性高，回收率和精密度好，結果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀系統包括高效液相色譜儀 (Waters 515);P200高壓泵;Waters 2487紫外檢測器及GJ605型高壓六通進樣閥;色譜柱 (Hanbang C－18);數據采集及處理采用HS色譜數據工作站V4.0+(杭州英譜科技)

1.2 試藥

綠原酸對照品，中國藥品生物制品檢定所 (批號：110753－200413);消溶排石合劑 (批號：20100512，20090522，20090725，20090730)由本院自制;其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性試驗［1]

色譜柱：HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流動相：乙腈－0.4%磷酸溶液 (11：89v/v);使用前以0.45μM微孔濾膜減壓過濾，檢測波長為UV327nm;流速為1.0ml/min。此條件下綠原酸峰與相鄰峰分離度＞1.5，理論塔板數按綠原酸峰計算應不低于2500。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取綠原酸對照品10.61mg，置100 mL量瓶中，加流動相超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.1061mg/ml對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取本品50ml(5支)置100 mL容量瓶中，加甲醇40mL，密塞，搖勻，超聲處理 (功率 300W，頻率50Hz)30分鐘，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μM微孔濾膜減壓過濾，取續濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關系

取對照品溶液，分別進樣5、10、15、20、25μL，即相當于綠原酸0.531，1.062，1.593，2.124，2.655μg的對照品溶液，測定峰面積，以綠原酸質量為橫坐標、峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程以及線性范圍，分別為：Y=165748.2646X+827.6242，r=0.9998，綠原酸進樣量在0.531～2.655μg范圍內峰面積與進樣量呈良好線性。

2.5 加樣回收率

精密吸取已知含量的樣品溶液5份，分別置50 mL量瓶中，每份精密加入一定量對照品溶液，然后用流動相稀釋到刻度，照含量測定方法操作，計算回收率。結果見表1。

表1 消溶排石合劑加樣回收率試驗結果

2.6 進樣精密度試驗

在上述色譜條件下，取綠原酸對照品溶液重復進樣8次20μL，記錄峰面積，RSD為0.82%。

2.7 重復性試驗

精密稱取同一批號的樣品 (批號：20100312)按照樣品測定的方法重復操作8次，測得綠原酸平均含量和RSD，結果表明，重復性試驗RSD為1.52%，表明本法重現性很好。

2.8 穩定性試驗

取樣品 (批號：20100512)新配的供試品溶液分別在0、2、4、8、16、24 h進樣20μL，測定其中綠原酸的峰面積，結果RSD為1.71% ，表明供試品溶液在24 h穩定。

2.9 樣品測定

取4批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，分別進樣10μL，記錄色譜圖，按外標法計算樣品中綠原酸的含量。結果見表2。

表2 HPLC測定消溶排石合劑的含量結果

3 討論

3.1 根據所測四批樣品的含量結果，消溶排石合劑中綠原酸的平均含量為1.557mg/支，因此可規定消溶排石合劑中綠原酸 (C16H18O9)不得少于1.40mg/支。

3.2 提取方法的選擇 本實驗曾用幾種方法處理樣品，結果以本文擬訂的方法結果最好，且操作簡便，故選用此法。

3.3 檢測波長的選擇 綠原酸的分子光譜僅在327nm處有一中等強度的吸收峰，故選擇327nm為檢測波長。

3.4 流動相的選擇 先后試驗了乙腈－水 (56：44 v/v)，甲醇－水 (45：55 v/v)，結果用乙腈 －0.4%磷酸溶液(11：89v/v)綠原酸的分離效果最好，本實驗用乙腈－0.4%磷酸溶液 (11：89v/v)為流動相，流速為1.0ml/min。經過方法學考察，證明該方法穩定，具有良好的專屬性，可以作為消溶排石合劑質量控制方法之一。

［1]任貽軍，周菁麗，李紀元，高逢喜，等．HPLC法測定排石康顆粒中綠原酸的含量［J]．中國藥師，2009，12(9)：1277－1278．