RP-HPLC法測定痛經康口服液中延胡索乙素的含量

肖若媚 趙偉國 李運景

RP-HPLC法測定痛經康口服液中延胡索乙素的含量

肖若媚 趙偉國 李運景

目的建立痛經康口服液中延胡索乙素的含量測定方法。方法采用反相高效液相色譜法。色譜柱:C18柱(250×4.6，5 μm)，甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調pH值至6.0)(60∶40);流速為0.8 ml/min;檢測波長280 nm;柱溫為室溫29℃;結果 延胡索乙素進樣量在0.026～1.040 mg內線性關系良好，相關系數r=0.9998，平均回收率為99.18%，RSD=1.08%(n=9)。結論該方法簡便、準確、重現性好，可用于痛經康口服液的質量控制。

痛經康口服液、延胡索乙素、高效液相色譜法

痛經康口服液由元胡、當歸、川芎、香附等13味中藥組成的純中藥復方制劑，來源于臨床經驗方，是人民醫院制劑室開發的新的中藥復方制劑，具有理氣活血、通絡止痛的功效，主要用于治療各種原因引起的痛經、月經不調等病癥。本制劑中元胡，具有活血、理氣、止痛的功用為主要藥物，而元胡中延胡索乙素為該藥的主要藥效成分，具有較強的鎮痛作用。本研究擬應用高效液相色譜法對痛經康口服液中延胡索乙素含量進行測定，并以此作為痛經康口服液的質量控制指標之一。

1 儀器與材料

1.1 儀器 安捷倫1200高效液相色譜儀(包括G1311A在線真空脫氣裝置，G1322四元泵，G1314B二極管陣列檢測器，G1329A自動進樣器，安捷倫化學色譜工作站)(美國安捷倫科技有限公司)，電子分析天平(日本島津AUW220D)。

1.2 供試品與試劑 延胡索乙素對照品(中國生物制品鑒定所批號:110726-200610)，痛經康口服液(中山市人民醫院制劑科自制)，色譜甲醇(天津市科密歐化學試劑有限公司批號:20090310)，水為蒸餾水，氯仿等其他試劑分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱:ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(250×4.6×5 μm);流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調pH值至 6.0)(60∶40);流速為0.8 ml/min;檢測波長280 nm［1］;柱溫為室溫29℃;理論板數3000，分離度大于1.5。

2.2 對照溶液制備 精密稱取經五氧化二磷減壓干燥過夜至恒重的延胡索乙素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含52 ug的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品10 ml，加氨試液調pH值至10置分液漏斗中，用氯仿萃取三次(20 ml，20 ml，15 ml)，合并氯仿液，用水20 ml洗滌1次，氯仿液揮干，殘渣加甲醇溶解并定容至10 ml量瓶中，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備 取缺延胡索藥材的陰性制劑10.0 ml，同“2.3”項下方法制備陰性對照溶液。

2.5 專屬性試驗 取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液，按“2.1”項下色譜條件測定。結果供試品溶液在與延胡索乙素對照品相同保留時間處出現色譜峰，而陰性對照液在與延胡索乙素相同保留時間處無色譜峰出現，表明陰性對照無干擾。HPLC圖譜見圖1。

圖1

2.6 線性關系考察 分別吸取上述對照品溶液0.5，1.0，2.5，5.0，10.0，20.0 ul，分別按“2.1”項下色譜條件進樣，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，以對照品進樣量(μg)為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為 Y=1455X-8.0574(R2=0.9998，n=6)。表明延胡索乙素進樣量在0.026 mg～1.040 mg之間與峰面積呈良好線性關系。

2.7 重復性試驗 取批號為20100625的樣品6份，分別按含量測定方法平行操作、測定，平均含量為0.031 mg/ml，RSD=0.6%，表明方法重復性良好。

2.8 穩定性試驗 取供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h各進樣1次，測定延胡索乙素的峰面積。結果RSD=1.8%，表明延胡索乙素在24 h內基本穩定。

2.9 加樣回收試驗 精密吸取1 ml已知含量(0.031 mg/ml)的同一供試品溶液(批號:20100625)9份，分成3組，每組各分別精密加入延胡索乙素對照品溶液0.6，0.8，1.0 ml，按供試品方法提取、測定含量，計算加入量的回收率，結果見表1。

表1

2.10 樣品含量的測定 取本品3批(批號:20100625、20100628、20100629)，按“2.3”項下方法制備供試品溶液。在上述色譜條件下進樣，測定峰面積，按外標法以峰面積計算延胡索乙素的含量，結果3批含量分別為，0.031 mg/ml，0.030 mg/ml，0.0294 mg/ml。

3 討論

3.1 提取方法的選擇 本研究供試品為口服溶液，并且延胡索乙素為叔胺類生物堿，極易溶于氯仿與乙醚［2］，因此擬選擇先用氨試液堿化溶液，延胡索乙素游離，然后用氯仿進行萃取的方法。經薄層色譜檢驗證實，氯仿萃取后的溶液，延胡索乙素呈陰性，表明方法可行。

3.2 色譜條件選擇 本研究參考2010版藥典色譜條件選擇流動相，并根據實際情況予以確定，流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(三乙胺調pH值至6.0)(60:40)(藥典為55:45［1］，但與相關研究相同［2，3］);流速為 0.8 ml/min;檢測波長 280 nm;柱溫為室溫29℃。結果測得分離度高，峰型良好，保留時間適中。

［1］中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典.2010版第一部.中國醫藥科技出版社，2010，130.

［2］潘云雪，諸葛隴，張芳芳.RP-HPLC測定骨健口服液中延胡索乙素的含量.中國現代應用藥學雜志，2009，26(5):400-402.

［3］張明輝，藺寧利，邵忙收.HPLC法測定胃安寧片中延胡索乙素含量研究.陜西中醫學院學報，2010，33(1):61-62.

Determination of Tetrahydropalmatine in Tongjingkang Oral Liquid by RP-HPLC

XIAO Ruo-mei，ZHAO Wei-guo，LI Yun-jing.Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangdong 528400，China

Objective To determine tetrahydropalmatine content in Tongjingkang Oral Liquid by RPHPLC.MethodsThe chromatographic column of Agilent technologies C18(250 mm ×4.6 mm，5μm)was used with the mobile phase consisted of the mobile phase consisted of 0.1%H3PO4(pH adjusted to 6.0 by triethylamine)-nethanol(40∶60)，the flow rate was 0.8 ml/min，the detective wavelength was set at 280nm and column temperature was 29℃.ResultsThe linear relation of tetrahydropalmatine was excellent within the range of 0.026 ～1.040 mg(r=0.9998，n=6)，and the mean recovery was 99.18%with RSD=1.08%(n=9).ConclusionThe method is simple，accurate，fast，stable and reliable，which can be used to determine quality conerol in Tongjingkang Oral Liquid.

Tongjingkang Oral Liquid;Tetrahydropalmatine;RP-HPLC

528400中山大學附屬中山醫院

李運景 zspylyj@163.com