分光光度法測定鷹嘴豆豆葉、豆莖、豆莢中總多糖含量

胡爾西丹 劉 海* 艾爾肯·依不拉音 阿吉艾克拜爾·愛薩 阿布力米提·伊力

1.新疆醫科大學藥學院，新疆 烏魯木齊 830054;2.中科院新疆理化技術研究所植物資源化學重點實驗室，新疆 烏魯木齊 830011

鷹嘴豆是維吾爾醫常用的藥材。維吾爾族用它治療支氣管炎、黏膜炎、霍亂、便秘痢疾、消化不良、腸胃氣脹、毒蛇咬傷、糖尿病、性欲降低、皮膚瘙癢、高脂血癥、中暑等疾病。在中醫上，鷹嘴豆可以調節濕度，有止瀉、解毒、壯身等作用，它的花可以治療痢疾，浸泡水后服用可以治療中藥中毒和白帶增多等。籽?？勺隼騽?、催奶劑，可治療失眠、預防皮膚病等。

多糖廣泛存在于自然界，是多種中草藥的有效成分之一，具有多種生物活性，是理想的免疫增強劑。能提高機體免疫系統的功能，對正常細胞沒有毒副作用，在抗腫瘤，抗病毒，抗衰老等藥物研究中，多糖類藥物的研制已成為當今世界新藥的開展方向之一。多項研究已經充分表明多糖無毒副作用，來源廣泛，生物活性高，必將為高效低毒藥物開發開辟廣闊的前景。

鷹嘴豆的食用及藥用價值已經受到廣泛的關注，鷹嘴豆中各種成分的分析已經做得很詳細，但是豆莖、豆葉、豆莢中的成分分析沒有見到報導。本次課題的研究目的是利用分光光度法的檢測技術，檢測鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢中總多糖的含量，為鷹嘴豆的全面開發利用提供科學依據。

1 儀器與試劑

分光光度計，蒽酮、濃硫酸、95%乙醇、無水乙醇、氯仿、正丁醇均為分析純，鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢樣品(2009年采于新疆木壘)。

2 實驗方法與結果

2.1 多糖的提取與精制［1－2]

分別稱取干燥至恒重過40目篩的鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢粉末100g，加水適量，于95℃時超聲提取30min，過濾，濾渣于95℃時再超聲提取30min，共提取3次，合并提取液，于旋轉蒸發儀上濃縮至100ml。在其中加95%乙醇至含醇量達80%，4℃時靜置過夜。40000r/min下離心分離，離心后的沉淀物加少量熱水溶解后，再加95%乙醇至含醇量達80%，靜置過夜，離心分離。將得到的粗多糖溶于熱水，用Sevag法 (氯仿∶正丁醇=4∶1)除蛋白8次。加1%活性炭脫色，抽濾，加入乙醇使含醇量達80%，靜置過夜，離心分離。沉淀物置于60℃的真空干燥箱中干燥，即得精制的淡黃色的鷹嘴豆豆莖，豆葉多糖。將精制后的多糖在260nm～280nm區間掃描，結果顯示無吸收峰，說明蛋白基本除盡。

2.2 標準溶液的制備

精密稱取葡萄糖對照品0.1000g，用蒸餾水溶解并定容至100m l，配成濃度為1mg/ml的標準儲備液。

2.3 標準曲線的繪制

精密吸取葡萄糖標準溶液0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5m l于10m l的容量瓶中，用蒸餾水定溶至刻度。分別取2.0m l至25ml具塞試管中，加蒽酮－濃硫酸 (0.2g∶100m l)試劑4m l，放入沸水中加熱8min，迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度。用吸光度對濃度回歸，得回歸方程：A=0.0294C－0.0325，r=0.9996。線性范圍為 3.333～166.7μg/ml。

表1 標準溶液的濃度與吸光度

2.4 換算因子的測定

精密稱取精制的多糖0.1000g，用少量熱蒸餾水溶解后定溶于100m l容量瓶中，搖勻。精密吸取此溶液2ml至25m l具塞試管中，加蒽酮－濃硫酸試劑4m l，放入沸水中加熱8min迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度，根據標準曲線計算濃度，再按下式計算換算因子：

f=W/CD

式中W為多糖質量 (mg)，C為多糖的濃度 (μg/m l)，D為稀釋因素。

得豆莖：f=6.265豆葉：f=4.608豆莢：f=3.216。

2.5 樣品溶液的測定

分別準確稱取鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢粉末0.5g(4份)，置于100m l容量瓶中，加水適量，在95℃時超聲提取30min，過濾于另一100m l容量瓶中，濾渣用蒸餾水洗滌多次，用水定溶至刻度。精密吸取樣品溶液2.5m l置25m l容量瓶中，加水稀釋刻度。精密吸取此溶液2.0ml置于25ml具塞試管中，加入蒽酮－濃硫酸試劑4m，放入沸水中加熱8min，迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度。

含量 (%)=CDf/W×100%

式中W為多糖質量 (mg)，C為多糖的濃度 (μg/m l)，D為稀釋因素，f為換算因子。

鷹嘴豆豆莖多糖的平均含量為11.4% (n=4)，RSD=1.3%。

鷹嘴豆豆葉多糖的平均含量為12.6% (n=4)，RSD=1.1%。

鷹嘴豆豆莢多糖的平均含量為8.7% (n=4)，RSD=0.98%。

2.6 精密度實驗

分別精密吸取對照品溶液1.0ml，于25m l具塞試管中，加1.0ml蒸餾水，加入蒽酮－濃硫酸試劑4m，放入沸水中加熱8min，迅速冷卻室溫。于620nm處測定吸光度。求的其RSD分別為：0.83%;0.97%;1.1%(n=5)

2.7 回收率實驗

分別準確稱取鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢粉末0.5g(8份，分為4組)，置于100ml容量瓶中，第一組為本底，后面三組分別加入0.1m l，0.2m l，0.3m l的對照品溶液，按2.5項下操作。于620nm處測定吸光度。

測得豆莖、豆葉、豆莢平均回收率為98.01%;99.21%、101.2%

3 結果與討論

3.1 結論

(1)分光光度法測定鷹嘴豆豆莖、豆葉中總多糖含量。方法靈敏度高，其準確性、重現性、線性關系、穩定性均能達到科研和生產的要求，操作簡便，可用于植物中總多糖的測定。

(2)鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢中所含多糖量比較高。結合鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢中所含豐富的微量元素［3]，可知，鷹嘴豆全身都是寶，鷹嘴豆豆莖、豆葉、豆莢也有著廣闊的開發前景。

［1]劉曉河，梁惠花，因陳中多糖含量測定［J]．中草藥，2003，34(6)：519－520．

［2]葉勇，植物多糖的分離純化與制備 ［J]．中國食品添加劑．2001，(5)：29－31．

［3]劉海，胡爾西丹．鷹嘴豆地上部位元素分析及藥用價值研究［J]．中國民族民間醫藥，2009，(9)：141－142．