異基因造血干細胞移植治療再生障礙性貧血

梁彬，俞康，陳怡，沈志堅，江松福，胡旭東，錢紅蘭，孫嵐，周淑娟

(溫州醫學院附屬第一醫院 血液科，浙江 溫州 325000)

再生障礙性貧血(AA)是臨床常見的難治性血液病，尤其是重型再生障礙性貧血(SAA)，發病急，病情重，以往病死率極高（＞90%）。異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)是治療SAA的有效手段，其治愈率可達75%～80%[1-2]。由于SAA病情進展極快，HLA相合供者來源缺乏，在我國，已開展allo-HSCT治療SAA的單位不多，我們應用allo-HSCT治療再生障礙性貧血3例，取得較好療效，現報告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 我們在2007年11月-2008年11月，共開展allo-HSCT治療再生障礙性貧血3例，其中SAA 2例，再障-陣發性睡眠性血紅蛋白尿（AAPNH）綜合征1例，均為HLA全相合親緣供者。患者的臨床資料和供、受者之間的關系見表1。

1.2 方法

1.2.1 供者造血干細胞采集：病例1體重達150 kg，供者為其胞妹，體重為45 kg。為采集足夠數量的造血干細胞，采用外周血+骨髓聯合移植，采用重組粒細胞集落刺激因子（rhG-CSF）5μg·kg-1·d-1動員。于動員的第4天在連續硬膜外麻醉下采集骨髓，采集到單個核細胞（MNC）1.21×108/kg，CD34+細胞0.35×106/kg；分別于動員的第5天、第7天用CS3000 血細胞分離機(Baxter公司)采集外周血MNC，采集到MNC 1.68×108/kg，CD34+細胞0.62×106/kg，共輸入MNC 2.89×108/kg，CD34+細胞0.97×106/kg。病例2、病例3均只采用rhG-CSF動員，采集外周血干細胞（方法同上，見表2）。

1.2.2 預處理方案：病例1、病例2采用環磷酰胺（CTX）+抗胸腺細胞球蛋白（ATG）（兔抗）方案，CTX 60 mg·kg-1·d-1，-5至 -2 d；ATG 5 mg·kg-1·d-1；-5至-2 d。病例3預處理方案為白消安200 mg，-8至-6 d；CTX 3.0，-5至-4 d；氟達拉賓50 mg，-5至-3 d；ATG 100 mg，-5至-1 d，輸液量＞4500 mL/d，堿化尿液及美司鈉（總量為CTX劑量的150%）預防出血性膀胱炎。

1.2.3 急性移植物抗宿主病（aGVHD）預防方案：采用環孢素A(CsA)聯合短療程甲氨蝶呤(MTX)的經典方案。CsA從-1 d開始2.5 mg·kg-1·d-1，微泵持續靜脈滴注，胃腸道癥狀改善后，改為5 mg·kg-1·d-1口服，每周監測1次全血CsA濃度，維持在200～300 ng/mL。MTX用法：+1 d為15 mg/m2，+3、+6、+11 d為10 mg/m2，靜脈給藥。

1.2.4 其他并發癥預防：患者從移植前9 d開始口服復方新諾明、氟康唑、黃連素進行腸道除菌。采用前列腺素E1（PGE1）預防肝靜脈閉塞?。╒OD），PGE1 40μg/d，從移植后0 d到45 d靜脈滴注。預防巨細胞病毒（CMV）感染方案：更昔洛韋0.25～0.5 g/d，-8至-1 d，從0 d開始改用阿昔洛韋0.5 g/d，0至+30 d，每周檢測CMV抗原血癥，CMV-pp65抗原陽性，對陽性患者以更昔洛韋0.5 g/d預防性治療，直至CMV抗原血癥轉陰2周停藥。例1用羥乙基淀粉去除供者骨髓紅細胞。

1.2.5 支持治療：全部患者均住空氣層流無菌病房。移植后第6天開始皮下注射rhG-CSF 5μg·kg-1·d-1，至中性粒細胞≥2.0×109/L停用。移植后10 d開始予高糖、脂肪乳劑、復方氨基酸等支持治療，至患者基本能正常飲食后停用。當患者血小板低于20×109/L時輸注單采血小板，血紅蛋白低于80 g/L時輸注洗滌紅細胞，所有血制品輸注前均行照光或用過濾器去除白細胞。

1.2.6 植入證據檢測：移植后連續3 d外周血中性粒細胞大于0.5×109/L為植入成功。使用短串重復序列聚合酶鏈反應(STR-PCR) 行移植后植入鑒定。移植后1、2和3個月行骨髓細胞學、染色體及血型檢查，以后每3個月行骨髓細胞學檢查。

表13 例AA患者臨床資料和供受者之間關系

2 結果

2.1 造血重建 移植物有核細胞平均數為3.11(2.10～4.35)×108/kg，CD34+細胞平均數為2.79（0.97～5.60）×106/kg。移植后患者中性粒細胞大于0.5×109/L的平均天數為16 d（12～20 d），血小板大于20×109/L的平均天數為20 d（15～23 d）（見表2）。

表23 例AA患者異基因造血干細胞移植后造血重建及臨床結果

2.2 供髓植入證據 3例移植患者經DNA短串聯重復序列以及染色體檢測、ABO血型檢測均為供髓完全植入。

2.3 并發癥 病例1移植過程中發生出血性膀胱炎，積極對癥治療后好轉。移植后+89 d發生皮膚型II度aGVHD，使用甲基潑尼龍80 mg/d，+96 d好轉，未發生慢性GVHD(cGVHD)。移植后+92 d患者出現皮膚皰疹病毒感染，經抗病毒治療后治愈。移植后半年，患者出現反復副鼻竇炎、上呼吸道感染，經抗感染治療后好轉。病例2移植后+2 d出現發熱、腹痛，以下腹部為主，考慮為急性胃腸炎，予抗感染、對癥支持治療后好轉，+7 d出現發熱、咽痛，考慮上呼吸道感染，予亞胺培南和萬古霉素針抗炎治療后好轉。例3移植后+4 d出現中上腹疼痛，考慮為急性胃黏膜損傷，予對癥治療后好轉，+11 d出現發熱、咳嗽，考慮為上呼吸道感染，予美洛培南和萬古霉素針抗炎治療后好轉。+30 d患者出現低熱，偶有咳嗽、無咳痰，胸部CT檢查提示：肺部真菌感染，予伏立康唑針200 mg靜脈滴注，每日2次，+35d體溫恢復正常，2周后改予伏立康唑片200 mg口服，每日2次，共4周，+55 d復查胸部CT正常。+33d患者出現腹瀉，大便涂片檢查可見白細胞，革蘭氏染色以陽性桿菌為主，考慮為難辨梭狀芽孢桿菌性腸炎可能，口服去甲萬古霉素，0.2 g，每日4次，+35 d腹瀉好轉。3例患者均未發生VOD和間質性肺炎。

2.4 隨訪 平均隨訪時間248 d（138～465 d），全部患者均無病生存。最長患者已無病生存465d。

3 討論

Allo-HSCT是治療SAA的有效方法。移植排斥是其存在的主要問題，早期移植排斥的發生率高達30%～60%，預處理方案加入ATG和CTX后，移植排斥的發生率降至5%左右[3]。國內翟衛華等[4]報道，異基因造血干細胞移植治療16例再生障礙性貧血患者，14例（占87.5%）獲得造血重建，移植排斥2例（占12.5%）。本組3例患者均采用CTX+ATG為預處理方案，其中1例再障-PNH綜合征患者加用白消安、氟達拉賓，3例患者均獲得完全植入，未發生移植排斥。移植排斥的發生還與移植物造血干細胞數量有關[5]。一般移植中心要求移植物MNC達到（2～3）×108/kg，本組3例患者均達到該標準，病例1體重達150 kg，而供者體重僅45 kg，相差3倍以上，我們采用外周血+骨髓聯合移植的方法，采集到足夠數量的造血干細胞，保證移植物成功植入。此外，移植排斥的發生還與移植前多次輸血、機體處于致敏狀態有關。SAA患者病情重，進展迅速，需大量成分輸血支持治療，本組病例1、病例2移植前曾多次輸單采血小板、濃縮紅細胞，所有血制品均采用照光或過濾的方法去除白細胞，有效減少了機體致敏狀態的發生。

aGVHD是Allo-HSCT治療SAA的主要并發癥之一，發生率約在30%～40%，不僅影響生存率，也嚴重影響患者移植后的生活質量[1]。隨機研究表明，聯合應用MTX+CSA方案優于單用MTX方案，目前為止，MTX+CSA仍然是AA患者預防GVHD最常用的方案[6]。本組患者均采用MTX+CSA預防GVHD，僅1例患者發生II度aGVHD，經常規劑量激素治療后好轉，未發生cGVHD。另2例患者因隨訪時間尚短，cGVHD尚有待觀察。

異基因造血干細胞移植是PNH（包括AA-PNH綜合征）患者唯一治愈方法[7]。年齡較輕、嚴重血細胞減少或反復發生血栓的患者是移植最合適人選。清除PNH克隆可采用清髓或非清髓預處理方案。本組病例3為AA-PNH綜合征，病史長達16年，以接觸苯后出現視物不清、乏力起病，血常規及骨髓常規檢查提示AA，予CSA為主免疫抑制治療后好轉；10年前出現血尿，外周血細胞流式細胞儀檢查CD55、CD59缺失，診斷為AA-PNH綜合征，移植前2個月，出現腹瀉，粒缺，經CSA、G-CSF及抗感染治療，感染控制，但仍為粒缺，達SAA標準，具有移植指征。為清除PNH克隆，我們在ATG+CTX預處理方案基礎上加用白消安、氟達拉賓，患者成功獲得供髓植入，外周血細胞流式細胞儀檢查未檢測到CD55、CD59缺失克隆。

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[4] 翟衛華,王玫,周征,等.異基因造血干細胞移植治療再生障礙性貧血16例臨床觀察[J]. 中華血液學雜志, 2007,28(2):78-82.

[5] Champlin RE, Horowitz MM, van Bekkum DW,et al. Graft failure following bone marrow transplantation for severe aplastic anemia: risk factors and treatment results [J].Blood,1989,73(2):606-613.

[6] Locatelli F, Bruno B, Zecca M,et al. Cyclosporin A and short-term methotrexate versus cyclosporin A as graft versus host disease prophylaxis in patients with severe aplastic anemia given allogeneic bone marrow transplantation from an HLA-identical sibling: results of a GITMO/EBMT randomized trial[J].Blood, 2000, 96(5):1690-1697.

[7] Brodsky RA.Advances in the diagnosis and therapy of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria[J]. Blood Rev,2008,22(2):65-74.