抗菌藥物敏感性試驗中應注意的問題

周春鳳 王艷萍 郭時金

（①山東省濱州畜牧獸醫研究院 ②山東綠都安特動物藥業有限公司 256600）

抗菌藥對細菌性傳染病的控制起到了非常重要的作用，但由于養殖過程中不科學的、盲目的濫用抗菌藥，很多致病性細菌產生了耐藥性，使得抗菌藥對細菌性疾病的控制效果越來越差，這樣不但造成藥物浪費，而且還延誤病情，給養殖戶造成了很大的經濟損失。為了更準確有效的治療，必須對現有藥物進行藥物敏感度測定，通過這種有的放矢的投藥方式，會大大減少藥物浪費，降低養殖成本，下面就從藥敏紙片的制備和藥敏試驗的操作等方面作一總結。

1 藥敏紙片的制備

（1）選用質地均勻、吸水力強的濾紙(如國產新華1號濾紙)，印上藥物名稱，然后用打孔機打成直徑6mm的圓紙片，置于干凈的小西林瓶內，壓線后瓶口以單層牛皮紙包扎。經15磅20min高壓滅菌，置于超凈工作臺內，將滅菌紙片傾倒于滅菌90mm培養皿，均勻鋪開，然后置于60℃干燥箱內充分干燥。

（2）在超凈工作臺內，將紙片傾斜于培養皿一角，然后按每100張紙片加入一種抗菌藥物1ml，用滅過菌的小鑷子翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，翻動紙片時不能將紙片攪爛。同時在培養皿上記錄藥物名稱，浸泡0.5h后，將培養皿放平后，用小鑷子將紙片在培養皿內均勻鋪開，置37℃溫箱內干燥，干燥后即可在超凈工作臺內裝瓶，密塞，如有條件可真空干燥。置陰暗干燥處存放，避免受潮，有效期3～6個月。

（3）各種抗菌素紙片的制備：青霉素：用無菌生理鹽水稀釋成10000u/ml，吸取1ml加甲醇9ml即成。每片含藥量10IU。鏈霉素：稱取原藥10mg，加無菌生理鹽水1ml混勻，再加75%的甲醇9ml，即成。每片含藥量10μg。四環素、土霉素、金霉素：稱取原藥10mg，加0.9%甘氨酸鈉1ml，再加pH3.6甲醇9ml即成。每片含藥量10μg。新霉素、新生霉素、慶大霉素、多粘菌素、呋喃西林：稱取原藥10mg，加無菌生理鹽水1ml，再加甲醇9ml混勻即成。氯霉素、合霉素、紅霉素：稱取原藥10mg，加甲醇10ml即成。每片含藥量10μg。卡那霉素：稱取原藥10g加無菌生理鹽水1ml混勻再加50%的甲醇9ml混勻即成。每片含藥量10μg。粘菌素：用無菌生理鹽水稀釋成1000000IU/ml取1ml加甲醇9ml混勻即成。每片含藥量10IU。磺胺類藥物：稱取原藥10mg加甲醇10ml混勻。每片要含量100μg。

2 藥敏試驗操作步驟

2.1 涂菌 用滅菌棉花棒蘸取試驗菌涂布于培養基表面，倒置37℃溫箱中20min，使培養基表面干燥。

2.2 放紙片 將各種抗菌素紙片放置于培養基表面，用滅菌小鑷子輕壓，使其緊貼于培養基上，置4℃冰箱中放置2～4h，再取出置37℃溫箱內培養16～24h。

2.3 測抑菌圈直徑 取出培養皿，測量各紙片周圍的抑菌圈直徑，準確到0.1mm。

3 影響藥敏結果的因素

3.1 培養基 應根據試驗菌的營養需要進行配制。傾注平板時，厚度合適(約5～6mm)，不可太薄，一般90mm直徑的培養皿，傾注培養基18～20ml為宜。培養基內應盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺藥和TMP的活性。

3.2 細菌接種量 細菌接種量應恒定，如太多，抑菌圈變小，能產酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。

3.3 藥物濃度 藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗的結果，需精確配制。商品藥應嚴格按照其推薦治療量配制。

3.4 培養時間 一般培養溫度和時間為37℃ 8～18h，有些抗菌藥擴散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養基，先置4℃冰箱內2～4h，使抗菌藥預擴散，然后再放37℃溫箱中培養，可以推遲細菌的生長，而得到較大的抑菌圈。

4 應用

藥物敏感試驗后，應選擇高敏藥物進行治療，也可選用兩種藥物協助使用，以減少耐藥菌株。在選擇高敏藥物時應考慮藥物的吸收途徑，因為藥敏試驗是藥液直接和細菌接觸，而在給禽用藥的時候，必須通過機體的吸收才能使藥物達到一定的效果，所以在給禽用藥時，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，這樣才會達到好的治療效果。