珠光香青對α-葡萄糖苷酶的抑制活性研究

閆紅月 劉世峰 孫利偉

珠光香青(Anaphalis marguuritacea Benth.Et Hook)為菊科香青屬植物，具有清熱解毒、祛風(fēng)活絡(luò)等作用。其含黃酮類甾體和三萜類。國內(nèi)外對它的藥理研究報告很少，本文對其α-葡萄糖苷酶的抑制活性進行了研究。

1 儀器與材料

Multiskan MK3酶標儀(美國 Thermo Electron公司);DELTA 320型PH計(美國Mettler-Toledo公司)。α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，EC 3.2.1.20)購自美國Sigma公司。

珠光香青于2008年7月采集于河南商城，經(jīng)河南大學(xué)天然藥物研究所袁王俊博士鑒定為菊科香青屬植物珠光香青 Anaphalis marguuritacea Benth.Et Hook，標本存于河南大學(xué)天然藥物研究所。

2 實驗部分

將珠光香青粉碎，放入桶內(nèi)，分別用石油醚、乙酸乙酯、甲醇冷浸提取3次，1次/7 d，然后將各個部分的提取液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收溶劑，即可得到石油醚、乙酸乙酯、甲醇部分提取物。

2.1 α-葡萄糖苷酶劣力的測定 112 μL磷酸鉀緩沖液(pH 6.8)，加入0.2 U/ml的 α-葡萄糖苷酶20 μL，DMSO 8 μL，37℃恒溫15 min后加入2.5 mmol/L PNPG 20 μL，37℃恒溫反應(yīng)15 min。再加入0.2 mol/L的Na2CO3溶液 80 μL，于405 nm波長下測OD值。

2.2 標準曲線制作 根據(jù)采用的反應(yīng)體系，用磷酸緩沖液(pH 6.8)配置 1000 μmol/L PNPG，稀釋成 400、300、200、150、100、50、25、5 和 0 μmol/L。分別取 7 種不同濃度的PNPG 溶液各 160 μl，加入 0.2 mol/L Na2CO3溶液 80 μl，混勻，在405 nm下測定OD值，測三組取平均值。以O(shè)D值為縱坐標，對硝基苯酚濃度為橫坐標，做出標準曲線。

2.3 α-糖苷酶抑制活性的檢測 以張麗［3］等建立的96微孔板篩選方法，405 nm處檢測其OD值。并用Origin軟件求出相應(yīng)IC50值。

3 結(jié)果與討論

珠光香青三個部分的提取物在相同濃度下(1.5 mg/ml)測定其α-葡萄糖苷酶的抑制活性。乙酸乙酯部分和甲醇部分在濃度為1.5 mg/ml時對α-葡萄糖苷酶的抑制活性均較高。

為進一步研究抑制活性，對珠光香青三個部分的提取物的初篩終濃度依次對半稀釋進行IC50值計算。得出各提取物的IC50值大小為:石油醚部分的IC50為173.3μg/ml;甲醇部分的IC50為669.1 μg/ml;它們都遠低于陽性對照Acarbose(1081.27 μg/ml)，只有乙酸乙酯部分的 IC50為 1125.2μg/ml，高于陽性對照 Acarbose(1081.27 μg/ml)。

珠光香青不同部位提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性均呈劑量依賴性，而且，當(dāng)抑制率達到一定程度時，再增加提取物質(zhì)量濃度，抑制活性不會提高［3］。其中，石油醚部分提取物在1 mg/ml時，就達到了它的最大抑制率，說明石油醚部分提取物具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

［1］張麗，李曉梅，李彩芳，等.加拿大蓬α-葡萄糖苷酶抑制作用研究.河南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2008，27(4):39-41.