高效液相色譜法測定糕點中苯甲酸·山梨酸·糖精鈉含量的研究

王 娟

山東省夏津縣質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，山東德州 253200

高效液相色譜法測定糕點中苯甲酸·山梨酸·糖精鈉含量的研究

王 娟

山東省夏津縣質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局，山東德州 253200

本文對國標法進行改進，建立了用HPLC測定糕點中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的前處理方法。結(jié)果表明，該方法平均回收率均達到92.8%以上，符合試驗要求。

HPLC；糕點；苯甲酸；山梨酸；糖精鈉；前處理

苯甲酸、山梨酸是有機化學防腐劑，可以防止食品腐敗變質(zhì)，延長食品保存期，抑制食品中微生物繁殖；糖精鈉是一種人工合成甜味劑，其糖度為蔗糖的500倍，且價格低廉。上述3種添加劑在食品加工過程中被廣泛使用，但過量食用會對人體會產(chǎn)生一定影響，因此對食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的含量進行檢測有重要意義。

目前，國標法(GB/T 5009-2003)[1]使用高效液相色譜法檢測苯甲酸、山梨酸、糖精鈉只適用于汽水、果汁、配制酒等液體食品，但在實際工作中，經(jīng)常遇到固體食品(如糕點)需要檢測。由于糕點類食品含有蛋白質(zhì)、淀粉類大分子，以及油脂，直接進樣會堵塞、損傷色譜柱；而采用有機溶劑提取，操作過程繁瑣，對操作者健康的損害大。為此，筆者對國標法進行改進，探討出針對糕點樣品的HPLC前處理方法，進行糕點樣品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的含量測定，獲得了良好的效果。

1 試驗原理

糖精鈉是易溶于水的鹽類，樣品中的苯甲酸、山梨酸經(jīng)氫氧化鈉溶液(1.0 mol/L)浸泡后，轉(zhuǎn)化為易溶于水的苯甲酸鈉、山梨酸鈉，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、過濾等處理后，3種被測組分滯留于水相中與雜質(zhì)分離，經(jīng)流動相帶進色譜柱后進行分離，以保留時間定性，以峰面積定量。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 儀器

1）高效液相色譜儀；2）快速掃描紫外分光檢測器；3）超聲波清洗器；4）0.45μm微孔濾膜過濾器；5）臺式低速大容量離心機；6）樣品粉碎機。

2.1.2 試劑

1）甲醇，色譜純；2）0.02 mol/L的乙酸銨溶液；3）1.0 mol/ L氫氧化鈉溶液；4）6 mol/L鹽酸溶液；5）106 g/L的亞鐵氰化鉀溶液；6）220 g/L的乙酸鋅溶液；7）50 g/L飽和硼砂溶液；8）純水，2次重蒸水。

2.1.3 標準溶液。

1.00 mg/ml苯甲酸標準溶液、1.00 mg/ml山梨酸標準溶液、1.00 mg/ml糖精鈉標準溶液。

2.2 方法

2.2.1 色譜條件的選擇

色譜柱為 SB-C184.6×250 mm，5μm不銹鋼柱；流動相為乙酸銨∶甲醇(97∶3)；流速1.0 ml/min，檢測波長:230 nm，柱溫：常溫，采用20μl的定量環(huán)進樣。

2.2.2 沉淀劑的選擇[2]

常用的蛋白質(zhì)沉淀劑有硫酸鋅、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、硫酸銅、氫氧化鈉等，試驗顯示，選用220 g/L的乙酸鋅溶液和106 g/ L的亞鐵氰化鉀溶液各5.0ml時，處理液產(chǎn)生明顯沉淀，上層液清晰，濾液可順利通過濾膜，能滿足前處理的需要，達到滿意效果。故選擇乙酸鋅和亞鐵氰化鉀作為沉淀劑。

2.2.3 樣品的前處理

稱取5.0 g粉碎均勻樣品于具塞比色管(50 ml)中，加純水25 ml溶解浸泡，加入氫氧化鈉溶液1.0 ml，放置過夜。再加入10.0 ml飽和硼砂溶液，搖勻后，加入5.0 ml亞鐵氰化鉀溶液、5.0 ml乙酸鋅溶液，用6 mol/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值至中性，加水定容至50 ml，振蕩使其充分混合，轉(zhuǎn)移至離心管中高速離心，取上清液，用0.45μm微孔濾膜過濾，收集濾液于樣品瓶中備用。

2.2.4 標準曲線的制作和測定

配制濃度為0.02、0.04、0.08、0.12、0.20 mg/ml的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉標準溶液系列，各進樣20.0μl進行測定，記錄保留時間及峰面積，各濃度均重復進樣兩次，以不同濃度及相應平均峰面積值繪制標準曲線。待儀器穩(wěn)定后，在同一色譜條件下，通過20μl的定量環(huán)分別進樣品和標準品，經(jīng)HPLC儀測定，以保留時間定性，用樣品峰面積和標準峰面積比較，外標法定量。

3 結(jié)果與分析

3.1 標準曲線及回歸方程

3種組分的濃度為0.02～0.20 mg/ml時，山梨酸的響應值最大、糖精鈉的響應值最小，但三者均呈良好線形關系，相關系數(shù)都超過0.999，符合試驗要求。

注：檢出限按3倍信噪比計算。

3.2 精密度試驗

取同一份樣品(含有苯甲酸、山梨酸、糖精鈉)，重復測定6次，其結(jié)果可以看出，該方法的精密度比較好，所測苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的RSD值分別為0.19%、0.15%、0.32%。

3.3 準確度試驗

在同一份樣品中(不含有苯甲酸、山梨酸、糖精鈉)分別加入高、中、低3種不同濃度的標準溶液，進行加標回收試驗。可以看出，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的加標回收率良好(均超過90%，其平均回收率分別為92.8%、95.2%、92.8%)，這保證了數(shù)據(jù)的可靠性。

4 討論

糕點、月餅等固體食品中，油脂和蛋白質(zhì)含量比較高，如按傳統(tǒng)的GB/T5009-2003方法進行樣品前處理，不僅費時費力，而且難以排除油脂對測定的影響；蛋白質(zhì)由兩性電解質(zhì)氨基酸組成，故其在水溶液中解離也為兩性反應，溶液中的等電點改變則導致蛋白質(zhì)變性，使其能與金屬離子、高分子酸或某些鹽類產(chǎn)生沉淀反應。試驗還發(fā)現(xiàn)，選用乙酸鋅溶液和亞鐵氰化鉀溶液各作蛋白質(zhì)沉淀劑，沉淀效果較好，同時還能除去油脂，提高樣品的過濾速度，并可防止進樣后色譜柱堵塞、減少其他雜質(zhì)對測定結(jié)果的干擾。

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部.食品衛(wèi)生檢驗方法(理化部分) [S].北京：中國標準出版社，2004：223-236.

[2]車燕妮，蘇敬武，劉新榮，等.常溫液相色譜法快速測定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉[J].預防醫(yī)學文獻信息，2004，10（3）：309-310.

[3]賴曉紅，謝維平.高效液相色譜法檢測固體食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸的樣品前處理方法探討[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2000，10（5）：609-610.

TS213.2

A

1674-6708（2010）21-0086-02