大黃赤芍對術后肝衰竭大鼠肝細胞再生凝血功能水平的影響

毛德文,張榮臻,程萬里,王 林,邱 華

(廣西中醫學院第一附屬醫院肝病科(廣西中醫肝病治療中心),廣西南寧530023)

近年研究[1-3]表明大黃具有促進大鼠肝移植術后肝細胞再生和恢復肝功能的作用,赤芍具有保護肝細胞、調整血漿環化核苷酸及恢復肝功能等多種作用[4]。體外研究發現,赤芍能促進肝細胞DNA合成,促進肝細胞再生[5]。肝臟是合成多種凝血物質的場所,并能合成和滅活纖維蛋白的溶解物質,在凝血、抗凝系統保持動態平衡中起到重要作用。肝衰竭時,由于肝細胞數量減少及許多生物活性物質,如內毒素、細胞因子、細菌產物及病毒感染可以使維生素K的吸收、利用障礙,促抗凝物質生成障礙,使凝血系統平衡受到破壞,引起血液栓塞或出血[2-3]。肝衰竭時凝血酶原時間延長、凝血酶原活動度低于40%,常因病情危重導致死亡[6-7]。本研究以90%肝葉切除術構建大鼠肝衰竭肝再生模型,測定大鼠凝血功能,并觀察大鼠術后96 h內存活率,客觀評價大黃、赤芍對肝衰竭大鼠凝血功能的影響,并嘗試探討其促進肝細胞再生的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗藥物 大黃注射液含生藥為0.2 g/mL、赤芍注射液含生藥為0.4 g/mL,由廣西中醫學院藥學院制備提供,促肝細胞生長素注射液(PHGF)購自威海賽洛金藥業有限公司,濃度為2 mL∶30 μ g。

1.2 動物 Wistar大鼠,體重(250±50)g,SPF級,雄性,300只,由廣西醫科大學實驗動物中心提供(動物生產許可證號：SCXK桂2009-0002)。

1.3 設備 SYSMEX1500型全自動血凝儀。

1.4 方法 SPF級Wistar大鼠300只,雄性,體重(250±30)g,隨機分為6組：假手術組50只、模型組50只、大黃注射液組50只、赤芍注射液組50只、大黃與赤芍聯合組50只、促肝細胞生長素組50只。參照Higgins法,行90%[8]肝葉切除術,建立急性肝衰竭大鼠模型,大黃組、赤芍組以及大黃赤芍聯合組,通過預實驗取得最佳劑量后,在造模前3 d開始腹腔注射給藥,1次/d,間隔24 h,共給藥7 d。假手術組和模型組予0.9%生理鹽水10 mL/(kg/d),促肝細胞生長素組參照文獻給予11 μ L/(kg/d)。

1.4.1 觀察項目 觀察各組大鼠成模后的外觀、皮毛、膚色、呼吸、行為活動、精神狀態、食欲、大小便及鼻、眼、口腔有無異常分泌物等變化,并準確記錄每只大鼠死亡的時間、數量分布等情況。

1.4.2 各組大鼠凝血功能檢測 成模后,按3,6,12,24,48,72 h不同時間點每組取存活大鼠6只,采用1%的戊巴比妥鈉0.4 mL/100 g腹腔注射麻醉大鼠,固定于手術臺上,腹部碘伏消毒,無菌條件下正中切口開腹,用真空抗凝管抽取大鼠腹靜脈血2 mL,采血結束后應立即顛倒混勻5～10次,不可用力猛搖。30 min內用采用SYSMEX1500型全自動血凝儀,測定PT值,計算PTA。其余大鼠用于96 h內存活率觀察。

2 結果

2.1 大鼠存活率觀察 大鼠在實施90%肝葉切除術后,6～12 h后開始出現豎毛、神志不清、昏睡等不適癥狀,12 h內一般無大鼠死亡;12 h后開始出現死亡現象。成模后96 h各組之間的存活率比較,以大黃、赤芍聯合組與促肝細胞生長素組療效最佳,其余次序為大黃組、赤芍組、模型組。提示大黃、赤芍以及促肝細胞生長素均能提高肝衰竭大鼠的存活率(見表1)。

表1 成模后96 h內存活率觀察結果

2.2 大黃、赤芍對大鼠凝血功能的影響 實驗各組大鼠PT、PTA測定結果：模型組與假手術組比較,模型組PT顯著升高,PTA下降,表明肝葉切除術可致殘存肝組織凝血機制嚴重障礙。中藥干預組凝血酶原時間(PT)與促肝細胞生長素組比較：24～48 h大黃注射液組、赤芍注射液組、大黃赤芍聯合組及促肝細胞生長素組均有下降。在改善PTA方面：大黃注射液組、赤芍注射液組、大黃赤芍聯合組、促肝細胞生長素組均有上升,但以大黃赤芍聯合組與促肝細胞生長素組效果明顯,二者之間比較無統計學意義。說明大黃赤芍聯合用藥與促肝細胞生長素均能顯著改善肝衰竭大鼠凝血功能(見表2)。

表2 各組大鼠凝血功能水平的比較(±s,n=6)

表2 各組大鼠凝血功能水平的比較(±s,n=6)

注：與促肝組比較,#P＜0.05,##P＜0.01。

指標 組 別 3 h 6 h 12 h 24 h 48 h 72 h PT/s假手術組 13.20±1.12## 13.10±1.84## 13.02±1.67# 13.24±1.66# 13.48±1.81# 13.78±1.20模型組 25.30±1.31 25.64±1.24 28.42±1.24# — — —大黃組 23.12±1.37 23.41±1.51 22.16±1.20 20.51±1.68# 22.18±1.08# 21.10±1.09#赤芍組 24.20±1.22 23.14±1.41 20.68±1.19 19.94±1.49# 18.67±1.01# 17.54±1.64#大黃赤芍聯合組 24.23±1.91 23.21±1.84 19.15±1.19 16.99±1.09 16.01±1.18 15.95±1.34促肝組 23.13±1.44 23.16±1.24 20.51±1.21 16.24±1.11 15.84±2.09 15.93±1.88 PTA假手術組 0.601±0.033## 0.613±0.031## 0.585±0.037## 0.596±0.031# 0.613±0.036# 0.599±0.032#模型組 0.201±0.031 0.181±0.022 0.178±0.031 — — —大黃組 0.235±0.032 0.265±0.031 0.305±0.033 0.405±0.039# 0.445±0.037# 0.463±0.036#赤芍組 0.222±0.031 0.272±0.031 0.281±0.036 0.381±0.032# 0.392±0.035# 0.437±0.038#大黃赤芍聯合組 0.217±0.038 0.269±0.031 0.361±0.032 0.467±0.038 0.462±0.031 0.477±0.031促肝組 0.202±0.031 0.282±0.034 0.315±0.036 0.441±0.034 0.451±0.032 0.461±0.032

3 討論

大黃、赤芍[9-11]具有改善肝衰竭大鼠肝臟的合成、分泌、解毒功能,減少肝臟壞死面積,保護肝細胞線粒體,抑制肝細胞凋亡,提高存活率等作用。本研究發現,與假手術組比較,成模后模型組、大黃注射液組、赤芍注射液組、大黃赤芍聯合用藥組和促肝細胞生長素組PT水平均有下降;中藥干預組與促肝細胞生長素組比較,以大黃赤芍聯合組的下降水平最為明顯(P＜0.05)。PTA均有上升,以大黃赤芍聯合組的上升水平最為明顯(P＜0.05),提示大黃赤芍聯合用藥可以明顯改善大鼠凝血功能。成模后96 h各組之間的存活率比較,以大黃、赤芍聯合組與促肝細胞生長素組療效最佳,其余依次為大黃組、赤芍組、模型組。通過本實驗證實大黃、赤芍具有改善大鼠凝血功能以及提高肝切除術后大鼠存活率的作用。并且肝切除術后肝衰竭大鼠存活率的提高與改善大鼠凝血功能的程度呈現一致性。提示藥物治療組可能是通過改善大鼠凝血功能的水平,從而促進肝衰竭肝細胞的增殖,最終達到肝切除術后肝衰竭大鼠生存率的提高。

[1]朱清靜,陳鋒,盛國光.大黃對暴發性肝衰竭大鼠肝損傷及肝再生的影響[J].中國中西醫結合消化雜志,2006,14(1)：5-7.

[2]朱清靜,陳鋒,盛國光.大黃對大鼠肝再生過程中信號調節蛋白α 1的影響[J].中西醫結合肝病雜志,2006,16(1)：21-22.

[3]孟珂偉,潘承恩,吳勝利,等.大黃素及全血供對減體積大鼠肝移植術后肝再生的影響[J].中華實用中西醫雜志,2005,18(1)：4-6.

[4]汪承伯,賀江平.涼血活血中藥對慢性肝炎伴膽汁瘀積的病理修復作用：附63例報告[J].中華傳染病雜志,1992,10(4)：231.

[5]阮金蘭,趙鐘祥,曾慶忠,等.赤芍化學成分和藥理作用的研究進展[J].中國藥理學通報,2003,19(9)：965-970.

[6]張燕香,孫旦澄,余懷勤.急性肝炎與重癥肝炎患者止凝血指標檢測的臨床意義[J].血栓與止血雜志,1996,3(1)：24.

[7]覃小敏,寧琴.重型肝炎發病的分子機制研究進展[J].國外醫學：流行病學傳染病學分冊,2004,6(3)：15.

[8]史冀華,朱盛興,張永軍.大鼠肝部分切除術的應用解剖及實施[J].世界華人消化雜志,2004,16(22)：2516-2520.

[9]毛德文,邱華,余晶,等.解毒化瘀Ⅱ方對實驗性暴發性肝衰竭大鼠的保護作用[J].中醫研究,2006,19(12)：13-15.

[10]毛德文,邱華,胡振斌,等.解毒化瘀Ⅱ方對暴發性肝衰竭大鼠肝線粒體內Ca2+穩態的影響[J].中國臨床康復,2006,10(31)：70-72.

[11]邱華,毛德文,農朝贊,等.解毒化瘀Ⅱ方對暴發性肝衰竭大鼠肝線粒體Bcl-2及Cytochrome C表達的影響.中國康復理論與實踐,2007,13(3)：51-53.