多拉菌素澆潑劑對昆明小鼠消化道線蟲驅殺效果研究

李曉云，高玉紅,2，路義鑫*

（1.東北農業大學動物醫學學院，哈爾濱 150030；2.黑龍江畜牧獸醫職業學院，黑龍江 雙城 150111）

動物線蟲病是危害動物健康的主要寄生蟲病之一，給畜牧業帶來巨大的經濟損失。多拉菌素（Doramectin，DOR）是目前治療和預防動物線蟲效果最優秀的抗寄生蟲藥物之一。驅蟲機制主要是引起蟲體谷氨酸控制氯離子通道開放，使神經休止電位超級化，導致蟲體神經傳導受阻發生麻痹而驅蟲[1]。目前，在獸醫臨床使用的多拉菌素制劑多為注射劑，由于注射給藥需要一定的專業技能，且對局部有較強的刺激性，相對比較費時費力。基于此，本教研室自行配制了多拉菌素的透皮給藥制劑—澆潑劑，此劑型具有操作簡單，使用方便，對機體刺激性小等優點，且可避免口服給藥可能發生的肝首過效應及胃腸滅活，降低個體差異，維持恒定的血藥濃度，延長藥物作用時間和增強療效[2]。本試驗通過多拉菌素澆潑劑對小鼠消化道線蟲的藥效學研究，闡明多拉菌素澆潑劑對小鼠線蟲的驅殺效果及用藥劑量，為多拉菌素澆潑劑的臨床推廣應用提供理論依據和實踐基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗藥物

0.5%多拉菌素澆潑劑，本教研室自行配制。

1.1.2 試驗動物

140只健康普通級成年昆明小鼠，體重28±2 g，雌雄各半，購自哈爾濱市某實驗鼠類養殖場。

1.2 方法

將140只小鼠隨機分為4組，每組35只，分別為低、中、高劑量組（L、M、H組）及空白對照組（C組），用藥劑量分別為2、5、15 mg·kg-1BW，空白對照組不給藥，用藥方式為一次性經皮給藥。每組于用藥后1、7、14、21、28、35和45 d分別剖殺5只，觀察計數其腸道內蟲體的數量。根據用藥組與對照組蟲體數量的差異，得出多拉菌素澆潑劑的驅蟲效果。

小鼠腸道蠕蟲檢查方法按照國家標準進行[3]。首先將小鼠處死，然后打開胸腹腔，分別將胃、小腸、盲腸、結腸、直腸放入生理鹽水中剪開，于36℃溫箱中靜置30 min，刮取腸壁黏膜，用反復洗滌沉淀法收集各種蟲體并計數，對收集到的蠕蟲按常規方法固定或透明，置于顯微鏡下進行蟲體鑒定。

1.3 數據處理

借助Excel和SAS軟件進行數據處理，所得數據均以平均數±標準差（±S）表示，組間 t檢驗分析。

2 結果與分析

2.1 剖檢線蟲的形態學觀察

蠕蟲學剖檢發現，實驗小鼠不同程度地感染有兩種線蟲，分別為隱匿管狀線蟲（Syphacia obvelata）和四翼無刺線蟲（Aspiculuris tetraptera）。隱匿管狀線蟲頸翼膜窄小而平緩，口孔簡單，蟲體從口孔至體中央處體徑逐漸增加，其食道球為圓形。雌蟲長3.45～5.95 mm，陰門位置比較靠前，尾部長而細尖，卵為半橢圓形。雄蟲長1.25～1.65 mm，尾部向腹面彎曲，有一細長的交合刺，有引器，雄蟲體型極小，眼觀如同短鼠毛。一般肉眼可以憑借體型區別雌蟲與雄蟲，做出初判（見圖1）。四翼無刺線蟲口孔兩旁有明顯的半橢圓形頭泡，頸翼膜發達呈箭狀，食道球為橢圓形，雌蟲長2.85～3.75 mm，陰門位于蟲體前約1/3處，尾部呈平緩圓錐狀，蟲卵為橢圓形。雄蟲長1.95～3.55 mm，無交合刺和引器，尾向腹面彎曲，有寬尾翼（見圖2）。

圖1 隱匿管狀線蟲形態學觀察Fig.1 Morphological observation of Syphacia obvelata

隱匿管狀線蟲檢出部位主要為盲腸，四翼無刺線蟲檢出部位主要為大腸。對照組35只小鼠均檢出隱匿管狀線蟲，感染率100%，感染強度12～328條·只-1，其中僅有5只檢出四翼無刺線蟲，感染率為14.3%，感染強度1～8條·只-1，可見隱匿管狀線蟲感染率和感染強度均比四翼無刺線蟲高，隱匿管狀線蟲為昆明系小鼠線蟲的優勢種。

隱匿管狀線蟲和四翼無刺線蟲均為鼠類易感的腸道寄生線蟲，兩種線蟲在生活史中均無需中間宿主，主要通過蟲卵經口感染。隱匿管狀線蟲有在肛周產卵的習性，蟲卵產出6 h后即有感染力；四翼無刺線蟲卵隨糞便排至外界，27℃下6 d后發育到感染期。可見，隱匿管狀線蟲引起感染的機會更多一些，可能是通過動物間相互舔舐，或食入被蟲卵污染的食物和水等使該蟲在種群內快速傳播。

2.2 驅蟲效果觀察

用藥后各組小鼠檢獲的線蟲數量見表1及圖3。

圖2 四翼無刺線蟲形態學觀察Fig.2 Morphological observation of Aspiculuris tetraptera

表1 應用多拉菌素澆潑劑后各組小鼠檢出線蟲蟲體數（±S,n=5）Table 1 Number of nematodes detected in mice of each group after drug application(±S,n=5)

表1 應用多拉菌素澆潑劑后各組小鼠檢出線蟲蟲體數（±S,n=5）Table 1 Number of nematodes detected in mice of each group after drug application(±S,n=5)

注：L-低劑量組；M-中劑量組；H-高劑量組；C-空白組。小寫字母不同為差異顯著（P＜0.05）；大寫字母不同為差異極顯著（P＜0.01）；相同為無顯著性差異（P＞0.05）。Note∶L-Low-dose group;M-Middle-dose group;H-High-dose group;C-Control group.Different lowercase letters represent significant difference(P＜0.05);different capital letters represent extremely significant difference(P＜0.01);the same represent no significant difference(P＞0.05).

組別G r o u p s L C 7 d 0 1 6 4.9 5±5.3 7 1 d 0 8 9.4 8±4.2 3 1 4 d 0 8 7.4 6±6.3 5 2 1 d 0 6 3.0 4±6.9 2 4 5 d 6 1.6 4±8.4 3 B b d 1 1 3.4 3±1 3.9 7 A a 3 5 d 4 6.3 5±9.8 2 B b d 1 2 2.4 6±1 2.9 6 A a 2 8 d 1 3.5 9±2.3 2 9 7.3 5±6.5 8 M 0 0 0 0 4 2.4 4±5.2 3 B b c 1 8.2 9±6.1 3 B b c 0 H 0 0 0 0 0 2 6.4 3±8.5 4 B b c 3 7.2 7±5.6 2 B b c

圖3 多拉菌素澆潑劑對小鼠消化道線蟲驅蟲效果Fig.3 Insecticidal effect of doramectin pour-on on gastrointestinal nematodes in mice

多拉菌素澆潑劑一次給藥驅蟲，對隱匿管狀線蟲和四翼無刺線蟲驅除效果明顯，用藥后1 d，低、中、高各劑量組蟲體即被100%驅除，可見驅蟲效果是明顯快速的。同時可知，多拉菌素澆潑劑對這兩種線蟲的未成熟蟲體（童蟲）也有驅除作用，在此期間，剖檢的腸道中未見童蟲階段的蟲體。可見多拉菌素澆潑劑能有效驅除小鼠體內線蟲。

依據小鼠再感染寄生蟲的時間，可確定在小鼠體內的殘效期。低、中、高劑量組蟲體被完全驅除的藥效持續時間分別超過21、28和28 d，這期間各劑量用藥組小鼠體內檢測不到線蟲。低劑量組小鼠于給藥后第28天后出現蟲體，中、高劑量組小鼠第35天后出現蟲體，可見多拉菌素澆潑劑預防寄生蟲再感染的有效時間較長。對第35天和第45天兩個時間點檢出的線蟲數量進行方差分析發現，低、中、高劑量組檢出的線蟲數量均極顯著低于對照組（P＜0.01），中、高劑量組顯著低于低劑量組（P＜0.05），但中、高劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）。由試驗結果可推測適宜劑量的多拉菌素澆潑劑在治療小鼠線蟲時，在其體內維持有效的藥物濃度時間至少為28 d。因中、高劑量組檢測到的線蟲數量差異無顯著性（P＞0.05），提示多拉菌素澆潑劑驅殺小鼠線蟲時的最佳用藥劑量是5 mg·kg-1·BW-1。

藥效持續期后小鼠重新感染線蟲，隱匿管狀線蟲出現較早，數量較多，四翼無刺線蟲出現較晚，數量相對較少，與對照組剖檢蟲體數量一致，說明昆明小鼠自然感染線蟲以隱匿管狀線蟲占優勢；同一只鼠體內既有成蟲又有童蟲，童蟲大小不一，表明是不同批次反復感染的。可見昆明小鼠對兩種線蟲不但是易感的而且對再感染可能缺乏有效的抵抗力，提示多拉菌素澆潑劑在實際應用時一定要及時進行二次或多次給藥，防止反復感染以徹底驅蟲。

3 討論與結論

國內上市的多拉菌素劑型只有注射劑，商品名為“通滅”，因劑型單一價格較高目前只有在大型的種用畜禽場應用。隨著集約化養殖業的發展，對動物醫學用藥的簡便、高效、安全以及減少應激等提出了較高的要求。澆潑劑是藥物通過皮膚吸收的一種給藥新劑型，藥物應用于皮膚上后，穿過角質層，使藥物以恒定或接近恒定的速度透過皮膚，進入血液循環而發揮全身治療作用的劑型，作用時間長，用藥順應性好，其研究一直備受關注。傳統的獸醫口服和注射給藥對家禽，特別是幼畜，造成的應激較大，透皮給藥恰恰可以克服這方面的不足，現已有商品化的伊維菌素澆潑劑供應。目前有關多拉菌素澆潑劑的報道不多，國外的研究表明，多拉菌素澆潑劑應用于動物體內外寄生蟲病的預防和治療效果顯著[4-5]，和伊維菌素澆潑劑相比，多拉菌素澆潑劑血藥濃度高，持續時間長[6]。

實驗動物感染寄生蟲，不僅影響動物自身健康，干擾實驗結果，還可引起人獸共患疾病，威脅人類健康。動物體內外寄生蟲感染情況與飼養環境因素及個體反應性差異有關[7]。在發達國家，實驗動物繁育和管理水平較高，寄生蟲已接近消滅水平，我國實驗動物事業起步較晚，直到2002年才取消普通級大小鼠。普通級小鼠飼養于開放環境，腸道蠕蟲感染率很高，隱匿管狀線蟲、四翼無刺線蟲和短膜殼絳蟲為主要蟲種，其中線蟲的感染更為普遍和嚴重[8-10]。本試驗中，對照組小鼠100%感染線蟲，感染強度12～328條·只-1，表明昆明小鼠感染線蟲情況較為嚴重，這可能與所選取動物均為普通級，飼養在開放系統中有關。經蠕蟲學剖檢共發現2種線蟲，分別為隱匿管狀線蟲和四翼無刺線蟲，其中隱匿管狀線蟲感染率和感染強度均比四翼無刺線蟲高，與文獻報道的情況一致[10]，可見實驗小鼠感染的線蟲主要為隱匿管狀線蟲，該寄生蟲生活史屬直接型（即不需要中間宿主），鼠主要通過食入混在食物和墊料中的蟲卵而感染，一旦被感染很難徹底驅除，需重建鼠群。有些清潔級實驗小鼠中也檢出了隱匿管狀線蟲[11]，可能與飼料、墊料滅菌不徹底，導致蟲卵進入動物體內有關。

多拉菌素澆潑劑用于小鼠給藥劑量的確定。首先根據動物的標準體重及不同種屬動物的體形系數，得出多拉菌素注射劑用于小鼠的劑量，然后根據多拉菌素澆潑劑和多拉菌素注射劑的給藥劑量關系[9]，可知多拉菌素澆潑劑用于小鼠的劑量為5 mg·kg-1BW。在此基礎上，本試驗設低、中、高劑量組，用藥劑量分別為2、5、15 mg·kg-1BW，劑量間梯度系數為2.5～3，通過驅蟲試驗，摸索出最適劑量。多拉菌素澆潑劑驅殺小鼠體內線蟲時，低劑量組小鼠于給藥后第28天可檢出線蟲，中劑量和高劑量組在第35天檢出線蟲。可見多拉菌素澆潑劑驅殺小鼠體內線蟲，殘效期較長，效果明顯，其中中、高劑量組藥物效果最為顯著，藥物殘效期均達28 d以上。抗寄生蟲藥物的療效取決于藥物在寄生蟲寄生部位的藥物濃度和維持有效濃度的時間，而這些因素與藥物在動物體內的動力學特征密切相關[6]。根據以上試驗結果推測適合劑量的多拉菌素在小鼠體內維持有效的藥物濃度時間大約是35 d。

對第35天和第45天兩個時間點檢出線蟲數量進行方差分析發現，低、中、高劑量組檢出的線蟲數均極顯著低于空白對照組（P＜0.01），中、高劑量組均顯著低于低劑量組（P＜0.05），而中、高劑量組之間無明顯差異（P＞0.05）。可見多拉菌素澆潑劑中、高劑量組藥物效果最為顯著，驅殺小鼠體內線蟲的藥物殘效期均超過28 d，據此，推薦劑量為中劑量組即5 mg·kg-1BW。從各試驗組藥效維持時間來看，要徹底驅蟲凈化種群，必須按藥物的周期連續用藥。多拉菌素澆潑劑效果確實，但卻不像注射劑要求專業人員操作，該劑型操作簡單，使用方便，更適合在廣大農村基層推廣使用。

消化道線蟲對畜牧養殖業危害十分嚴重，畜禽感染線蟲后，往往生長發育受阻，增重緩慢，飼料報酬率降低，給養殖業造成嚴重的經濟損失。消化道線蟲感染率和感染強度均較高，原因之一是驅蟲不徹底，驅蟲間隔時間過長[10]。因而選擇高效低毒、使用方便的藥劑來防治，成了普遍關心的問題。多拉菌素用于驅殺畜禽體內外寄生蟲，目前國內報道的劑型只有注射劑，從本試驗多拉菌素澆潑劑一次用藥即徹底驅除凈化小鼠消化道線蟲的角度來講是可取的，因此多拉菌素澆潑劑的研制及在臨床的推廣使用有著廣闊的前景和重大的實際意義。

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