伊曲康唑肌肉注射液的藥代動力學研究

劉 云，崔鵬博，常 虹，陳 曦，陳 亮，李繼昌，劉運楓

（東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，哈爾濱 150030）

伊曲康唑是一種合成的親脂性三氮唑衍生物，其抗菌譜廣、性質穩(wěn)定、副作用小。對淺部真菌、酵母菌、其他絲狀菌和雙相菌等都有很好的效果，現(xiàn)在它已經(jīng)成為治療全身性真菌感染的理想藥物[1]。目前，伊曲康唑在我國人類醫(yī)藥批準上市的劑型有靜脈注射劑、口服溶液和膠囊，對其肌肉注射劑研究則很少[1-5]。動物與人類不同，大部分真菌感染為淺表性的，主要表現(xiàn)為皮膚真菌病。近年來我國奶牛皮膚真菌病的發(fā)病率呈上升趨勢，牛群一旦感染，很難根治。特別是犢牛感染皮膚真菌后，其生長發(fā)育會受到嚴重影響。同時真菌也會造成奶源的污染，引起人的真菌感染。本試驗以羥丙基-β-環(huán)糊精化合物做輔料對伊曲康唑分子進行包合制成肌肉注射劑，并以山羊為試驗動物，采用高效液相色譜-紫外檢測器對伊曲康唑肌肉注射劑在山羊體內的藥物代謝動力學進行研究，為研制出適合動物應用的抗真菌的藥物劑型奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 藥品、試劑與儀器

伊曲康唑原粉（上海志強生物科技有限公司，20060902）；1，2-丙二醇（上海試劑總廠）；聚乙二醇（PEG-400）（北京化工廠）；無水乙醇（分析純）（天津市永大化學試劑開發(fā)中心）；磷酸（分析純）（天津市北方天醫(yī)化學試劑廠）；甲醇（色譜純）（購自美國Burdick&Jackson公司）；乙腈（色譜純）（購自美國J.T.Baker公司）；三乙胺（色譜純）（購自天津市科密歐化學試劑有限公司）；島津-2010A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；KQ-500D型數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；TGL-16G型高速離心機（Centrifuge公司）。

1.2 色譜條件

色譜?。篧aters C18（150 mm×3.9 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%三乙胺緩沖液（85%磷酸調pH 2.5），體積比為 70： 30，用 0.45 μm 微孔濾膜過濾，超聲脫氣，流速：1 mL·min-1；紫外檢測波長：261 nm；柱溫為室溫；進樣量20 μL。

1.3 試驗設計

山羊3只，試驗前正常進食，按4 mg·kg-1在后肢內側肌肉進行注射伊曲康唑肌肉注射劑。在給藥后 0、0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、48 h頸靜脈采血。每個時間點采血3 mL，放入肝素鈉真空貯血管中，3 000 r·min-1離心15 min，取血漿1 mL轉移至帶蓋塑料離心管中密封，-20℃保存。

1.4 血樣預處理

取血漿1.0 mL于7 mL EP管中，加2.0 mL甲醇，混勻，沉淀蛋白，10 800 r·min-1離心10 min，取上清液2.0 mL，37℃水浴，氮氣吹干，將殘留物用120 μL流動相復溶，渦旋1 min，移入1.5 mL離心管，10 800 r·min-1離心5 min，取上清液，20 μL 進樣測定。

1.5 標準曲線制作

精確稱取伊曲康唑原粉1 mg，加甲醇溶解配制成0.01 mg·mL-1的伊曲康唑標準液，放于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｈ⊙蚩瞻籽獫{1 mL，共6份，用伊曲康唑標準液與空白血漿配制成血藥濃度分別為：20、50、100、200、500、1 000 ng·mL-1的血漿標準溶液。按“血樣預處理”中所述進行操作，所得數(shù)據(jù)進行線性回歸計算，得出標準曲線回歸方程。y=672.83x+17530，其中 R=0.9991，n=6，在10～500 ng·mL-1濃度范圍之內線性關系良好，最低血漿檢出濃度為20 ng·mL-1。

1.6 方法精密度和樣品回收率檢測

取羊空白血漿和伊曲康唑標準液制作高、中、低濃度的質控樣本，分別為20、100、500 ng·mL-1。3個樣本為一組。取5組質控樣本，于1 d日內連測5次，計算日內變異系數(shù)。每天取一組質控樣本，連測5 d，計算日間變異系數(shù)。取5組指控樣本連測5次，來計算相對回收率。另外，取聚乙二醇與伊曲康唑原粉分別配制成20、100、500 ng·mL-1濃度的質控樣本，三個為一組。取5組質控樣，連續(xù)測量，記錄其峰面積，來計算絕對回收率。

1.7 數(shù)據(jù)處理

將各時間點血漿藥物濃度的平均值，帶入MCPKP藥動學軟件，為一房室模型，權重系數(shù)為1/C2，進行處理，求出主要參數(shù)的均值和相對標準差。

2 結果與分析

2.1 色譜圖分析

從圖1中可知伊曲康唑的保留時間為3.19 min，重復性較好，主峰與雜質峰間分離良好，無干擾，空白血漿處理效果好，對主峰測定無影響。但是，主峰的對稱性稍差，存在輕微的拖尾現(xiàn)象。

圖1 伊曲康唑高效液相色譜Fig.1 Chromatogram of itraconazole

2.2 血藥濃度-時間曲線

按4 mg·kg-1進行肌肉注射，在肌內給藥后0.5、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、48 h采集頸靜脈血樣。處理后用高效液相色譜測定，結果帶入標準曲線回歸方程，測得伊曲康唑在羊體內的各點血藥濃度，結果見表1。三只羊的血藥濃度-時間曲線見圖2。

表1 山羊各時間點伊曲康唑血藥濃度測定Table 1 Results of itraconazole plasma concentration in goats at each time point

圖2 伊曲康唑在山羊體內各時間點血藥濃度變化曲線Fig.2 Plasma concentration variation curve of itraconazole in goats at each time point

2.3 血漿藥物代謝動力學參數(shù)

結果見表2。

將各時間點血漿藥物濃度的平均值帶入MCPKP藥動學軟件進行處理，計算主要藥代動力學參數(shù)，所得數(shù)據(jù)如表2所示。

2.4 方法精密度和樣品回收率檢測結果

結果見表3。

本試驗所測定的日間和日內相對誤差均小于10%，說明本方法的回收率和精密度測定完全符合生物樣本測定的要求。

表2 伊曲康唑在山羊體內藥代動力學參數(shù)Table 2 Pharmacokinetics parameters of itraconazole in goats

3 討 論

本試驗采用高效液相色譜法對伊曲康唑進行血藥濃度的測定，結果表明，與白林等方法比較[4]，本方法簡便易行，重復性好，專一性強，靈敏度高，能夠滿足伊曲康唑血藥濃度測定和藥代動力學研究。

當藥物以肌肉的方式注射進入羊體內后，伊曲康唑的藥代動力學參數(shù)并不夠十分理想，AUC、Kel、Cmax等均低于預測值，可能原因如下，當藥物以肌注的方式進入體內后，由于伊曲康唑具有很高的組織親和性，所以，會有一部分的伊曲康唑與肌肉組織結合，當伊曲康唑與肌肉組織結合后只有一小部分可以經(jīng)過重吸收進入循環(huán)系統(tǒng)，直接影響到了血藥濃度。但是，在這種血藥濃度情況下，也是可以達到對真菌病進行治療的目的。根據(jù)Cauwenbergh和陳佳試驗結果來看[5-6]，使用伊曲康唑進行一周的治療后，皮膚中的藥物濃度為血漿中的5～10倍，根據(jù)感染部位的不同，伊曲康唑水平可維持3～4周。王愛平[7]研究表明，伊曲康唑在角質組織中有蓄積作用，因為皮膚、毛發(fā)和甲是完全獨立的部位。一旦伊曲康唑進入這些器官，就不再重新分配到系統(tǒng)循環(huán)。根據(jù)伊曲康唑的最小抑菌濃度，這種方式給藥是可以達到抑菌效果的。因此，將伊曲康唑包合劑以肌注方式治療皮膚癬病，具有一定的可行性。

表3 伊曲康唑的精密度和回收率Table 3 Precision and recovery for the analysis of itraconazole

4 結論

利用高效液相色譜法檢測血漿中伊曲康唑含量、各項指標符合規(guī)定，方法有效、可行。通過對羊肌肉注射伊曲康唑藥代動力學分析，表明伊曲康唑包合劑肌肉注射后可達到一定的血藥有效濃度，肌內注射伊曲康唑包合劑注射液可以用于動物皮膚癬菌的治療。

[1] 白林,陳秀蘭,哈英霞,等.高效液相色譜法測定人血清中伊曲康唑濃度[J].解放軍藥學學報,1999,15(2):48-49.

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[3] 汪貽廣,齊曉飛,王建偉,等.伊曲康唑包合物注射液的制備及理化性質考察[J].沈陽藥科大學學報,2005,22(3):161-163.

[4] 白林,陳秀蘭,呂曉川.伊曲康唑膠囊的人體藥代動力學研究[J].人民軍醫(yī)藥學?？?1999(3):133-136.

[5] Cauwenbergh G,Degreef H,Heykants J,等.口服伊曲康唑在人皮膚中的藥代動力學研究[J].中國社區(qū)醫(yī)師,2006,22(18):19-21.

[6] 陳佳,吳安.伊曲康唑治療進展[J].中國皮膚性病學雜志,1998,12(6):386-387.

[7] 王愛平.伊曲康唑間歇沖擊治療趾甲真菌病療效和血清及甲中藥物水平臨床研究[J].臨床皮膚科雜志,2004,33(9):574-576.