治療奶牛臨床型乳房炎中藥復方的藥效學試驗

張 敏,王建發,林玉才,邢宇昕,孫東波,楊顆粒,武 瑞

(1.黑龍江八一農墾大學動物科技學院,黑龍江 大慶 163319;2.黑龍江省蘿北縣共青農場畜牧科,黑龍江 蘿北 154213)

奶牛乳房炎是危害奶牛養殖業的常見疾病,根據乳房和乳汁有無肉眼可見變化可將其分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎。臨床型乳房炎發病率較隱性乳房炎低,但引起的損失相對較嚴重。中藥以無污染、不易產生耐藥性等特點在治療奶牛臨床型乳房炎上得到了廣泛應用。本試驗結合臨床實踐要求,以中獸醫理論為依據,選用蒲公英、金銀花、柴胡、紅花等中藥配成2個以消腫為特點的治療奶牛臨床型乳房炎的中藥復方(復方1、復方2),并通過藥效學方法檢測其效果,以期篩選一種治療奶牛臨床型乳房炎的新中藥制劑。

1 材料與方法

1.1 材料 SD大鼠購自哈爾濱醫科大學實驗動物中心;蒲公英、金銀花、柴胡等購自大慶福瑞邦藥材公司;金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、乳房鏈球菌分離菌株由黑龍江八一農墾大學診斷研究室保存;其余試劑均為國產分析純。

1.2 方法

1.2.1 組方及提取液的制備 復方1由適量蒲公英、金銀花 、柴胡、芍藥、枳實、甘草等組成;復方 2由適量紅花、當歸、生地黃、川芎、金銀花、甘草等組成。采用水提醇沉法提取復方1、復方2有效成分,制備成生藥濃度為1 g/mL的藥液備用。

1.2.2 試驗動物分組 除急性毒性試驗和耳廓腫脹抑制試驗外,試驗動物均分為復方1組、復方2組、空白對照組、潑尼松龍對照組。

1.2.3 急性毒性試驗 根據預試驗確定復方1、復方2的0%(Dn)和100%(Dm)動物死亡劑量范圍分別為30.72～60.00 g/kg體重、107.52～210.00 g/kg體重。根據(Dm)/(Dn)值,確定正式試驗分組數為4,劑量組間的比值 r=1.25[1]。隨機挑選SD大鼠40只,分成4組,分別按劑量比腹腔注射不同濃度復方1、復方2,連續給藥7 d,觀察動物死亡情況。用改進Karber法計算復方1、復方2的LD50和 LD50的 95%可信限。

1.2.4 抗炎試驗 按照參考文獻[1]測定中藥復方對二甲苯致大鼠耳廓腫脹、羧甲基纖維素(CMC)囊中白細胞游出、棉球誘發大鼠肉芽組織增生及二甲苯致大鼠血管通透性升高的抑制情況。公式為:

腫脹抑制厚度=大鼠原始耳廓腫脹厚度-某一時間大鼠耳廓腫脹厚度

腫脹抑制率=(同一時間治療側抑制厚度-同一時間對照側抑制厚度)/同一時間治療側厚度

增生抑制率=(對照組肉芽平均重-用藥組肉芽平均重)/對照組肉芽平均重

1.2.5 體外抑菌試驗 病原菌復蘇后將懸液稀釋至1.5×(107～108)CFU/m L。菌液均勻平鋪于瓊脂平板表面,干燥、打孔,酒精燈火焰上稍微烘烤后,每孔加滿藥液,37℃培養24 h。觀察并記錄抑菌環直徑的大小(mm)。

1.3 數據處理 試驗數據采用SPSS 11.5軟件進行統計分析。

2 結果

2.1 急性毒性試驗結果 復方1和復方2的LD50分別為42.92 g/kg和 146.96 g/kg;LD50的95%可信限分別為39.00～47.25 g/kg和133.26～162.07 g/kg。

2.2 抗炎試驗結果

2.2.1 中藥復方對二甲苯致大鼠耳廓腫脹抑制試驗結果 由表1可知,24 h及48 h時,復方1組、復方2組與對照組相比均差異極顯著(P＜0.01),復方1組與復方2組相比差異不顯著(P＞0.05)。復方1、復方2在24 h時腫脹抑制率分別為67.33%、63.67%,在 48 h時腫脹抑制率分別為50.50%、50.55%。

2.2.2 中藥復方對大鼠羧甲基纖維素(CMC)囊中白細胞游出抑制試驗結果 由表2可知,3 h及7.5 h時,復方1組、復方2組與對照組相比均差異極顯著(P＜0.01),復方1組與復方2組相比均差異顯著(P＜0.05)。

2.2.3 中藥復方對棉球誘發大鼠肉芽組織增生抑制試驗結果 由表 3可知,復方1組、復方2組與對照組相比均差異極顯著(P＜0.01),復方1組與復方2組相比差異不顯著(P＞0.05)。復方1、復方2對棉球誘發大鼠肉芽組織增生抑制率分別為50.85%、45.30%。

表1 中藥復方對二甲苯致大鼠耳廓腫脹抑制厚度(mm)及腫脹抑制率(%)

表2 中藥復方對大鼠羧甲基纖維素囊中白細胞游出的影響

表3 中藥復方對棉球誘發大鼠肉芽組織增生抑制試驗結果

2.2.4 中藥復方對二甲苯致大鼠血管通透性升高抑制試驗結果 由表4可知,復方1組、復方2組與生理鹽水對照組相比均差異極顯著(P＜0.01);復方1組與潑尼松龍對照組相比差異極顯著(P＜0.01),復方2組與潑尼松龍對照組相比差異顯著(P＜0.05);復方1組與復方2組相比差異極顯著(P＜0.01)。

表4 中藥復方對二甲苯致大鼠毛細血管通透性升高抑制試驗結果

2.3 體外抑菌試驗結果 由表5可知,大腸桿菌對復方1屬中度敏感;對復方2屬低度敏感;金黃色葡萄球菌對復方1屬中度敏感;對復方2屬極度敏感;乳房鏈球菌對復方1和復方2均屬低度敏感。

表5 中藥復方對奶牛乳房炎3種主要致病菌抑菌效果 (mm)

3 討論與小結

目前,治療奶牛乳房炎多采用乳房灌注法。當奶牛患臨床型乳房炎時,乳腺腫脹,易造成乳導管系統的阻塞,影響藥物的均勻分布。本試驗綜合考慮以上因素,根據中獸醫理論,選取蒲公英、金銀花、柴胡、芍藥、紅花、當歸、生地黃等中藥自組復方。方中主藥蒲公英、金銀花味甘、性寒,具有清熱解毒的功效,在清解臟腑熱毒病證方面有顯著療效。方中柴胡既疏泄肝氣、又善和肝氣,芍藥滋養肝血又善于補肝體,二藥配伍,柔疏相濟、陰陽結合,以達疏肝和脾之功[2]。諸藥配合,使組方具有清熱解毒、活血化瘀、疏肝理氣、利水消腫之功效,主要用于對臨床型奶牛乳房炎的治療。

本試驗通過LD50法了解中藥復方的毒性程度、性質,探索發生毒性反應的量效關系。試驗過程中,腹腔注射給藥后,部分大鼠興奮、痙攣,出現縮成一團,呼吸加劇等癥狀,隨后大鼠死亡。對死亡大鼠剖檢可見,腸系膜充血,肝脾腫大、淤血,無其他異常。一般來說,LD50越大,藥物毒性越小[3],本試驗中復方1、復方2均屬實際無毒物質。本試驗通過復制大鼠二甲苯性耳腫脹模型、大鼠羧甲基纖維素囊中白細胞游出模型和棉球誘發大鼠肉芽組織增生模型測定中藥復方對急慢性非特異性炎癥的抗炎作用[4]。復方1、復方2對炎癥早期的腫脹均有顯著的抑制作用,對炎癥晚期纖維結締組織增生的抑制作用相近;復方2對炎癥中期白細胞游出的抑制作用優于復方1。奶牛發生乳房炎時,炎性介質損傷血管內皮屏障功能,導致其通透性增高,血漿蛋白滲出,引起乳房腫脹[5]。復方2可明顯抑制二甲苯性大鼠腹腔血管通透性升高,減輕組織腫脹。由抑菌試驗可知,復方1和復方2對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用。

復方2有較好的抗炎、抑菌、消炎作用,其作用機制還有待于進一步深入研究。

[1] 陳奇.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,2000.

[2] 徐海琴.試談芍藥在《傷寒論》中的配伍應用[J].國醫論壇,2005,20(1):2-3.

[3] 牛建榮,李劍勇,周緒正,等.“復方葛黃消炎液”刺激性及急性毒性試驗[J].動物醫學進展,2006,27(7):111-113.

[4] Vane J R,Botting R M.Anti-inflammatory drugs and their mechanism of action[J].Inflamm Res,1998,47(Suppl2):78-87.

[5] 肖貞良,孫耕耘.血管內皮屏障功能調節的研究進展[J].生理科學進展,1998,29(3):215-220.