RP-HPLC 法測定頭孢噻肟鈉的含量

陳向明，代現平，孫居鋒（濱州醫學院藥學院，煙臺市 264003）

頭孢噻肟鈉為第3代半合成頭孢類抗生素，對革蘭菌的抗菌活性高于第1、2代[1，2]。目前，測定頭孢噻肟鈉含量的方法有熒光光譜法[3]、高效液相色譜法[4～6]。但熒光光譜法需要對樣品進行衍生，受到的影響因素比較多。我國藥典采用是高效液相色譜法[7]，所用的流動相pH為8.4左右，對色譜柱的損害比較大。筆者在優化頭孢噻肟鈉生產工藝的過程中首先采用藥典中的方法測定產品的含量，結果組分保留時間長、峰形差。本試驗通過改變色譜條件，建立了新的測定頭孢噻肟鈉含量的方法，且分析時間短、靈敏度高。

1 儀器與試藥

Waters 600-2489型高效液相色譜儀（美國Waters公司，配備四元梯度泵、在線真空脫氣機、紫外-可見檢測器、手動進樣器）；Ultimate-C18柱（美國月旭公司）；EL20數顯酸度計（梅特勒-托利多儀器有限公司）；KQ-50E型超聲波清洗（昆山市超聲儀器有限公司）；EL204電子天平（北京賽多利斯系統有限公司）。

頭孢噻肟鈉對照品（中國藥品生物制品檢定所）；甲醇為色譜純（天津福晨化學試劑廠）；其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Ultimate-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；柱溫：25 ℃；流速：1.0 mL·min－1；進樣量：20 μL；紫外檢測波長：254 nm；流動相：1.0 g·L－1的三乙胺水溶液（用磷酸調pH值至6.2）-甲醇（68∶32）。色譜見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

精密稱取頭孢噻肟鈉對照品0.044 8 g，用純凈水溶解并定容至100 mL容量瓶中，精密量取5 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。進樣前貯藏于4℃冰箱中。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取頭孢噻肟鈉供試品約0.04 g，用純凈水溶解并定容至100 mL容量瓶中，精密量取5 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。進樣前貯藏于4℃冰箱中。

2.4 線性范圍及檢測限

取頭孢噻肟鈉對照品溶液用水依次2倍稀釋，稀釋后的溶液各進樣20μL，按照“2.1”項下色譜條件分析，直到稀釋后的樣品色譜峰高約為基線噪聲的3倍為止。以濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線并進行線性回歸，得回歸方程為Y＝2×108X+1.8×103（r＝0.999 9）。結果線性范圍為2.7×10－6～0.020 7 g·L－1。以3 倍信噪比計算出頭孢噻肟的檢測限為9×10－9g·L－1。

2.5 精密度試驗

取濃度為2.24×10－2、2.24×10－3、2.24×10－4g·L－1的頭孢噻肟鈉對照品溶液，按照“2.1”項下色譜條件分別重復測定6次，測定保留時間和峰面積，計算精密度。結果，頭孢噻肟鈉的保留時間的RSD依次為0.20%、0.19%、0.17%，峰面積的RSD依次為1.21%、1.07%、0.98%。

2.6 穩定性試驗

將“2.3”項中試品溶液用水稀釋10倍和100倍，將3種溶液按照“2.1”項下色譜條件每天測定1次，連續測定6 d。結果，峰面積的RSD分別為2.93%、2.61%、2.72%，表明頭孢噻肟鈉在試驗條件下穩定，且儀器的精密度良好。

2.7 回收率試驗

精密稱取頭孢噻肟鈉對照品9份，用水溶解并稀釋，制備相當于樣品溶液濃度的80%、100%、120%的溶液，每一濃度各3份，按照“2.1”項下色譜條件分別進樣20 μL，以外標法計算其含量，計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

2.8 樣品含量的測定

筆者在優化頭孢噻肟鈉合成工藝的過程中，得到了多批樣品，按照“2.1”項下色譜條件進樣，計算含量。結果，編號為1～8的樣品含量分別為91.40%、80.10%、94.98%、91.68%、95.29%、98.29%、92.95%、95.23%。

3 討論

藥典方法所用流動相為磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀60 mg與磷酸氫二鈉1.2 g，加水溶解并稀釋成1 000 mL）-甲醇（89∶11），筆者則采用Ultimate-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）分離頭孢噻肟鈉標準溶液。流動相的pH值約為8.4，對色譜柱固定相的損害比較大，且峰形差。峰形差的原因可能是因為頭孢噻肟鈉分子中含有多個N原子，為改善峰形，向流動相水相中加入1.0 g·L－1三乙胺，并用磷酸調節pH為弱酸性，發現流動相pH在5.0～6.5之間，分離效果都比較理想。筆者采用pH6.2的溶液作為流動相，取得了良好的分離結果，且具有分析時間短、分離度好、色譜峰對稱性好、靈敏度高等優點，不僅可以測定原料藥中頭孢噻肟鈉的含量，還可用于測定制劑中和生物樣品中的含量。

[1]陳新謙，金有豫主編.新編藥物學[M].第13版.北京：人民衛生出版社，1995：67.

[2]徐春麗，潘秀芳，鄭志昌，等.替硝唑葡萄糖注射液與注射用頭孢噻肟鈉的配伍穩定性[J].中國藥房，2010，21（4）：236.

[3]張遠馥，王金中，李永強，等.熒光法測定頭孢噻肟鈉的含量[J].分析科學學報，2008，24（1）：82.

[4]明金蘭，朱會琴.HPLC法測定頭孢噻肟鈉的含量[J].藥物分析雜志，2000，20（4）：271.

[5]孫淑芬，董偉林.高效液相色譜法測定血液中頭孢噻肟鈉的濃度[J].中國藥學雜志，2001，36（10）：697.

[6]朱建平，高燕霞，梁立革，等.關于頭孢噻肟鈉測定方法的商榷[J].中國藥事，2005，19（1）：40.

[7]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典（二部）[S].2005年版.北京：化學工業出版社，2005：195.