Bactec9120快速血培養系統性能試驗與臨床觀察

陳 婕 蔣顯勇

湘南學院醫學檢驗系(423000)

健康人的血液是無菌的。當人體局部感染向全身擴散和出現全身感染時，血液中可出現細菌。長期以來，臨床微生物實驗室血培養沿用傳統的培養方法。這些方法由于采用肉眼觀察培養液混濁、溶血、菌膜及指示劑是否因產酸變色等情況來提示有菌生長，因而需要相當長的時間及足夠的菌量，故不能及時為臨床提供診斷依據而延誤治療。湘南學院附屬醫院Bactec9120快速血培養系統能夠對血液細菌進行快速培養，其原理是:每一瓶培養瓶底部都有特殊的Novel CO2感應器，有半滲透性薄膜將培養基與感應器隔離，只有CO2能通過薄膜。當培養瓶內有微生物生長，其釋放的CO2可滲透到感應器，經水飽和后，產生H+，使pH發生改變，感應器的顏色也發生改變，所反射的光度亦不相同。反射光度傳送至電腦時，會自動連續記憶并制成曲線圖，由電腦判斷陰陽性，陽性者即時發出警報。我們將已知低濃度菌量來檢測Bactec9120血培養系統性能，并對湘南學院附屬醫院2008年4月至2009年7月臨床患者血液標本共105例，同時用Bactec9120快速血培養系統和常規法進行血培養，現將有關實驗情況報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 美國Bactec9120Dickinson公司生產的Bactec9120快速血培養儀及Sceptor細菌鑒定儀、標準血培養瓶、樹脂培養瓶及厭氧血培養瓶、厭氧樹脂培養瓶、Sceptor系統各系列反應板等，培養瓶及反應板均在有效期內使用。

1.1.2 實驗菌株

需氧或兼性厭氧菌及厭氧菌共15株:金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、奇異變形桿菌、洛菲不動桿菌、大腸埃希菌、傷寒沙門菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、脆弱類桿菌、丙酸桿菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌，以上細菌均系臨床菌株；湘南學院附屬醫院2008年4月至2009年7月住院患者血標本105份，全部臨床資料均經湘南學院附屬醫院相關科室證實。

1.1.3 抗菌藥物

慶大霉素、氨芐青霉素、頭孢唑啉、甲硝唑、氯潔霉素，由北京天壇制藥廠生產，上述藥物均在有效期內使用。

1.1.4 無菌人血

1.2 方法

1.2.1 在標準培養瓶和厭氧培養瓶內注入無菌人血5mL，然后將金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、糞腸球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、奇異變形桿菌、洛菲不動桿菌、大腸埃希菌、傷寒沙門菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌等11株已知菌液按最終菌液濃度10cfu/mL注入標準培養瓶中，將脆弱類桿菌、丙酸桿菌、雙歧桿菌、乳酸桿菌等4株已知菌液按上述濃度注入厭氧培養瓶內，立即放入Bactec9120快速血培養儀中培養，并計時，待該細菌生長陽性警報信號發出后，計時以確定該菌株檢出時間，同時抹片革蘭染色鏡檢，用Sceptor細菌鑒定儀或常規法鑒定。5d后陰性培養瓶全部轉種血平皿或厭氧平皿，仍無菌生長者為陰性。

1.2.2 需氧及厭氧樹脂培養瓶吸附抗菌藥物的性能檢測法菌藥物的需氧及厭氧樹脂瓶中都生長，而加入抗菌藥物的標準培養瓶和厭氧培養瓶中都不生長，在無抗菌藥物的各種培養瓶中都生長，結果見表2。

表1 15株細菌檢出時間

表2 需氧及厭氧樹脂瓶吸附抗菌藥物性能比較

①測抗菌藥物MIC，其金黃色葡萄球菌和溶血性鏈球菌在慶大霉素、氨芐青霉素、頭孢唑啉三種藥物MIC值相等，分別為4、0.5、8μg/mL；大腸埃希菌和洛菲不動桿菌在慶大霉素、氨芐青霉素此兩種藥物MIC值相同，分別為4、8μg/mL；乳酸桿菌在甲硝唑、氯潔霉素MIC值分別為2、5μg/mL。②將金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌和洛菲不動桿菌分別注入需氧樹脂培養瓶和非樹脂培養瓶內；乳酸桿菌注入厭氧樹脂培養瓶和厭氧非樹脂培養瓶內。③將無菌人血按每瓶5mL量分別注入各種培養瓶內。④抗菌藥物按各菌株不同藥物MIC值的2倍分別注入上述培養瓶內；同時將菌液加入不含抗菌藥物的各培養瓶內以作對照，均放入Bactec9120培養儀內培養，待該細菌生長陽性警報信號發出后，計時以確定該菌株檢出時間。

1.2.3 無菌操作，在不同時期，對105例患者無菌采血2～5mL，快速注入培養瓶中，送入Bactec9120培養儀中培養，待細菌生長陽性警報發出后，計時以確定細菌檢測時間，同時抹片革蘭染色鏡檢，用Sceptor細菌鑒定儀鑒定，5d后陰性培養瓶全部轉種血平皿，仍無生長者報陰性。

1.2.4 常規血培養法[1]，在對105例患者采血同時，做常規血培養。

2 結 果

2.1 15株細菌在Bactec9120培養儀檢出時間，以奇異變形桿菌檢出時間最短，為5.5h以脆弱類桿菌檢出時間最長，為18.5h，結果見表1。

2.2 需氧及厭氧樹脂培養瓶吸附抗菌藥物性能檢測，金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸埃希菌、洛菲不動桿菌、乳酸桿菌在加入抗

2.3 105份血培養標本在Bactec9120培養檢出陽性14例，其中檢出14株細菌，常規血培養法檢出12例陽性，其中檢出12株細菌，結果見表3。

表3 105例臨床血培養結果比較

3 討 論

從表1結果觀察，11種需氧或兼性厭氧菌株檢出時間為5.5～13h，4種厭氧菌株檢出時間為5.5～18.5h，與以往湘南學院附屬醫院常規血培養陽性3～4d時間相比，細菌檢出時間迅速提前，與文獻報道該系統檢測結果基本接近[2]。說明Bactec9120血培養系統快速檢出細菌性能好。

從表2結果觀察，加入藥物的需氧樹脂瓶和厭氧樹脂瓶能吸附抗菌藥物，均已長菌；而加入藥物的非樹脂需氧及非樹脂厭氧培養瓶由于抗菌藥物抑菌作用而致無菌生長，說明樹脂培養瓶能有效吸附抗菌藥物；未加藥物的所有培養瓶都長菌。因此，對已使用過抗菌藥物治療的患者應使用樹脂瓶培養。表2中未加抗菌藥物5種菌株樹脂瓶檢出時間為5.5～11h，而無樹脂瓶檢出細菌時間為7.1～13.6h，樹脂瓶明顯比非樹脂瓶檢出細菌時間短，可能與樹脂瓶培養液已被濃縮，其營養成分濃度較高有關。

從表3結果觀察，Bactec9120儀器血培養陽性率高、快速，陽性率為13.3%，比常規法11.4%高出1.9%。

Bactec9120自動血培養儀由于臨床應用時間短，尚未進行充分的臨床評價，許多性能指標主要依據廠商的試驗結果，因此在實際應用中存在不同程度的問題，如白血病患者血中粒細胞含量過高，代謝產生大量的CO2，而產生假陽性；應用聚腦茴香鈉(SPS)為抗凝劑，當SPS含量過高時對于肺炎鏈球菌就有抑制作用[3]。

總之，Bactec9120最大優點是能對血培養進行24h連續監測，因此能快速檢出細菌。但在正常上班8h以外的時間尤其是夜間常常不能及時對陽性結果進行處理，而且無法打印結果報告。因此要充分發揮Bactec9120進行快速血培養的作用，除加強必要的管理措施外，還需實現全院微機聯網。快速陽性報警可以早期陽性報告，抹片后做快速藥敏報告，還可以做分級細菌報告，那么就更能快速的檢出陽性。

[1]俞樹榮.微生物學和微生物學檢驗[M].2版.北京:人民衛生出版,1997:136-137.

[2]許淑珍,張淑蘭.Bactec9120血培養系統檢測細菌影響因素的探討[J].中華醫學檢驗雜志,2004,20(5):272-274.

[3]張秀珍.當代細菌檢驗與臨床[M].2版.北京:人民衛生出版社,2003.